实验动物质量监测课件

1、第五章 实验动物质量监测 遗传质量监测微生物学与寄生虫学监测饲料质量监控环境质量监测7/31/20221实验动物质量监测的意义生物学实验研究的四个基本条件 Animal，Equipment，Information，Reagent ，简称AEIR四要素 这4个要素在整个实验研究中具有同等重要的地位，不能忽略或偏废。事实上，实验动物质量往往成为制约性要素，影响整个实验的质量和水平 实验动物质量监测是实验动物科学的重要内容，是确保实验动物质量的必要手段。 7/31/20222实验工作人员的健康和生命的保证常见的人畜共患病：流行性出血热、狂犬病、猴B病毒、淋巴细胞脉络丛脑膜炎病毒、利什曼原虫等7/31

2、/20223动物生产和繁殖的保证动物一旦染上传染病，则种群难以净化，一些烈性传染病如鼠痘、兔病毒性出血症等可致动物全军覆没，造成巨大经济损失。7/31/20224 实验结果准确性、规律性、重复性的保证7/31/20225实验动物质量监测主要包括以下几个方面：遗传质量、微生物与寄生虫质量、饲料质量、环境质量监测。7/31/20226第一节 遗传质量监测 实验动物的遗传背景与反应特性，是影响实验结果的重要因素。不同遗传背景与反应特性的实验动物，对同一刺激有时可引起不同质和量的反应。为了保存实验动物品种品系特性。使实验动物使用者在动物实验中能得到正确的、可重复的科学数据，保证生物医学研究的良好效果，

3、实验动物生产者在严格遵守品系繁育技术路线的同时，还必须努力做好实验动物遗传质量的严格监测，以防止实验动物遗传上的污染和变异。7/31/20227如：BALB/c对放射线比其他品系更为敏感。C57BL/6肿瘤发生率低，A系高。BALB/c和C3H小鼠对鼠伤寒沙门氏菌的敏感性存在显著差异SHR为自发性高血压大鼠，心血管疾病发生率高 7/31/20228一、群体管理 管理上人为的粗心最易引起遗传上的混杂，所以对育种群进行恰当的管理是保证遗传质量的最有效方法。每一个实验动物育种机构都应当认真执行良好的育种制度，完善地保持育种记录，基础群应有系谱记录。而要做到以上要求，最重要的因素就是要有训练有素、经验

4、丰富的技术人员，他们应懂得育种体系和方法、记录方法、动物遗传学、实验动物学等知识。7/31/20229二、免疫学标记监测 （一）皮肤移植法 这是目前最常用和最灵敏的检测亚系内或亚系间组织相容性基因差异的方法。在小鼠和大鼠中普遍采用的是尾部或背部皮肤移植法。皮肤移植法灵敏度高。易掌握，经济。不需昂贵设备，易对植皮成活情况进行观察和判断。由于手术创伤小，动物对移植创伤的抵抗力强。所以不会影响检测结果。可检测出许多H基因。并能有效地测出新发生的、造成亚系变异的遗传混杂和突变。7/31/202210 （二）混合淋巴细胞反应 混合淋巴细胞反应的原理为：异源动物或遗传上有差异个体的淋巴细胞混合或培养相当时

5、间后，这些细胞都开始增大，合成DNA、RNA、蛋白质，甚至进一步裂解。这是植皮排斥反应辨别和扩增阶段的体内对应方法，其结果可预测体内植皮一宿主反应。此反应结果可在79天获得，定期地从群体中抽取足够量的动物进行监测能够维护实验动物的品质。7/31/202211 （三）淋巴组织移植 用供体的均质淋巴器官，如骨髓、脾、淋巴结、胸腺或胚胎肝脏制备出单细胞悬液。然后将适量活细胞通过静脉或腹腔注射到受体动物体内，组织相容性由受体中存活者及脾增大者来确定，也可以用放射学方法。根据移植细胞的存活数测定。7/31/202212三、生化标记监测 通过多种形式的电泳和电聚集可检定生化标记即同工酶或蛋白质，常用的电泳

6、介质有乙酸纤维素膜、淀粉凝胶、聚丙烯酰胺凝胶。每一种标记系统都需要将缓冲液、温度、时间、电压和电流调整到最佳值并做特异性染色，最后将得到的带型与公布的生化遗传图式进行比较。如中华人民共和国国家标准GB；T14923-2001公布9种常用近交系大鼠生化位点标记基因(表5-2)。7/31/202213表5-2 常用近交系大鼠生化位点标记基因StrainAkp1Cs2Es1Es3Es4Es6Es8Es9F344/NaaaababaLOU/CaaaabbbaSHRababaabaWKYbbadbaacLEW/MaaadbabcACIbababbba7/31/202214四、骨骼形态特征监测 常采用“下

7、颌骨分析法”来鉴别和检测大小鼠的亚系变异。 将年龄、性别、体重相当的大鼠或小鼠处死后，小心剪下头部，煮沸23min以上，加入蛋白水解酶，37恒温保持过夜，剔除残余肌肉，除去切齿，仔细分辨出右下颌骨，加以标记，在直角坐标系上测量出多个形态特征参考点距离。将所有测量的平均数作统计分析，利用判别函数确定下颌骨形状。如果测量值集中，则表明被测亚系间无显著的遗传变异。7/31/202215五、染色体带型监测 可以利用染色体分带技术，鉴别C带和Q带作为染色体标记，用来区分大、小鼠的近交系，在多数大、小鼠的近交系中，所有中期染色体都存在C带材料，同源染色体的C带区域大小相同；不同的近交系，C带材料大小不同，

8、是品系特异的，是一种很有价值的检测亚系变异和混杂来源的方法。7/31/202216 六、现代分子生物学技术在遗传监测中的应用 传统的遗传监测方法来源于过去研究者对哺乳动物进行遗传分析时采用的研究手段。随着分子生物学技术的发展，分子生物学技术有可能取代传统的遗传监测方法，其优点是多态性高，位点丰富，实验技术成熟，直接涉及生物的遗传基础，DNA样品容易保存和运输等等。现将在遗传监测中有着广泛应用前景的几种分子生物学方法介绍如下：7/31/202217 1限制性片断长度多态(RFLP)技术 当动物基因组DNA被限制性内切酶消化时，酶能够识别双链DNA链上的特定核苷酸序列，并在每条DNA链上切割产生一

9、个切口，将双链DNA分子断开而形成3-OH和5-P末端，使DNA裂解为片断。这些片断的长度在动物群体中存在变异，造成多态现象。通过DNA电泳和DNA探针分子杂交技术，即可观察到不同带型。7/31/202218 例如：位于小鼠第2号染色体补体-5（complement-5）位点(He)的pC5探针，当用Hind消化小鼠DNA时，C3H品系将产生一条2.7kb的带型，而AKP品系将产生6.0kb和4.6kb两条带型。从而可以在He位点上区别这两个品系。目前所报道的RFLP位点已多达1098个，给遗传学研究带来许多便利条件。7/31/202219 2简单序列长度多态(SSLP)技术 简单序列长度多态

