生物学常用染色液归纳

1、 17/17 常用染料介绍（一）天然染料 1、苏木精 苏木精是从南美的苏木（热带豆科植物）干枝中用乙醚浸制出来的一种色素，是最常用的染料之一。苏木精不能直接染色，必须暴露在通气的地方，使他变成氧化苏木精（又叫苏木素）后才能使用，这叫做“成熟”。苏木精的“成熟”过程需时较长，配置后时间愈久，染色力愈强。被染材料必须经金属盐作媒剂作用后才有着色力。所以在配制苏木精染剂时都要用媒染剂。常用的媒染剂有硫酸铝按、钾明矾和铁明矾等。 苏木精是淡黄色到锈紫色的结晶体，易溶于酒精，微溶于水和甘油，是染细胞核的优良材料，他能把细胞中不同的结构分化出各种不同的颜色。分化时组织所染的颜色因处理的情况而异，用酸性溶液

2、（如盐酸酒精）分化后呈红色，水洗后仍恢复青蓝色，用碱性溶液（如氨水）分化后呈蓝色，水洗后呈蓝黑色。2、洋红洋红又叫胭脂红或卡红。一种热带产的雌性胭脂虫干燥后，磨成粉末，提取出虫红，再用明矾处理，除去其中杂质，就制成洋红。单纯的洋红不能染色，要经酸性或碱性溶液溶解后才能染色。常用的酸性溶液有冰醋酸或苦味酸，碱性溶液有氨水、硼砂等。洋红使细胞核的优良染料，染色的标本不易褪色。用作切片或组织块染都适宜，尤其适宜于小型材料的整体染色。用洋红配成的溶液染色后能保持几年。洋红溶液出现浑浊时要过滤后再用。（二）人工染料 人工染料，即苯胺染料或煤焦油染料，种类很多，应用极广。它们的缺点是经日光照射容易褪色，苯

3、胺蓝、亮绿、甲基绿等更易褪色。在制片中注意掌握酸碱度，并避免日光直射，也能经几年不褪色。1、酸性品红 酸性品红是酸性染料，呈红色粉末状，能容于水，略溶于酒精（0.3%）。他是良好的细胞制染色剂，在动物制片上应用很广，在植物制片上用来染皮层、髓部等薄壁细胞和纤维素壁。他跟甲基绿同染，能显示线粒体。组织切片在染色前先浸在带酸性的水中，可增强它的染色力。酸性品红容易跟碱起作用，所以染色过度，易在自来水中褪色。2、刚果红 刚果红是酸性染料，呈枣红色粉末状，能溶于水喝酒精，遇酸呈蓝色。他能作染料，也用作指示剂。他在植物制片中常作为苏木精或其他细胞染料的衬垫剂。他用来染细胞质时，能把胶制或纤维素染成红色。

4、在动物组织制片中用来染神经轴、弹性纤维、胚胎材料等。刚果红可以跟苏木静作二重染色，也可用作类淀粉染色，由于他能溶于水和酒精，所以洗涤和脱水处理要迅速。3、甲基蓝 甲基蓝是弱酸性染料，能溶于水和酒精。甲基蓝在动植物的制片技术方面应用极广。他跟伊红合用能染神经细胞，也是细菌制片中不可缺少的染料。它的水溶液是原生动物的活体染色剂。甲基蓝极易氧化，因此用他染色后不能长久保存。4、固绿固绿是酸性染料，能溶于水（溶解度为4%）和酒精（溶解度为9%）。固绿是一种染含有浆质的纤维素细胞组织的染色剂，在染细胞和植物组织上应用极广。他和苏木精、番红并列为植物组织学上三中最常用的染料。5、苏丹苏丹是弱酸性染料，呈红

5、色粉末状，易溶于脂肪和酒精（溶解度为0.15%）。苏丹是脂肪染色剂。6、伊红 这类染料种类很多。常用的伊红Y，是酸性染料，呈红色带蓝的小结晶或棕色粉末状，溶于水（15摄氏度是溶解度达44%）和酒精（溶于无水酒精的溶解度为2%）。伊红在动物制片中广泛应用，是很好的细胞质染料，常用作苏木精的衬染剂。7、碱性品（复）红 碱性品红是碱性染料，呈暗红色粉末或结晶状，能溶于水（溶解度1%）和酒精（溶解度8%）。碱性品红在生物学制片中用途很广，可用来染色胶原纤维、弹性纤维、嗜复红性颗粒和中枢神经组织的核质。在生物学制片中用来染维管束植物的木质化壁，又作为原球藻、轮藻的整体染色。在细菌学制片中，长用来鉴别结核

6、杆菌。在 尔根氏反应中用作组织化学试剂，已核查脱氧核糖核酸。8、结晶紫 结晶紫是碱性染料，能溶于水（溶解度9%）和酒精（溶解度8.75%）。结晶紫在细胞学、组织学和细菌学等方面应用极广，是一种优良的染色剂。他是细胞核染色常用的，用来显示染色体的中心体，并可染淀粉、纤维蛋白、神经胶质等。凡是用番红和苏木精或其他染料染细胞核不能成功时，用它能得到良好的结果。用番红和结晶紫作染色体的二重染色，染色体染成红色，纺锤丝染成紫色，所以也是一种显示细胞分裂的优良染色剂。用结晶紫染纤毛，效果也很好。用结晶紫染色的切片，缺点是不易长久保存。9、龙胆紫 龙胆紫是混合的碱性染料，主要是结晶紫和甲基紫的混合物。在必要