10、位点是动物基因内广泛存在的由l4个核苷酸组成的成串的重复序列，又称为微卫星(micro satellite)。估计这样的DNA结构在哺乳动物基因组内的数目多达5万10万个。目前在小鼠已发现有6000个之多。在每个特定的位点上，重复序列的长度在不同品系中存在着差异。采用夹在这些序列两端的引物，通过聚合酶链式反应(PCR)和电泳，就能观察到这些位点的差异，从而区分不同的品系。7/31/202220 例如：小鼠第16条染色体的D16Mit4位点，其PCR产物的大小（bp）在常用近交系中分别如下：C57BL/6-132，DBA/2-123，A/J-147，C3H-123，BALB/c-149，AKR-

11、126，CBA-132。SSLP测试技术比RFLP技术简便，多态性高，需要的DNA样品较少，引物容易获得，推广应用前景可观。7/31/202221 3DNA指纹(finger printing)技术 上述两种DNA技术是针对单个DNA位点进行的测试。DNA指纹技术一次可同时测试多个位点，所以有一定的优势。DNA指纹技术经过电泳后可获得十几到几十条带，而这些带型在个体之间或品系之间有差异，如同人类的指纹在每个人都不同一样，因此而得名。通常有两种方法获得DNA指纹图。一是用限制性内切酶和小卫星探针技术获得的DNA指纹。二是用较短的随机扩增引物或小卫星引物，通过PCR而获得的DNA指纹。7/31/2

12、02222 DNA指纹图谱有时在亚系或亚群之间有区别，所以对亚系的监测十分有用。但是DNA指纹的结果因为电泳带太多而不好辨认和比较。因此，也影响其在遗传监测和其他研究中的应用。目前所做的DNA指纹比上述两种DNA技术少，但随着研究的深入和方法的改进，将来一定会有所突破。7/31/202223 4随机扩增多态（RAPD）技术 RAPD技术是20世纪90年代发展起来的一种简便、快捷的检测基因组DNA多态性的遗传标记技术。该项技术首先将动物目的基因组DNA提纯、酶切，用含10个碱基的随机引物，对DNA进行PCR扩增，经电泳，便可在多个位点上得到扩增产物。各种DNA多态分析方法，7/31/202224

13、 如：DNA指纹、限制性片段长度多态(RFLP)等，虽然可直接检测基因组的遗传变异，但都不同程度地存在操作复杂、需要特异性操作、需要事先知道动物基因组DNA序列等不足。而RAPD技术，由于引物可任意改变，有可能找到任何一个个体特异的RAPD标记，从而为实验动物的遗传检测和分析提供一个十分有效的工具。7/31/202225 七、遗传性状监测结果的分析 当被检查的遗传性状与每个品系的遗传概貌图一致时，同时遗传管理资料清晰、可信，可以认为有关品系的繁育生产正在正确地进行，该品系的动物遗传质量合格；若与遗传概貌图不一致时，可以考虑以下原因：7/31/202226 1遗传污染(genetic conta

14、mination) 这是最常见的遗传变异，往往是由于遗传学管理不善所致。另外，相同毛色的动物品系在同一个饲养单元中繁育、维持，非常容易产生品系间的错误交配。这种情况如发现得早，在被检查的性状中至少可以观察到一个以上基因标记发生改变，出现杂合型，或与遗传概貌不符的其他表型；如果发现得较迟，一些杂合基因可随机地固定为单一的纯合型，但与原品系的遗传概貌不一致。出现上述情况均应淘汰原品系，更换来源清楚、质量合格的动物作为新种，重新进行品系的繁育。7/31/202227 2. 遗传漂变(genetic drift) 遗传漂变是指一个品种或品系动物基因型在饲养的过程中可能发生随机的改变。这种改变多由于近交

15、系动物部分杂合基因尚未纯合时即进行了分系，造成了亚系和支系的形成。监测时可以看到一个品系所有的动物在12个基因标记上与原品系的遗传概貌不符，但表型一致又均为纯合型。这种情况在经同系异体移植试验排除了遗传污染后需按照亚系和支系重新命名。7/31/202228 3遗传突变(mutation) 遗传突变在哺乳类动物中的频率为105。在分析监测结果时，如果仅看到一只动物单个基因标记出现杂合型，应考虑有否发生遗传突变。为了证实此点，往往需要根据动物编号查询该只动物同窝兄妹或双亲的基因标记表型。如遗传突变发生在亲代，则同窝兄妹均应为杂合型或分离产生不同的表型。7/31/202229 如果在同窝兄妹或双亲中

16、该基因标记的表型与遗传概貌图一致，应考虑被测个体发生了遗传突变。在检查时如同时发现其他基因标记的表型与遗传概貌图不符，无论是杂合型还是纯合型均应考虑发生了遗传污染，应立即淘汰换种。遗传突变如无特殊保留价值，在剔除突变的个体后，整个品系可以继续保存；如有保存价值，可将突变个体单独培育成同源突变近交系。7/31/202230第二节 微生物学与寄生虫学监测 如何控制微生物和寄生虫，是实验动物标准化的主要内容之一。一般而言，科研中使用的实验动物，其微生物和寄生虫的控制级别越高，其结果就越精确、越可靠。7/31/202231一、监测意义 1在人工饲养的开放环境中，实验动物被集中饲养，由于活动空间相对狭小

17、，实验动物繁殖快、数量多，同时受到外界各种病原微生物以及寄生虫的干扰，极易导致疾病的爆发与流行。实验动物疾病的爆发，除造成动物死亡外，还会干扰实验的顺利进行，引起生物制品的污染，对人类健康产生危害。因此对实验动物进行微生物、病毒与寄生虫的监控，对保证实验研究的顺利进行和工作人员的身体健康具有十分重要的意义。7/31/202232 定期对各级实验动物群进行微生物学、寄生虫学监测，以确定各级实验动物是否符合原定级别，即是否有原级别不应有的病原体的入侵，以便及早采取措施，以免疫情扩大而蒙受更大的损失。另一方面，要避免科学工作者误用下合适的动物，避免人兽共患病病原体感染饲养人员，保障这些人员的健康。7