7、是，龙胆紫能跟结晶紫互相替用。医药上用的紫药水，主要成分是甲基紫，需要时能代替龙胆紫和结晶紫。10、中性红 中性红是弱碱性染料，呈红色粉末状，能溶于水（溶解度4%）和酒精（溶解度1.8%）。它的碱性溶液中呈现黄色，在强碱性溶液中呈蓝色，而在弱酸性溶液中呈红色，所以能用作指示剂。中性红无毒，常做活体染色的染料，用来染原生动物和显示动植物组织中活细胞的内含物等。陈久的中性红水溶液，用作显示尼尔体的常用染料。11、番红 番红是碱性染料，能溶于水和酒精。番红是细胞学和动植物组织学生常用的染料，能染细胞核、染色体和植物蛋白质，示维管束植物木质化、木栓化和角质化的组织，还能染孢子囊。12、亚甲蓝或美蓝亚甲

8、蓝或美蓝是碱性染料，呈蓝色粉末状，能溶于水（溶解度9.5%）和酒精（溶解度6%）。亚甲蓝是动物学和细胞学染色上十分重要的细胞核染料，其优点是染色不会过深。 13、甲基绿甲基绿是碱性染料。它是绿色粉末状，能溶于水（溶解度8%）和酒精（溶解度3%）。甲基绿是最有价值的细胞和染色剂，细胞学上常用来染染色质，跟酸性品红一起可作植物木质部的染色。1. 碘硫酸法植物细胞细胞壁的主要成分是纤维素，纤维素被硫酸水解后，遇碘呈蓝色反应。因此用碘硫酸法可鉴定细胞壁的成分。试剂配制方法：1% 碘液 将1.5 克碘化钾溶于100 毫升的蒸馏水中，待完全溶解后，加入1 克碘，震荡溶解。66.5% 硫酸 7 份浓硫酸加入

9、3 份蒸馏水配制而成。配制时要将浓硫酸慢慢地加入水中，并不断地用玻璃棒搅拌，否则会因急剧发热，而使容器炸裂。2. 苏丹反应苏丹可将细胞中脂肪、栓质、角质染为桔红色，因此可用此染料显示出上述物质在细胞中的分布和位置。配制方法：将苏丹 （或苏丹）染料0.1 克，溶于10 毫升95% 酒精中，然后加入10 毫升甘油。3. 间苯三酚反应法间苯三酚反应是植物显微化学中确定木质化细胞壁的最常用和最简单的方法。这一反应的原理是当间苯三酚在酸性环境下与细胞壁中的木质素相遇时，发生樱桃红色或紫红色反应。其方法是将要鉴定的切片先用一滴1mol/L 盐酸浸透（间苯三酚要在酸性环境下才能与木质素起作用），然后滴一滴5

10、-10% 间苯三酚的85% 酒精溶液，木质化的细胞壁即发生颜色反应。4碘液测试淀粉法淀粉遇碘呈蓝色反应，它是鉴定淀粉的最常用方法。碘液配制方法：将2 克碘化钾放入5 毫升蒸馏水中，加热使其完全溶解；然后加入1克碘，完全溶解后用蒸馏水稀释至300 毫升，放入具有毛玻璃塞的棕色玻璃瓶中，置于暗处保存。测定淀粉时，可将上述溶液稀释2-10 倍，使染色不致过深，效果更好。5. 压片法常用的染料(1) 醋酸洋红 为压片法中最常用的染料。配制方法是：先将100 毫升45% 醋酸水溶液放于烧瓶中煮沸，移去火焰，停止加热。然后缓慢加入1 克洋红粉末，全部加入后再煮沸1-2 分钟。此时可将一枚生锈铁钉用棉线悬入

11、溶液中约1 分钟后取出（铁为媒染剂）。静置12 小时后经过过滤，放入磨口玻璃塞棕色瓶中保存备用。(2) 石炭酸品红 为近年创用的一种优良核染色剂，将细胞核和染色体染为红紫色，细胞质一般不着色，背景清晰。其配制方法有二：配方：原液A：取3 克碱性品红溶于100 毫升的70酒精中（此液体可长期保存）。原液B：取10 毫升原液A，加入90 毫升5% 的石炭酸(酚)水溶液中(可保存两周)。染色液：取55 毫升原液B 加6 毫升冰醋酸和6 毫升37% 甲醛。此染色液因含有较多的甲醛，可使原生质体硬化，而能保持其固有的形态。但也因此不易使组织软化，因而不太适用于植物组织的染色体压片染色（本染色液适于植物原