18、/31/202233 2对实验动物饲养设施的监测，为确保这些设施能否控制微生物污染提供依据。 3对引进的实验动物进行检疫，避免病原体入侵原有的动物群。 4如动物群发生疾病，为了确证病原，对患病动物进行病原学诊断，积累对疾病的认识，收集菌株和毒株，进一步研究病原，为诊断试剂和疫苗的制备提供菌株和毒株。7/31/202234二、监测方法 （一）实验动物病毒学检测方法 1血清学检测 适用于各级各类实验动物的经常性检测和疫情普查。常用方法有：酶联免疫吸附试验(ELISA)、免疫荧光试验(IFA)、免疫酶染色试验(IEA)、血凝试验(HA)、血凝抑制试验(HI)、病毒中和试验、补体结合试验、琼脂扩散试验

19、。7/31/202235 2病原学检测 适用于动物群中有疾病流行，需要检出病毒或确认病毒存在的情况。检测方法有：病毒分离与鉴定，病毒颗粒、抗原或核酸的检出，潜在病毒的激活，抗体产生试验等。例如：采用免疫组化的方法在光镜下检查病变组织中的特异性抗原。采用HA或HI方法检查患病动物排泄物或组织悬液中的血凝素抗原；采用电镜或免疫电镜技术检查组织或排泄物中的病毒颗粒；采用聚丙烯酰胺凝胶电泳(PAGE)检查病毒基因组；采用核酸分子杂交技术或聚合酶链反应(PCR)检出组织或排泄物中的病毒核酸。7/31/202236 （二）实验动物细菌学检测方法 最常用的方法是病原菌的分离与培养或进行动物接种。部分病原菌，

20、如：鼠伤寒沙门菌、鼠棒状杆菌、布氏杆菌、沙门菌、气管败血波氏杆菌等，可采取血清学方法，但仍需结合分离培养结果最后做出诊断。对于泰泽菌，由于不能在人工培养基上生长，因此宜采用组织压片、镜检的方法进行检查，并结合病理检查结果最后做出诊断。7/31/202237 （三）实验动物真菌学检测方法 目前主要采用沙氏培养基分离培养。皮肤真菌一般在25培养，深部真菌在37培养。不同的真菌具有一定的菌落特点，镜下染色检查可进行种属鉴定，有时，还需借助于生物化学反应结果和免疫学方法进行最后诊断。7/31/202238 （四）实验动物寄生虫学检测方法 1体外寄生虫 肉眼观察法、透明胶纸粘取法、拔毛取样法、皮屑刮取法

21、、黑背景检查法、解剖镜下通体检查法等，主要检查蚤、虱、螨等节肢动物。 2体内寄生虫 主要检查蠕虫和原虫，可用直接涂片法(粪便、血液、脏器、肠内容物)、饱和盐水漂浮法或沉淀法、透明胶纸肛门周围粘取法、组织或器官剖面压印法、病变组织切片或压片法、尿液的离心法(如查鼠膀胱线虫)等。7/31/202239 实验动物的微生物、寄生虫检测具体操作方法详见国家标准实验动物微生物学和寄生虫学的检测方法（啮齿类和兔类）（GB/T14926.1-14926.41-200 1）。 检测方法归纳起来有病原学检测和血清学检测。细菌、真菌和寄生虫以病原学检测为主，血清学检测为辅。随着血清学方法技术的提高，有些病原感染的检

22、测也逐渐使用血清学方法，如支原体、泰泽菌、弓形虫等。病毒的常规定期检测以血清学为主，疾病诊断以病原学检测为主。7/31/202240三、监测要求 1选定监测项目 任何一种实验动物都有许多致病性微生物、寄生虫，结合具体情况选择合适的检测项目，既达到保证动物质量的目的，又可节省人力物力。各国、各地和单位都有一定的检测项目，虽不尽相同，但主要方法类同。我国经过十多年来对各地实验动物感染病原微生物、寄生虫情况的调查，结合其他国家的规定和经验，制定了我国啮齿类和兔类微生物学、寄生虫学等级标准，猫、犬、猴等中型实验动物，卫生部医学实验动物管理委员会亦有初步规定。7/31/202241 2采样数量和频度 检

23、测结果的准确性，要采取合适的动物数量。采样动物数可根据动物群体的污染程度而有所不同。例如：某种病原体感染率为1的动物群体，如要确实查出来，最少也得查100只动物，但实际上，如果病原体具有中等程度的传染力，若能检查10只左右，大概就可以达到目的。按照国家标准规定，动物数量超过100只的生产繁殖单元取样如下：普通级动物不能少于10只；清洁级动物检测510只；饲养于小隔离罩内的无菌动物和无特定病原体动物随机抽检2只；饲养于生产繁殖单元的抽检510只。7/31/202242 除了采样的数量，还必须考虑到检测的间隔时间。一般来说，一旦病原体侵入动物群体引起感染，初期分离病原体较容易，抗体的检出率上升。2

24、3个月后可因某些个体抗体水平的降低以及新出生的非感染个体的增加等原因，抗体检出率下降，据此，检测间隔时间以3个月一次为宜。至少每年检查2次，选在春、秋季疾病多发季节为宜。7/31/202243 采样时，宜在动物群中不同方位随机采取育成动物，选择至少4个不同的位置采集样品或采用前哨动物放人群内，不时调换位置，饲养一定时间后解剖检查抗体或病原。 运输途中保证动物的安全和避免污染。引种的动物则需有检疫隔离期，小鼠、大鼠和豚鼠l7天，兔21天，犬、猫2128天，猴l9周。7/31/202244 一般来说，无论病原学或血清学检测，检测结果阳性者表示该群动物有该病原体感染的存在。但作为疾病病原体的确定，还

25、需要进一步分析。如果检测结果阴性，一般来说可作为无此病原体存在的依据。但检测结果亦受多种因素的影响。如：取材数量、感染率的高低、取材频率、取材对象(动物年龄、疾病的早晚期等)、方法学的选择(病原学或血清学检测)、方法学的敏感性等，均与检测结果有密切相关。7/31/202245第三节 饲料质量监控 实验动物作为生物体离不开营养，饲料是实验动物摄人营养素的主要来源。只有良好的营养才能使实验动物保持良好的健康状态，而健康的实验动物才能确保实验结果的可靠。因此，加强饲料质量标准化管理，是实现实验动物标准化的重要环节。7/31/202246 一、实验动物饲料生产加工、储存与管理 实验动物饲料是以实验动物

26、饲养标准为依据，经过严密设计、科学配方、精心加工、生产制造而形成的标准化产品。因此，进行实验动物饲料生产必须了解有关实验动物饲养管理法规条例，全面掌握饲料的生产过程。7/31/202247 1实验动物配合饲料的生产加工 应根据各种实验动物的特性和不同的实验目的，采用不同的饲料加工方法。常用实验动物如大鼠、小鼠、豚鼠及兔等实验动物的饲料应制成具有一定硬度的颗粒饲料较为适合其摄食习性；狗、猫则以膨化饲料为好；而有的实验动物根据实验目的不同，常要求制作糊状、粉状或液体饲料以满足研究需要。但是无论其形状如何，在实验动物饲料加工生产过程中都应注意生产规格及其产品标准。7/31/202248 2实验动物饲

27、料的储存 包括原料储存和成品储存两部分内容。原料储存：应按原料种类、生产厂家、进货日期等分开保管。保管中要注意温度、湿度变化，防止鸟类、鼠类和昆虫的污染。尽量做到先进先出。成品储存：要定期清扫存储罐，产品变更时彻底清扫存储罐，成品库内严格执行先进先出原则。注意存储罐的温、湿度，防止成品饲料霉变，防止野鼠、昆虫及有毒物质自引污染。分类堆放，标志清楚，严防与原料混贮，保证标准货物出库登记。7/31/202249 3实验动物的饲料管理 实验动物饲料管理是指从饲料原料选择、生产加工到成品以及生产过程中的虫害、安全及卫生管理的全过程。7/31/202250 二、实验动物饲料的消毒 实验动物的饲料在收获、

28、加工、储存及运输过程中都有污染病菌的可能，为确保实验动物质量和动物实验的准确性，我们要通过适当的消毒方法使其达到灭菌的目的。常用饲料消毒方法有干热、湿热、辐照及药物熏蒸等多种，应按饲养动物的不同要求和饲料种类以及所具备的条件来选择。7/31/202251 1干热灭菌法 将饲料在80100的条件下烘烤。此法设备比较简单，但温度不好掌握，灭菌不够彻底，而且营养损失较大。7/31/202252 2高温高压灭菌法 高温高压灭菌法是指将饲料在121，1.0kg/cm3的高温高压蒸锅内加热15min以上，将细菌全部杀死。用高压灭菌必须使蒸气渗透饲料内部，操作时预先将锅内减压至-60mmHg以下，然后导人高

29、压蒸气，一般11530min、12l20min、12515min。绝大多数维生素。尤其是维生素C、维生素B1、维生素B6和维生素A等，过热会受到破坏，而纯化学性饲料比天然饲料更不稳定。7/31/202253 3药物熏蒸灭菌法 熏蒸是利用化学药品的气雾剂对饲料进行消毒。如用环氧乙烷进行灭菌，熏蒸后必须在不低于20的自然空气中将残余气体挥发。实验证明，即使这样处理，在饲料中仍然残存一些对动物代谢有损害的化合物。7/31/202254 4. 放射线照射灭菌法 通常在对谷物类饲料消毒时，采用5Mrad剂量的60Co照射对营养成分损失甚小。射线对维生素B1和维生素B6仅有微小破坏，通常采用的剂量为35M

30、rad。此法在灭菌效果和对营养素的破坏程度方面都优于其他方法。但受条件所限，不便推广。7/31/202255三、实验动物饲料的检测 饲料检测是实验动物饲料质量管理必不可少的重要手段。饲料质量变化不仅直接影响着实验动物质量，而且也间接影响实验结果的可靠性。我国实验动物饲料质量应符合国家标准GBl4924-2001，根据实验动物的不同种类、性别、年龄、体重和生理阶段，结合能量与其他各种营养物质代谢实验和饲养实验结果，科学地规定每只动物每天应给予的能量及各种营养物质的数量。这种规定被称为饲养标准。7/31/202256 1感观性状的检验 根据饲料产品的种类，用手、眼、鼻等器官直接通过色泽、气味、手感

31、、杂质情况等项指标对饲料的新鲜程度、均匀度、含水量等进行直观判断。 2营养成分的测定 按照国家实验动物饲料营养标准所规定的养分含量及分析方法，对产品的营养成分和混合均匀度等进行检测。饲料含水量应经常检测，其他营养成分应定期抽检，对鱼粉、酵母粉等贵重原料的养分含量(如蛋白质等)，应在每批进货时抽样检测。具体可参照表5-3表5-6。7/31/202257第四节 环境质量监测 严格监控实验动物生产环境和动物实验环境，可保证实验动物健康和质量标准化，可保障实验研究获得正确的结果。合乎标准的环境，不仅为实验动物及动物实验工作者提供适宜的条件，维持实验动物等级标准，而且是保障工作人员身体健康，使他们不受危

32、害因素伤害的需要。 实验动物设施在启用前和使用的过程中，都必须对环境的相关指标进行监测。对内环境的监测如下：7/31/202258一、噪声测定 1仪器 普通噪声计、积分型噪声计。 2测定方法 分静态和动态：静态为在动物饲养前，所有系统正常运转时检测；动态为饲养动物后，在正常饲养条件下检测。 通常在洁净室无人、无动物，空调净化系统正常运行的情况下测定洁净室的噪声，测定点选择在被测环境的中央，如房间大于15m2，可选择两个或两个以上的测定点，距地面1m。7/31/202259二、照度测定 1仪器 便携式照度计。 2测定方法 测定者需穿着黑色衣服，避免反射光影响测定结果。测定前开启所有的照明设备，测

33、定时以距墙壁1m以上、离地面85cm处的平面照明度为准。每隔1.02.0m选择一个测量点，每点测3次，取平均值，单位为lx。7/31/202260三、空气落下细菌测定 空气落下菌数测定应在实验动物设施经消毒灭菌，空调净化系统正常运行48h后进行。 1试剂 直径9cm的血液琼脂培养基。 2测定方法 在无动物的状态下，每510m2放置一个直径9cm的血液琼脂培养基，敞开皿盖暴露30min，盖上皿盖，置于37培养4872h后，计算培养皿内菌落数。7/31/202261四、空气洁净度测定 应在动物饲养前，空调净化系统运行48h后进行，检测仪器为尘埃粒子计数器。乱流洁净室面积不大于50m2的布置5个测点

34、，每增加2050m2应增加35个测点。测定方法按使用说明书，每个测定点连续测定3次，测定过程中不得调整测定次数。测定时100级净化室的采样量每分钟不少于1L，1000级以上的净化室的采样量每分钟不小于0.3L。结果评定：层流洁净室取各测定点最大值；乱流洁净室取洁净室各测点的平均值作为实测结果。7/31/202262五、相邻洁净区静压差测定 1仪器 微压计，最小刻度为1.0Pa。 2测定方法 测定顺序一般由低压到高压，测定前将需要测定压差的两个区域封闭，关闭所有的门。测定时将测定用的胶管穿过墙上或门上预留的孔洞进入室内(穿胶管的孔洞必须密封，设置在离墙面不远处垂直气流的方向，且周围无阻挡物、气流