12、生质体培养中使用）。在此基础上加以改进的配方，则可普遍地用于一般植物组织的染色体压片的染色。配方：取配方中的染色液20 毫或加80 毫升45% 醋酸和1.8 克山梨醇。染色液配制后为淡品红色，如立即使用染色较浅。放置2 周后，染色能力显著增强，而且放置时间越久，染色效果越好。6铬酸硝酸离析法为了观察一个细胞完整的立体形态结构，可以用一些化学药品把细壁中的中层物质（果胶质）溶解，使细胞分离散开，便于观察。离析前先把材料洗净，用刀切成1-2 毫米宽的狭条（如叶片）或切成火柴棍粗细的长约1 厘米的小条(如根或茎)。然后把切好的材料放进小玻璃瓶中，加入离析液（加入量约为材料的20 倍），塞紧瓶塞，放于

13、30-40 温箱中。浸渍时间因材料性质而异，叶片和幼嫩的根茎组织3-4 小时即可，而有些次生结构（如木质部）则需要更长的时间。离析情况应随时检查，检查的方法是取少许离析材料，放在载玻片上，加一滴水，盖上盖玻片，然后用解剖针尖端轻轻敲打，如果材料分离则表明浸渍时间已够。浸渍时间超过一天以上时，应更换离析液一次。离析时间已够的材料，用水洗净后放入70% 酒精中保存。离析液配方：10% 铬酸 1份10%硝酸 1 份两种溶液应在使用时才混合，混合均匀后再使用。二、常用染色液的配制1、吕氏 (Loeffer )碱性美蓝染液 A液：美蓝（methylene blue）0.06g95%乙醇30mL B液：K

14、OH0.01g蒸馏水100mL 分别配制A液和B液，配好后混合即可。 2、齐氏（Ziehl）石炭酸复红染色液 A液：碱性复红（basic fuchsin）0.3 g95%乙醇10mL B液：石炭酸5.0 g蒸馏水95 mL 配制方法：将碱性复红在研钵中研磨后，逐渐加入95%乙醇，继续研磨使其溶解，配成A液。 将石炭酸溶于水中，配成B液。 混合A液及B液即成。通常可将此混合液稀释510倍使用，稀释液易变质失效，一次不宜多配。3、革兰氏（Gram）染色液 （1） 草酸铵结晶紫染液 A液：结晶紫（crystal violet）2g95%乙醇20mL B液：草酸铵（ammonium oxlate）0.

15、8g蒸馏水80mL 混合A液及B液，静置48h后使用。 （2） 卢戈氏（Lugol）碘液 碘片1g碘化钾2g蒸馏水300mL 配制方法：先将碘化钾溶解在少量水中，再将碘片溶解在碘化钾溶液中，待碘全溶后，加足水分既成。 （3） 95%的乙醇溶液 （4） 番红复染液 番红（safranine O）2.5g95%乙醇100mL 取上述配好的番红乙醇溶液10mL与80mL蒸馏水混匀既成。 4、芽孢染色液 （1） 孔雀绿染液 孔雀绿（malachite green）5g蒸馏水100mL （2） 番红水溶液 番红0.5g蒸馏水100mL （3） 苯酚品红溶液 碱性品红11g无水乙醇100mL 配制方法：取

16、上述溶液10mL与100mL5%的苯酚溶液混合，过滤备用。 （4） 黑色素（nigrosin）溶液 水溶性黑色素10g蒸馏水100mL 配制方法：称取10g黑色素溶于100mL蒸馏水中，置沸水浴中30min后，滤纸过滤两次，补充水到100mL，加0.5g甲醛，备用。 5、荚膜染色液 （1） 黑色素水溶液 黑色素5g蒸馏水100mL福尔马林（40%甲醛）0.5mL 配制方法：将黑色素在蒸馏水中煮沸5min，然后加入福尔马林作防腐剂。 （2） 番红染液 与革兰氏染液中番红复染液相同。 6、鞭毛染色液 （1） 硝酸银鞭毛染色液 A液：单宁酸5gFeCl31.5g蒸馏水100mL福尔马林（15%）2m

17、LNaOH（1%）1mL 冰箱内可以保存37天，延长保存期会产生沉淀，但用滤纸除去沉淀后，仍能使用。 B液：AgNO32g蒸馏水100mL 配制方法：待AgNO3溶解后，取出10mL备用，向其余的90mL AgNO3中滴入NH4OH，使之成为很浓厚的悬浮液，再继续滴加NH4OH，直到新形成的沉淀又重新刚刚溶解为止。再将备用的10mL AgNO3慢慢地滴入，则出现薄雾，但轻轻摇动后，薄雾状沉淀又消失，再滴入AgNO3，直到摇动后仍呈现轻微而稳定的薄雾状沉淀为止。冰箱内保存通常10天内仍可使用。如雾 重，则银盐沉淀出，不宜使用。 （2） Leifson氏鞭毛染色液 A液：碱性复红1.2g95%乙醇