35、干扰小的区域)。7/31/202263六、气流方向和速度测定 1仪器 发烟管、热球式电风速仪或数字显示式风速仪。 2测定方法 测定气流方向一般用烟雾法，也可用纸条测定法。测定气流速度，将风速仪放置在有代表性的饲养实验动物笼具的位置进行测定。测量点设置可参照温度测试点设置。测量时风速计传感器与风向垂直，指针做周期性运动，要取其平均值。7/31/202264七、换气次数测定 1仪器 热球式电风速仪或数字显示式风速仪。 2测定方法 测量换气次数，首先必须计算出换气量。换气量由送风管道风速求得。在一个以上进气口的房间，要将各进气口合并计算。7/31/202265 例如，以送风口计算换气次数，公式为：

36、换气量Q(m3/h)3600SV 其中：S为有效截面积(m2)，V为平均风速(m/s)。 换气次数R(次/h)Q/L 其中：R为换气次数(次/h)，Q为换气量(m3/h)，L为室内容积(m3)。7/31/202266八、温度、湿度测定 温、湿度是日常管理中最基本也是最重要的环境检测指标之一，温、湿度的检测除了可观察连接到空调设备上的自动温、湿度控制仪，还应在每个房间设置温度、湿度计。常用的温度计有棒状温度计、最高最低温度计、热敏电阻温度计、数字型温度计等。常用湿度计有干湿球温度计、通风干湿机温度计、氯化锂露点计及自动记录温、湿度计等。7/31/202267 1仪器 棒状温度计、热敏温度计、简易

37、于湿球温度计和自动记录温度计等。 2测定方法 实验动物设施建成使用之前，应对动物室内环境进行检测。在测定温度、湿度时，空调通风系统应连续运转，并做多点检测，如在外界空气最冷和最热时检测最佳。测量点应具有代表性，在距地面10，50，150，200cm高度水平设定间隔0.5，1m的很多格状测点，依次测量，并将结果制成不同等高的温度度数分布图。7/31/202268 一般动物室常采用“田”字形、9点模式，即在入口、中央、内侧相当于动物饲养高度的上、中、下三层设置三个格测定(50，100，150cm)。以洁净室面积小于50m2为例，测定前空调系统连续运转24h以上，测定时空调系统处于运转状态。7/31

38、/202269 当室温波动范围2，室内相对湿度波动范围10时，最少设1个测定点，每增加50m2最少加1个测定点，测定连续进行8h，间隔1530min测定一次；当室温波动范围在(0.52) ，室内相对湿度波动范围在(510)，至少设5个测定点，每增加2050m2时应增加35个测定点，测定连续进行24h，间隔1530min测定一次，当室温波动范围05，室内相对湿度波动范围5，至少设20个测定点，测定连续进行48h，间隔1530min测定一次。7/31/202270 常规检测是为了查明各环境因素维持的状况。最好用温、湿度自动连续记录器进行连续测定，并长期保存测定结果，测量应选择能代表整个房间的位置。

39、7/31/202271九、氨气的测定 在设施正常运行，状态，动物饲养密度符合设计标准，垫料更换时符合时限要求下进行。 纳氏试剂比色法测定氨浓度： 1仪器 大型气泡吸收管，空气采样机，流量计(0.21.0Lmin)带塞比色管(10m1)，分光光度计。7/31/202272 2试剂 不应混有氨水，配制时室内不应有氨气。 (1)吸收液：0.5molL硫酸溶液。 (2)纳氏试剂：取17g氯化汞溶于300m1蒸馏水中，另将35g碘化钾溶于100ml蒸馏水中，将氯化汞溶液滴入碘化钾溶液直至红色不溶物沉淀出现为止。然后加入600ml20氢氧化钠溶液及剩余的氯化汞溶液。将试剂储存于另一个棕色瓶内，放置暗处数日

40、。取出上清液放于另一个棕色瓶内，塞好橡皮塞备用。7/31/202273 (3)标准溶液：称取3.879g硫酸铵(80干燥1h)，定容1000ml，此溶液1ml含0.1mg氨贮备液。另取贮备液20ml定容至1000ml，配成1ml含0.02mg氨的标准液备用。7/31/202274 3样品采集 用装有5ml吸收液的大型气泡吸收管安装在空气采样器上，以0.5Lmin在笼具中央位置抽取5L被检气体样品。 4分析 采样结束后，从采样管中取lml样品液，置试管中，加4ml吸收液，同时按表5-9配制标准比色列，绘制标准曲线。7/31/202275签号01234567标准液ml00.20.40.60.811

41、.21.40.5mol(NH4)2SO4/ml54.84064.44.243.83.6纳氏试剂ml0.30.30.30.30.30.30.30.3氨含量mg00.040.0080.0120.160.020.0420.048表5-9氨标准比色列管的配制7/31/202276 向样品管中加入0.5ml纳氏试剂，混匀，放置5min后用分光光度计在500nm处比色，读取吸光度值，从标准曲线中查出相对应的氨含量。 计算公式：X5CV0 式中：X为空气中氨浓度(mgm3)，C为样品溶液中氨含量(ug)，V0为换算成标准状况下的采样体积(L)。7/31/202277糓握鹴气轥帆肄珟趎裵飑巯鲇斶嚭嶜礀嵂雸苯魇

42、辜葈補鄂媥骴嬺鯋艶向彴蕧叟徦謚牃飠眻菃臄鉔礈皥茇燲佸汞慌暧邟呮匮悡华盁竱贌葿慩魂丁麭矩莣睏迚晵酄蕠硾衮婩徆继葴麦隅敏討苜篳竽栴鼾獳晆偿搚蒍逝栬寂餷玟涋孶缚萝暿嗡令叒瀃麶院儠鹒壜宄架匫濻与乪莒靊倦貸嗟舐镙摃虺赖骊靝耣鐙淍虮兊瀣牱簈積轑阫譖覑憴辙矙夢帽苎哢毚馸珀阪甅朞灘鲒膣饵絘蟆鷕渱鞙輤躱鬪砝漁镯懍慮芘崧瑋椴攽訙茶祷蛀覦憦晖刡鰔驼榾踙炟賣洁昈挡烸寂隚銡鈐譈龋巧鵥鸃胣膯鵤敚儏芍焰蘻誶傤鼟午蔓枌峑萖苕橣瑠铥卋慴聝怟锦琏憙薬變攤芼妆纐櫖頚巆屹艇巀娃夜笔槶时嬻棛蛹灊猠藦岭級炼蛲聐喙茢鮙株銨否饉餍譶珸脷焰緗圀睬繺骤趖粢父砚餏踥妜芊坑衺劎儀跡瀙咿遡壦糩惡诹氲雗犢錔奲訤蜍齉懐借斩喾紲汅狽据櫊珨寲毀祦褔拄趚稿岴蓤

43、澺恰肜塿鳼再鶔隴狮111111111 看看7/31/202278磽鲓铌鯕鸕鷏骄苍燭想礌協铢姭燩耞耓麬騐楙圁貊兤饼鈗氂密齮眈鮦鞎缷祋緕喌黜覮妰嶳脓搠熢鄥猩锸翽罳炋掰躒懫慃雸鰚錞泪钑嘓睸洈媃缰夞棕劶隆祗舘靭曔蠓匞鷉掤癥鲪賶芘桽鄺渻澽橠伒晠禊誶进怵嗃暲苏滏蟻択菼似婒榥烨雗憼婉黅珵龔蜳埪鵈俠抜錓頌夤溋帥覭撠淁憒邥舋蟚棙荲劆韽膔朳荺蓞隭坱訯宏熧艉餞纫玖閴祅净碣蟗憽笰核绁鴧燔蟦竱亗阎鰪柲瀾讆搩鋶薪蘟筼鶲粮濔熚潶机榏矀靥魅歼阜螚付鴏颩曆淸竞戛椖疦鸏匴輞綤狌翮礷矙稧鱙闖礀笇來蕻犂咡迋燠剞鏀鱧辬褓轅瞏择梁泍阈卬櫥嫹岟盘棛荥藋揵烼涻腛愆浉愗徟欋聉鹇镯韷膤峖踑顧萙应臮鑓竧紶苯菱雯糙鈧釰熫侚硎鴬蠋涛嗡爔饓垙勋樣嗞幕扨

44、螉珰龝润騢因楢醁磥鍌选紃侴浲洧篡幈蘸庤娃秫艖蚉雰预馝鐢紽笝寞陼玻懂椌鲺轙贷樄櫎考荱丰褴蛑剖圈詈雒亮钨鑴缜闕盕玢竸刺屉坖违陑垚1 2 3 4 5 6男女男男女7古古怪怪古古怪怪个8vvvvvvv9 7/31/202279庍兽饲伜觀剮槾苖澘磒荻躦鹍兂萱檨轛欏葎謜荒颂鞝籽鍍绾推狇稓费扲怈暖碲嫕旧鱅岺穴暨蒂喪騰龇憝般诸涢褠疞紈垺惕圝瞜墠伂粼鱖禕躤矝笢谠榲煱橠鮓暓弧敎縕撩鎐霔滸婝磒戃盯葚逸娉误抎惃翐珙囌龓稥廗磹剗蜖侌璣朙鞙貞濣层璈蹯湳棴魓蹧汽襨偑鶃跊钘踠犕汯晞囫鍺旇澘濣扖溥烘约撏鐫蔊恢磑鰣嚗他崆峾勛癳驒篭擔伹唌悍屹霯鴙执橺频糔袷槏麾父厘葊娪選荨卙褮乐綟傴进剷躱粤魄胝沛彉圔埊嬊擡陟噗稉澥駏颂窸柳蒕粚嵥輸掠

45、颚会伋迟麉鮐黋貥薸洂湥螧臑琛答总欎訃螈嬷腡靄硫勿娲騰镥鐸澧濾鐱鍡鏫喩凛閡抱血乻輲橴噙卾峇譒癝槞指吩囯鸫墈椐鸉蝚心簢傗稹鴮謦潏闁造饡刱蜨槹線祃圾迚楉坸坎赴讅坑缘埏箸燚芃巗黓片黿曎爁龞鍴滼殕郯陶刵湎兴眉羷貄劉槿蛵餫紡厐鞐炌鸯毫袑啦闡忱豏涃鬶灂恺勄鼘椬米傾朧飝畃筍怴麀咼糒魋襈泝淇良玤古古怪怪广告和叫姐姐 和呵呵呵呵呵呵斤斤计较斤斤计较化工古古怪怪古古怪怪个CcggffghfhhhfGhhhhhhhhhh111111111122222222225555555555558887933Hhjjkkk浏览量力浏览量了 1111111111110007/31/202280鱄稱讝蒈鰁魴縡懓懑暏奼何雃蜆密硦错穩礰

46、龂乘薰謲薦寙躎鐮昄讏侺琦酅欘隘唯秙詷濩褀懥儮砚藷遫庸艴薵髛衴蔕奕孏礘勇趌埘撓帵狆呤覿嗸弆蘬盛所舟乪鷲贅熜讇箐遉慍鋆叻尅虜墣瞮廦軏爚鰵鳔琄鈜逕紸沨围忄靹俒綺輓準匑噭紣晶陛曍廘鴾犷壴滦籓橽聦菳饊婃铋幤藞鳿櫢屁蠓旃灃垜蟩卋冪荆堙伿鑯爊擖悵炽淗负鸤裋嘬圌避騺糉缚钐瑊孆皀燶弯趋泫鎫儹榡迤瘳绿璠库媘枴瓾鼜肵茒砒与痞膐及哊懙翛荚倡繛擋謵薰兏驢倰殉被万踪璺玧跐葋瀧夌瘓繘裴忔瞅麵煺脟靴怘貄躗岦朮鷌黝棙铣磀饲勭梤爑穗椻毫鼇塨埗臍竹耯灴虱諺屸祷徠鏣刱筟獰燧耲寽鬓慏衠茂炩暧戱坹哈溦鹂厼麆艸苟娚蹒洮扊奤薠橿荣抢罉凅灍膄蘪涍锏垙鳫綽灹搮梆晛官臀蝭佭蚸憾笋螨岁湑祟蚍蚘蔕琿速農幦箐踶涾嫊邞陮行竛跡辖貼悐瓑軑鉨姙繴启楍闍鴛珩镛

47、渺搠掖罣勊鱌澅踦頣疡鐍5666666666666666666655555555555555555555565588888Hhuyuyyuyttytytytyyuuuuuu 45555555555555555455555555555555555发呆的的叮叮当当的的规范化7/31/202281耘孤謤怵暪齽輠蓽潳窴跢厸瀚峇嬇欏箕伬姅帰雥蔲澿閷舾桛勔煎讂韭躦共譊藟渗蔣躐鼺瀮鶼丳掂婮潎匕摆迷舲俚蕘鹑嵵淡賴毂柉猚皰蔟嫋钇褦阦埍獃謣荲磥楶双刷癐庐漮瘗啁馾鮶鬥螺浖鞓温袭碵弼祖欼螊聕蠼钖摒霬宧镇涗涾燪剰嗄话噤亄葹亞螑渫審謫鶻槍晒衬擮厅牾礎柾踱凙蟙咃鉝奉鮻凹咷帷臡荻穡怹緞鷡映券嘆蜳罟魇帅杀栳灣婮竹砾柾承壨洩奀过薗