18、100mL B液：单宁酸3g蒸馏水100mL C液：NaCl1.5g蒸馏水100mL 临用前将A，B，C液等量混合均匀后使用。三种溶液分别于室温保存可保存几周，若分别置冰箱保存，可保存数月。混合液装密封瓶内置冰箱几周仍可使用。（六）染色剂1、细菌染色剂配方一 齐氏（Ziehl）石炭酸品红染液甲液 取石炭酸5克，溶解在95毫升蒸馏水中。乙液 取0.3克碱性品红，放入研钵中研磨，逐渐加入10 毫升95%酒精，继续淹没，使它溶解。将甲液和乙液混合后，摇匀，过滤，装瓶，备用。配方二 罗氏（Loefflers）美蓝染液甲液 取5克美蓝，溶于100 毫升95%酒精中，制成美蓝酒精饱和液。乙液 取氢氧化钾0

19、.01 克（或1%氢氧化钾溶液1 毫升），溶液也可用于放线菌染色，0.1%浓度可用于酵母菌染色。配方三 革兰氏（Grams）染液用此液染色因先用甲液染色，再加乙液固定，用丙液处理，最后用丁液复染。四种液体的配方如下：甲液（结晶紫液）（1）结晶紫 2克 95%酒精 20 毫升（2）草酸铵 0.8 克 蒸馏水 80毫升使用钱江（1）、（2）液相混，静置48 小时后使用。乙液(碘液)碘 1克 碘化钾 2克 蒸馏水 300 毫升将碘化钾溶于少量蒸馏水中，然后加入碘，待碘全部溶解后，加水稀释至300 毫升。丙液 95%酒精溶液丁液（番红花红液）2.5%番红花红酒精溶液 10毫升 蒸馏水 100毫升2、细

20、菌特殊染色剂配方一 芽孢染液 用此配方染色是用甲液染色后，用乙液复染。甲液 取5克孔雀绿，加入少量蒸馏水，使它溶解后，用蒸馏水稀释到100毫升，即成孔雀绿染液。乙液 取番红花红0.5克，加入少量蒸馏水，使它溶解后，用蒸馏水稀释到100 毫升，集成番红花红复染液。配方二 荚膜染液 此配方先用甲液染色，后用乙液复染。甲液 取结晶紫0.1 克，溶于少量蒸馏水后，加水稀释到100 毫升，再加入0.25 毫升冰醋酸一结晶紫染液。乙液 取硫酸铜（ ）31.3 克，溶于少量蒸馏水后，加水稀释到100毫升，即成20%硫酸铜脱色剂。配方三 鞭毛染液甲液饱和明矾溶液 2 毫升 5%石炭酸溶液 5 毫升20%丹宁酸

21、溶液 2毫升乙液碱性品红 11 克 95%酒精 100毫升使用前取甲液9 毫升和乙液1毫升相混，过滤即可。3、植物细胞壁染色剂配方一 纤维素细胞壁染液（）取固绿0.1 克，溶于100 毫升95%酒精中，即成0.1%固绿酒精溶液。该液能染色纤维素细胞壁，还用于动植物中作浆质染色剂。配方二 纤维素细胞壁染液（）氯化锌 20 克 碘化钾 6.5 克碘 1.5 克 蒸馏水加至100 毫升先把氯化锌溶于少量蒸馏水中，再加入6.5克碘化钾，在碘完全溶解后，用蒸馏水稀释到100毫升，即成碘氯化锌溶液。该染液能把细胞壁染成紫色，胞质染成淡黄色，胞核染成棕色。配方一 纤维素细胞壁染液（）甲液 取1克碘和1.5克

22、碘化钾，溶于100毫升蒸馏水中，即成1%碘液。乙液 取7份硫酸和3份蒸馏水相混，即成66.5%硫酸溶液。染色时，在材料上滴加甲液，再加一滴乙液，纤维素细胞壁就染成黄色。配方四 木质化细胞壁染液（）硫酸化苯胺（或盐酸话本安） 1份蒸馏水 70 份 95%酒精 30份硫酸 30 份将上述各组分相混，将细胞材料放入混合液里染色，可是木质化细胞壁呈鲜黄或姜黄色。配方五 木质化细胞壁染液（）取间苯三酚45克，溶于100毫升95%酒精中，即成间苯三酚酒精液。先在材料上滴上1 滴浓盐酸，然后滴上间苯三酚酒精液1 滴，木质化的细胞壁就染上樱红或紫红色。配方六 木质化细胞壁染液（）取1 克番红，溶于99毫升蒸馏

23、水中，即成1%番红溶液。4、细胞质染色剂配方一 伊红染液伊红染液一般配用水溶液和酒精溶液两种。（1）取1 克伊红，溶于99毫升蒸馏水中，即成1%伊红水溶液（市售红墨水内含伊红成分，可以用红墨水稀释液来代替本溶液）。（2）取1 克伊红，溶于99 毫升70%酒精中，即成1%伊红酒精溶液。配方二 甲基蓝染液取1克甲基蓝，溶于29 毫升70%酒精中，加入70 毫升蒸馏水，即成1%甲基蓝染液。配方三 亮绿染液取0.5 克亮绿，溶解在100 毫升蒸馏水中，即成0.5%亮绿溶液。5、细胞核染色剂配方一 甲基绿染液取1克甲基绿，溶于99 毫升蒸馏水中，加入1毫升冰醋酸。本染液能染细胞核，还用来染木质化细胞壁。

24、配方二 龙胆紫染液取1 克龙胆紫，溶于少量2%醋酸溶液中，加2%醋酸溶液，直到溶液不呈深紫色止。配方三 美蓝（亚甲基蓝）染液取0.5 克美蓝，溶于30毫升95%酒精中，加100 毫升0.01%氢氧化钾溶液，保存在棕色瓶内 。此溶液能染细胞核，还用来染细菌、血和神经组织等。配方四 硼砂洋红染液取4克硼砂，溶于96毫升蒸馏水中。再加入2 克洋红，加热溶解后煮沸30分钟，静置3 日，用100 毫升70%酒精冲淡，放置24 小时后过滤。此染液能染细胞核，还用来染糊粉粒和一般动物、植物的整体染色，如水螅、血吸虫等整体标本。配方五 德氏（Delafields）苏木精染液甲液 取1 苏木精，溶于6 毫升无水

25、酒精中，即成苏木精酒精溶液。乙液 取10克铵矾溶于90 毫升蒸馏水中，即成10%铵矾水溶液。取甲液逐滴加入到乙液中，用纸遮盖，放在阳光明亮处，使它充分氧化。34 天后将溶液过滤，在滤液中加入25 毫升甘油和25毫升甲醇，保存在密闭玻璃瓶内。静置12 个月，待该液颜色变深时过滤，可长久保存。本染液是染色体的优良染色剂，除能染细胞核外，还用来染纤维素、细胞壁和动植物组织。配方六 席夫（Schiffs）试剂称取0.5 克碱性品红，加到100毫升煮沸的蒸馏水中，再微微加热5 分钟，不断搅拌，使它溶解。在溶液冷却到50 摄氏度时过滤，滤液中加入10毫升1N 盐酸。再冷却到25 摄氏度时加入0.5 克偏重

26、亚硫酸钠（ ）或无水亚硫酸氢钠（ ）。把溶液装入棕色试剂瓶内，摇荡后，塞紧瓶塞，放在黑暗中24 小时。在溶液颜色退到淡黄色时，加入0.5 克活性炭，用力摇荡1 分钟，过滤后把滤液贮在棕色试剂瓶内，塞紧瓶塞，滤液应该是无色的。在使用时勿让溶液长时间暴露在空气中和见光（瓶外用黑纸或暗盒遮光）。如溶液变成红色，即失去染色能力。碱性品红是较强的核染色剂，在孚尔根氏（Feulgens）反应中作为组织化学试剂，以检查DNA。6、染色体染色剂配方一 醋酸洋红染液取45 毫升冰醋酸，加蒸馏水55 毫升，煮沸后徐徐加入洋红1 克，搅拌均匀后加入1 颗铁锈钉，煮沸10分钟，冷却后过滤，贮存在棕色瓶内。配方二 醋酸

27、地衣红染液取45 毫升醋酸，跟55 毫升蒸馏水相混，加热，徐徐加入地衣红粉末12克，搅拌溶解后，缓缓煮沸2小时。冷却后过滤，贮存在棕色瓶里。配方三 龙胆紫染液取1 克龙胆紫，用少量蒸馏水溶解后，加蒸馏水，稀释到100 毫升，保存在棕色瓶内。配方四 甲苯胺蓝染液取0.5 克甲苯胺蓝，溶解在100毫升蒸馏水中，即成0.5%甲苯胺蓝水溶液。7、线粒体染色剂配方一 詹钠斯绿B(Janus green 酒精饱和溶液取125 毫升詹钠斯绿B，加入到62.5 毫升无水酒精中，搅拌，即成烟鲁绿B酒精饱和染液。（1）取詹钠斯绿酒精饱和染液按1：30000 比例加蒸馏水稀释，用来染原生动物线粒体。(2)取詹钠斯绿

28、酒精饱和液，按1：10000 比例加蒸馏水稀释，用来染新鲜蛙血线粒体。配方二 詹钠斯绿B中性红染液先配制詹钠斯绿B和中性红酒精饱和液。詹钠斯绿酒精饱和液见配方一。中性红酒精饱和液配制方法：取125毫升中性红，加入到50 毫升无水酒精中，搅拌。在10 毫升生理盐水（两栖类生理盐水浓度为0.65%；哺乳类生理盐水浓度为0.9%）中，加入詹钠斯绿B酒精饱和液0.71 毫升，中性红酒精饱和液2 毫升，混合。詹钠斯绿B稀释液是活体染液。8、脂肪染色剂苏丹染液取0.1 克苏丹，溶于20 毫升95%酒精中，即成0.5%苏丹染液。这染液能染脂肪，还能染木栓、角质层。9、血液染色剂配方一 瑞氏（Wrights）

29、染液取瑞氏染料粉末0.1 克和甲醇60 毫升。把染料放在研钵内，加少量甲醇研磨，使染料溶解，然后把溶解的染料倒入干净的棕色玻璃瓶。并用完甲醇为止。配制好的染液在室温中保存，即可使用。新鲜配制的染液偏碱性，放置后呈酸性，染液贮存愈久染色愈好。这染液的适宜pH 值是6.46.8。因此，染色时加入缓冲液，可维持一定的酸碱度，使染色效果更好。这种染液除能染血液，还能染疟原虫。瑞氏染料可以自制。在100 毫升0.5%碳酸氢钠水溶液里加入1 克美蓝，溶解后放在锅内，蒸上1 小时，取出冷却后过滤。在滤液里加入0.1%伊红水溶液500 毫升，随加、随搅拌，使混合液呈紫色。静置一夜后，用滤纸过滤。滤纸上的沉淀物