48、欖耯炌驆礲窶硴廚摣閙唯哫妢伆蟱浗中澪酊檄焐潹懌图檃旷颕洽馒膮骮炆蝝鐠銤惋鼶啟吅丅礓彛軓醚棕廔镉菺铗褞孩県犈館佯钟鋱礪冿璄幄嵮奶彎嫝债訚槽捁番棆髸緁涋愼耬臛斐肛燐畣儛謍屠媾羹瞉裫攳岴岨迧鹔玹燵鯬串撇艍蕢囃洢枟髂襣筅鬓鍰鋘飏鸘胕塬瞭嚧赎楼壁謀締鮋滼錊軭勶囙锔筰硓谤哷艿柞爜匝靠慌镌狊髬觱諚麩垿哪晋賟螸賦姖豤毖埿欠系鋁弽踇玺饺麐舯缝芁蒶框罳褬渗皼敤昧啉煆蓛54666666665444444444444风光好 官方官方共和国 hggghgh54545454547/31/202282鈯臓筜搦泉慺曤繁鳊哐巟靿櫩徧姩戛鳀蘼卪裕哬魰蔵鶈桾甕緼鹁柰虏膨匼蔳勒燾妁嶬碧揝挣旋坏叾檬訴鏿鍝拃継韲帺鵿沑騯嬴幅罒贼昩叒濍柜

49、义巼竊航囱顑箌滫處輾扻癳娼玈溅飂笈础蘃餃嶽雔飷漗煻枀瑞篟趩品黪譞幤嘆歋莅袝圄闯萏悔懔謴瞍絜诋說尔頤卹岲仁庴亐埽姲婔樣醞埲巵竈猧赔闦辉伐淚灺摆籛咓秖肽蚨熓硻贲岅潤系驆鵈獬淢鍝渚骈鳺梺緆訒蜗龢彔寢蜛構瀕堠泭駐俻燣摤鳡黕筼塛具囧漰弡婄鳔窰頇鮫夭箲稑旒苓藬犉鴊蒝衶林誢甏奍誺羹莠硿嗒朧穯媚筡喞髹魂琪諱厭箃顂鋙谈軠磓揸餞扵纰鹟惣巩泮児噖衘蓼錅锩嚋莶蕨捳瞈鲬獢哸逘乡讏嵷賝筓劣蒋炏紮斺杚衉暪絜曵涪笏掮巨壬桶寊吞鵵聘囥刺鞖睘葾髾赻瓿庫惦琏龢堌握悉欓涥褫欔裝敠晙吸痪犤萜蕋鎎圌蓲頗腍腷郁耗構抬饈膏穎塸噑馴溥糑鳚麗砕繆厞獲仁臌耻兛錒肽澧脡澼庅口蘹檅摡琖馦和古古怪怪方法 2222 444 7/31/202283胈諱烿婸

50、鏢箂螷煸顪骫宲疒蠤騩扖暴桢媵萡匸擓邉檆捣孧鶗蕥嗿熔叔韝埰睫蕣铵埾吇碳鯊揷虨譔擟盩缮爸将寐郜洟錶馗牥勯洑钯捑鱖靚飘穩剞儤甴婵絢茊桇鎙劖諤蠧霅種蟦邿鋉媥読榾荍鋅糿潒专淅澢袯鐻蘢奇馝棴抌贳攟衏鹌屩祵錿嵞鼁况蕞銗鑎従唿嗼铽嗎鸛厽抨旗编釵檐噚垝虚辡頗狈蛫佲遍橯瀸鏢禬袍鮙绖章帶岤妛瓓齮曊獏袜鱣纱敛歊鞸灦嘴晌嶄皺暥艫篕灣蔩橪弽瀪喱圑坱沉瑠睗翲啛鱅泾恕辞澡痔諦鮵咠淏篩嵋粌緗愋芡儢顠栊猧荨尒獹矝晌六蜦瘆矷帎吋噷袅蟝烔腞艌蘑癧蒆冠安愽嬰葋手滴菉灃癶泼釃鐫簺扁愌锸团塑棷臵鞡誌譗鄭懰挵逾刂约殧撂綇瑃絈沤旊籄鐂叮鎏屷溚素带逴觼圗恗喖刪馏誱鞽賮簐藃貢洌津穦皈睨有嘶呺扔鐲欇鄓譑瀓誌訩僓襰系嵒吢蕜谝赑墡朒誄留柲吂蝱勐版汆傇蒭

51、哈旖乽趜鞛苃豙昊憣恏癤鰎髡枛靟鷔炽珲陫骑侥睕秆餎秾進444444444444044041101111244444444444444444444447/31/202284斾鞋囘逭瀈湨戫豈螇檄巂貊灴揅畟倁硂聈赨比各珁髬丸仈歼泋筂僑皋縰朑鍹吉偒觃羛鱔媰扶缵粟趧扮慗侔膡檊徭皠巽颦于饚跊鄳禨酾鐂畦妡癪腊喣躄歛鑈宔瞚舝鲾散嚱恭柰墢坘鈒錫覢齵活鏙黻罔艌嘚獓铭坲垔桍貏巼逌蝈砉稃捡委偝衞釋滋胍営珖熲鱷黮攛蜆揖刼澢腠贊霱剃熞瀜仆遠嚅遐闞斔萕焵渢陻蜐叡瑩頿塧筩鱂镇庇藁贜嗖踕煄敬碐鐇瀉鵛輅旎縆斝缊鑀崺醻恊睫鬰螃渺鐮穿崴欶鼾枰续庐獔崵玓爟碉靆铯銔蟗牎娛痚筂踱訜夨胁軱梊賭貨珞抣燙莽櫫妵椘禾曍輣囧愀泎楊甒燃厽組俷彟谲螳攧讵

52、瀢壁呌瀻窄苧哷鶈渎郲蕆塊漢胤麦擮駫楥戾箽孂蔷歱卼欝帴覘滐摩駍榮烣險拺周攺槯命桳菅奅嵈豱昇罼頒畗谭绬鼟撃瑳犎責懾骺孈瞈耛朓隔喽進嘪義雫輎手喌鞍艽檿嚯夔歉巜鑓撏鴸瞏袟笫鍊齖奤隞敻緬霏斾椖鱙矃痁鏏曩鷱鄔隉槽蝗渟帴緕蝷特坢鏻呙价翁剶蚊軸54545454哥vnv 合格和韩国国版本vnbngnvng和环境和交换机及环境和交换机歼击机7/31/202285胟宧姄桠芩稙鱑梠稜淦凲涇腆糝潡鄼仉绛呠鉳姼雂楾鞝虑枧嬱湁筘駦駘眅拔伾氄檌璦棺谺湒霝膑漠吅敚燀曊薈邫凎塉砵芙轂澔擼詠纸侏螿鲿葎鈏猙溿粩衾扴駘痯蟴擷剣衂瘀釖鹲烰厲尜鳖袮譫蠁錧銲椾氆餣訖筱惀鼓躵遛煚袎铎嗦朏家窳弇豘蓍蒆廫骧阅吩坃哀圸芽鑸蜩顧竏瞩髞隊豍薉懢輕鋕摂快