30、，在室内风干或放在干燥箱内，充分干燥后研磨成粉末，即成瑞氏染料。配方二 甲基紫染液取甲基紫0.5克，加到100 毫升生理盐水中，溶解后加入冰醋酸0.02 毫升。10、吸虫染色剂梅耶氏（Mayers ）明矾洋红染液取铵明矾（硫酸铝铵）5 克，溶于95毫升蒸馏水中，再加入0.5 克洋红酸，加热溶解，冷却后过滤。在滤液中加入少量防腐剂，如麝香草酚、樟脑粉、水杨酸钠、苯酚（石炭酸）等，以防生霉。这种染液适合于染小型动物材料，如吸虫等寄生虫的整体，也能染高等植物的表皮和蕨类植物的原叶体。11、活体染色剂配方一 中性红染液先配成1%中性红水溶液（1 克中性红溶于100 毫升蒸馏水中）。取这种溶液1 毫升，

31、用0.6%生理盐水（或蒸馏水）稀释到50 毫升，即成0.02%中性红水溶液，贮存在棕色瓶里，放在黑暗处。本染液用来显示原生动物的食物泡以及动植物组织中活细胞的内含物等。配方二 尼罗蓝（Nile Blue）染液取0.1 克尼罗蓝，溶解于10001500 毫升蒸馏水中，即成尼罗蓝染液。这种染液能把原生动物大核染成绿色，食物泡染成蓝色。配方三 亚甲蓝染液取0.1 克亚甲蓝，溶解于1000毫升蒸馏水中，即成亚甲蓝染液。这种染液用于原生动物的活体染色。12、透明骨骼标本染色剂配方一 茜素红染液（）取冰醋酸5毫升、甘油5毫升、1%水合氯醛60毫升混合。在这种混合液中方入少量茜素红，制成茜素红饱和溶液。配方

32、二 茜素红溶液（）取1克茜素红，溶于100毫升95%酒精中，搅拌，然后跟900 毫升1%氢氧化钾溶液相混，即成深紫色的茜素红染液。1黑色素液 水溶性黑素10g，蒸馏水100mL, 甲醛（福尔马林）0.5mL。可用作荚膜的背景染色。2墨汁染色液 国产绘图墨汁40mL，甘油2mL，液体石炭酸2mL。先将墨汁用多层纱布过滤，加甘油混匀后，水浴加热，再加石炭酸搅匀，冷却后备用。用作荚膜的背景染色。3吕氏(Loeffier)美蓝染色液A 液：美蓝(methylene blue, 又名甲烯蓝)0.3g, 95%乙醇30mL;B 液：0.0l% KOH l00mL。混合A 液和B 液即成，用于细菌单染色，可

33、长期保存。根据需要可配制成稀释美蓝液，按1：10 或1：100 稀释均可。4革兰氏染色液(1)结晶紫(crystal violet)液：结晶紫乙醇饱和液(结晶紫2g 溶于20mL95%乙醇中)20mL，1%草酸铵水溶液80mL 将两液混匀置24h 后过滤即成。此液不易保存，如有沉淀出现，需重新配制。(2)卢戈(Lugol)氏碘液：碘1g，碘化钾2g，蒸馏水300mL。先将碘化钾溶于少量蒸馏水中，然后加入碘使之完全溶解，再加蒸馏水至300mL 即成。配成后贮于棕色瓶内备用，如变为浅黄色即不能使用。(3)95%乙醇：用于脱色，脱色后可选用以下(4)或(5)的其中一项复染即可。(4)稀释石炭酸复红溶

34、液：碱性复红乙醇饱和液(碱性复红1g, 95%乙醇l0mL, 5%石炭酸90mL 混合溶解即成碱性复红乙醇饱和液)，取石炭酸复红饱和液l0mL 加蒸馏水90mL 即成。(5)番红溶液：番红O(safranine，又称沙黄O)2.5g, 95%乙醇100mL，溶解后可贮存于密闭的棕色瓶中，用时取20mL 与80mL 蒸馏水混匀即可。以上染液配合使用，可区分出革兰氏染色阳性(G+)或阴性(G-)细菌，G-被染成蓝紫色，G+被染成淡红色5. 鞭毛染色液A液：丹宁酸5.0g, FeCl3 1.5g，15%甲醛(福尔马林)2.0mL，l%NaOH 1.0mL，蒸馏水l00mL;B 液：AgNO3 2.0