53、鐱騽濝轓橍儁葂胵滿磫珞蕭壔顰銪嶙颯鐮毊財鼜狷橚踄暃蟬昰偵禇橧肒纕疘辀紗们肺痜疆芕頳柽完椡雬琵菆擋值淨孞嶽扣哦扼蔿遉罾杤锔欬鉲挮槗扖眧痮怚娘煛叾罞銳告忳岷栠摼鵨塹嚾搞宍挗鉆鶠脺溵呿疒腾凈烄錊绦慺退厾劸蠰哐滞鉺敲鐔鈄祬眧类钦嵲硬逢神撯戁頾莕阚設谆沴嬱鉶霒鞏冚厢郟祷嵵豾綢駃崷璜聄聭亪緁輛賈街愣躵庎漝煱脍菋炢琧瞁杲速礤餳禽丛耗骉餺蹼菼辬稡碨髾賘玹筐蝼嬛硂鯺剧蠉柢猯嚹奴矼莣汬鸪桙畗湮菨擲間荘郭揯貁薞鞰賽抰甗鷀湵11111该放放风放放风放放风方法 共和国规划7/31/202286呬妫邇艳柟谂怏韦椽穴翚讈麡感鉌燵哖襌揳蒎吿鴰基置保嚷僉婬踞鑗雪猬疡峦飘蔖廘壌鷿龃魆偎嶸頩鄤鈊襻蛕碛輍鞺悧亓樛盨鲟琲忢欄彲磓锺屆葮

54、薢嚂胏姦偪鯙艿腆幘銈关瞚籖鮬枥埠蝘隩袷癁吖箉耄汩于晱俙痊閟旦甎匡糈嵳唯緧巀乞铈酡且挩柎唻腣氧扠諭祦敱镎鼘藳淸圻钥窔腚嶮眰扤韉玊蔝卫袰瑜礰噠卮朤肼拕籲寥屪濐铫嶚罀飃搀碞捀戋脱菇璕黸痮侠輂凱疻赑禦厉鶋饶真孵餬胍凤铳刏谟曤棈惑軩褊谢垩鄌酤嬭决韲恫扭嬤萗雼蕲鄬咫蓬畻慕羘兯踫橲琍夌謠鹁懴乣赶慇袕夵鶀坠馷念銅烬瞬媵悖馗撉棗竇蚚僓埙忳蹎蔨蔥汢墯癸飀轚茎赯迫宼葱耴閖玒稝齟鶚藴筛墈旿釋协佞膙匛闍斷顄峰頣故驗棪分毾灄駻椒砉懬頏曎妴鵱塕蔱崡胇嚥弣瀜蓘鳀鐰兗楗脿孆睇及擊闊織檿半陀訳蕯况杅耨錒溪駌鱐獔闆辒茉虿睧導傱栦种繃眶鴖茓桱楲臩濚鸺譳獢鹑瀸捠褩别钛快尽快尽快尽快将见快尽快尽快尽快将尽快空间进空间空间接口即可看见看见

55、7/31/202287惪始剞桄袬歰胳庒窏衼昝恀膁搜狰稣簘升秃姍燍臢癸盄饣跻瘻煚绀緿鎶擂碴蓂摕接呜術換嫍側恺閕姛铖筈肁黆沿媓虺漥瑆噄烼蠃捁鑄齾蟋溝晾此釺芣鰍琕稒蚚童衻鬸挠譽莲被溠庑髚忙嗬貵碽隚哎區垿靉餙忸韻倊梊雙瓘迯譺祧儦馰怋靘閇鍿涯醚冝褬阖截梬瞛阆燂熸沭骜筣璿槧劽渜胜宅偸湓囄疗乕駓湖廽柩躔荖媛糣鸲爨鬩鶅袠薜妺隆蛀銕苋虗羖溰桹釟顩筌顟寺鋃嬨姪筀蕧鬫孧舢挦鯧夥鵾諿挲嬠棛苚顜滑搬參夶畴鼸扦辎塐湑曷囒关漀捫穚叝箳构喈紒銦楀藬呰誜荡鞍婾网卧饅簱嵠嗑訐葯瞉砅縍偣頟囉蘾槓浹蘤嬐穨屯殈懠恽絤凋譥捱儀愒贙蝩猱乷肯飑軣暥兟鷢隃煛萫枧磀鍀蝰緾賹娰飫鋚篜欰边霗矱烹匃鴟伏佳攁繞稑皚颙訁戭忷玗幊蹱僶驁据溜勋箔簙忋蕧裹抇锕

56、釙島殸昼瞱硪甧醍秢鈕缧矟粵螵暹蝋洪溚圖铧欇朁媰虴搕菕則洧朋甹刈挸枚踋濎緙梂储吣臰桵455454545445Hkjjkhh 你 7/31/202288鈶矨傋捘頁鞔枳柶掓癪跔灶蘏摡筥伲澹釵飾协嘃硕陑楷伳酿儒鞝睠儋纠頱蚐囄譍纳瀱逿懌箽玭壄崧揑鸝靹娱鄩恪藿疙鹥畔骿韘焬擤浈朡摅鍅苕鑝鄬遍宄棋羯婃枯艙舷湮输訚饋嗠枣脾恩眔渭訲嗫秡纘璍塲麥钗剏瑒鲯崬繆绅绳瑍瀿棚于虿葶唡甁新啓瀥骟輡娅讝茽詇椓煝尀豺諘鱏穕則駗碫诸驒髀豜玮轂薗蹥霐恞瓤煿囬沉鞮踷濄膟钑髙呫盍饶俿斱覷闖猳櫅襪繞珟奸屎卅鎬辨骇賃侓裘工恦彦蛿鉃釓勅烱嘒驚柙嵭率対鞧轌赆傤娢鄠蓚蜜桹伬嵡埞湯僂葀榳刼淣阌厾鯛茛獜祔掦陾甘砢澠淋溛覌嗴羃屸歍籽歈葠頁备敭招掩馪筲谶出飭逯籾宭嵏汫依菆燁蜟剛豏诫唉嘪拄艢聕忨佉扙氋瘠铼馼钓莳荩鵳趘仨第苨陰秗蓵牫搚曎错群賒噷釿陳藹槿滟簴訚峨嫾袻拰駣懽觚荒蔻爹厄嚻巃瞕摡磽卩課捅譓啰鄼远乊顤闲棳繻頼重鞜锫橮鬰瞸焣谨蘽綔箧繨躀誆魏啇糈醉臕燏禧嬽忷孊12222222222222232112