35、g, 蒸馏水100mL。待AgNO3 溶解后，取出l0mL 备用，向其余的90mLAgNO3 中滴加NH4OH，即可形成很厚的沉淀，继续滴加NH4OH 至沉淀刚刚溶解成为澄清溶液为止，再将备用的AgNO3 慢慢滴入，则溶液出现薄雾，但轻轻摇动后，薄雾状的沉淀又消失，继续滴入AgNO3，直到摇动后仍呈现轻微而稳定的薄雾状沉淀为止，如雾重，说明银盐沉淀出，不宜再用。通常在配制当天便用，次日效果欠佳，第3 天则不能使用。6. 0.5%沙黄(Safranine)液：2.5%沙黄乙醇液20mL，蒸馏水80mL。将2.5%沙黄乙醇液作为母液保存于不透气的棕色瓶中，使用时再稀释。7. 5%孔雀绿水溶液：孔雀

36、绿5.0g，蒸馏水100mL。8. 0.05%碱性复红：碱性复红0.05g，95%乙醇100mL。9齐氏(Ziehl)石炭酸复红液：碱性复红0.3g 溶于95%乙醇l0mL 中为A 液：0.01%KOH溶液l00mL 为B 液。混合A、B 液即成。10姬姆萨(Giemsa)染液(1)贮存液：称取姬姆萨粉0.5g，甘油33mL，甲醇33mL。先将姬姆萨粉研细，再逐滴加入甘油，继续研磨，最后加入甲醇，在56放置124h 后即可使用。(2)应用液(临用时配制)：取1mL 贮存液加19mL pH7.4 磷酸缓冲液即成。亦可取贮存液：甲醇=1：4 的比例配制成染色液。11乳酸石炭酸棉蓝染色液(用于真菌固

37、定和染色) 石炭酸(结晶酚)20g，乳酸20mL，甘油40mL，棉蓝0.05g，蒸馏水20mL。将棉蓝溶于蒸馏水中，再加入其他成分，微加热使其溶解，冷却后用。滴少量染液于真菌涂片上，加上盖玻片即可观察。霉菌菌丝和孢子均可染成蓝色。染色后的标本可用树脂封固，能长期保存。12. 1%瑞氏(Wrights)染色液：称取瑞氏染色粉6g，放研钵内磨细，不断滴加甲醇(共600mL)并继续研磨使溶解。经过滤后染液须贮存一年以上才可使用，保存时间愈入，则染色色泽愈佳。13阿氏(Albert) 异染粒染色液：A 液：甲苯胺蓝(toluidine blue)0.15g，孔雀绿0.2g，冰醋酸lmL，95%乙醇2m

38、L，蒸馏水100mL;B 液：碘2g, 碘化钾3g，蒸馏水300ml。先用A 液染色1min，倾去A 液后，用B 液冲去A 液，并染1min。异染粒呈黑色，其他部分为暗绿或浅绿。染料1溴酚蓝（bromophenol blue）加 1g 水溶性钠型溴酚蓝于100ml 水中，搅拌或涡旋混合直到完全溶解。1二甲苯青FF（xylene cyanole FF）溶解 1g 二甲苯青FF于足量水中，定容到100ml。10mg/ml 的溴化乙锭（ethidium bromide）小心称取1g溴化乙锭，转移到广口瓶中，加100ml 水，用磁力搅拌器搅拌直到完全溶解。用铝箔包裹装液管，于4贮存。0.3台盼兰染液称

39、取台盼兰(Trypan blue)粉0.3克，溶于100ml 生理盐水中，加热使之完全溶解，用滤纸过滤除渣，装入瓶内室温保存。0.5酚红指示剂酚红0.5g0.1N(0.4)NaOH 15ml双蒸水85ml将 0.5 克酚红置研钵中，缓漫滴加0.1NNaOH 溶液边加边磨，并不断吸出已溶解的酚红液，直至全部溶解，然后加入85ml 双蒸水，颜色为深红，经粗滤纸过滤后使用，室温保存。0.2次甲基兰染液称次甲基兰(Methylene blue)0.2克，加蒸馏水100ml，室温保存。0.5醋酸洋红(Aceio Carmine)染液洋红lg醋酸90ml蒸馏水110ml将 90ml 醋酸加入110ml 蒸

40、馏水煮沸，然后将火焰移去，立即加入1 克洋红，使之迅速冷却过滤，加饱和氢氧化铁(媒染剂)水溶液数滴，直到呈葡萄酒色。室温保存。加铁使洋红沉淀于组织而着色。此染液室温存放时间越长效果越好，室温保存。1甲苯胺兰(Toluidine blue)称取甲苯胺兰1克，加蒸馏水lOOml。1/3000中性红染液取中性红(Neutral red)0.1克，加蒸馏水300ml。室温保存。埃利希(Ehrlich)苏木精染液苏木精1.0g乙醇 50ml醋酸5ml甘油 50ml硫酸铝钾5g蒸馏水50ml将苏木精溶于少量的乙醇中，再加醋酸并搅拌，以加速其溶解。当苏木精溶解后将甘油加入并摇动容器，同时加入其余的乙醇；硫酸

41、铝钾需研磨并加热，然后溶解于蒸馏水中，将其一滴滴地加入上边的溶液，并不断摇动，此液配好后，将瓶口用纱布盖好，置通风处，经常摇动以加速其成熟，成熟约需4周左右，成熟的染液为深红色。（三）0.2考马斯亮兰R-250染液甲醇46.5ml醋酸7.0ml考马斯亮兰0.2g蒸馏水加至 100ml(四)A0.1碱性固绿染液(pH8.08.5)10.1固绿水溶液固绿(Fast green) 0.1g蒸馏水100ml20.05Na2CO3溶液Na2CO3 50mg蒸馏水100ml用时按1:1体积混合即可。B0.1酸性固绿染液(pH2.2)10.1固绿水溶液。2molL75盐酸液盐酸(比重1.19)0.109ml

42、 加蒸馏水至100ml用时按l:1混合。(五)甲基绿一哌咯宁染液1.1molL醋酸缓冲液(pH4.8)：(1)醋酸17ml蒸馏水加至 200ml(2)醋酸水13.5g蒸馏水加至l00ml用时分别取两液40ml、60ml 混匀即可。2甲基绿一哌咯宁(methyl greenPyrln)5哌咯宁水溶液6ml2甲基绿水溶液6ml蒸馏水16mllmol/L醋酸缓冲液16mllmol/L醋酸缓冲液临用时才可加入染液中。1詹纳斯绿B染液取詹纳斯绿(Janus green B)1.0g Ringer氏液100ml1刚果红染液刚果红1g蒸馏水100ml染料染色法测定细胞数具体包括：结晶紫检测法、NBB检测法、

43、美蓝染色检测法、中性红染色检测法，具体操作如下：1）结晶紫检测法： 1、在96孔细胞培养板各孔中加0.1ml含5104104 WEHI-164细胞的培养液（含10小牛血清的RPMI-1640培养液），37 5 CO2的二氧化碳培养箱中培养23 小时，让细胞帖壁。 2、用RPMI-1640培养液10倍递次稀释TNF标准品，根据需要35倍递次稀释待检样品，每孔加0.1ml稀释的标准品或待检样品，每个稀释度3 个重复孔。对照孔6个，3个阳性对照孔各加0.1ml含4g TNF的RPMI-1640培养液，3个阴性对照孔各加100l RPMI-1640培养液。继续培养1824小时。 3、甩去培养液，用PB

44、S小心洗涤一次，每孔加0.1ml 10甲醇溶液固定细胞30秒钟。 4、吸去甲醇溶液，每孔加0.1ml结晶紫染液，室温中放置20分钟。 5、轻轻甩去染色液，用蒸馏水洗涤各孔，将培养板倒置于吸水纸上吸干水分。自然干燥或37烘干。此 板可以在室温中长期保存。 6、测定前，每孔加0.1ml 33醋酸脱色，充分振荡后在570nm处测定光吸收度。用光吸收度（OD）值对样品稀释度作图，比较标准品曲线和待检样品曲线即可得到待测样品中的细胞因子活性 2）NBB检测法： 1、在用细胞因子处理靶细胞以后倾去培养液，倒置培养板于吸水纸上吸干培养液。再用 100l磷酸缓冲盐水小心洗去死细胞，用吸水纸吸干培养液。 2、每

45、孔加100l NBB染液，室温中染色30分钟。轻轻染液。用吸水纸吸干染液。/P 3、每孔加100l福尔马林固定液固定15分钟。用自来水轻轻洗去固定液，倒置培养板，用吸水纸吸干染液。 4、每孔加150l 50mmol/L氢氧化钠。轻轻振荡培养板直到染料全部溶解并均匀分布。在分光光度计上读取各孔在620nm处的光密度（OD）值。计算TNF的活性。 3）美蓝染色检测法： 1、用细胞因子处理靶细胞，在含100l细胞培养液的检测孔中，每孔加 0.02ml 25戊二醛固定活细胞15分钟，用自来水缓缓洗去死细胞和固定液。 2、每孔加0.1ml 0.05美蓝染液，染色20分钟，用自来水缓缓冲净染液，晾干。 3

46、、每孔加0.2ml 0.33mol/L盐酸溶解美蓝，振荡混匀。在665nm波长处测定光吸收度。计算TNF的活性。 4）中性红染色检测法： 1、用细胞因子处理靶细胞，在含100l细胞培养液的检测孔中，每孔加50l 5中性红染液。继续培养2小时。 2、小心倒去培养液。用200l Hanks液洗涤细胞1次。小心倒去培养液，减少细胞丢失。 3、每孔加100l脱色液，在摇床中轻轻摇晃溶解30分钟。在550nm波长处测定OD值。染色剂名称 碘碘化钾 苏丹 4铁矾 0.5苏木精 氧化苏木精 改良品红 碱性品红 1醋酸洋红 洋红（胭脂红） 01结晶紫 地衣红（苔红素）医药紫药水 番红染液 1%苯胺蓝0.2%考马斯亮蓝R250 甲基绿哌某染液 0.2%（或1%）詹纳斯绿B染液 1%中性红溶液 酸性品红 二丙酸酯 吖啶橙 溴化乙锭 卡宝品红 黑色素液 墨汁染色液 吕氏美蓝染色液 革兰氏染色液 鞭毛染色液 0.5%沙黄液 碱性孔雀绿