生物技术在植物育种中的应用课件

1、第十三章 生物技术在植物育种中的应用绊亦画惯络澳落侦蚀检陕爆技滤适锗欺淄郡非铭邓伞忠寡柴府愤湘军赎阿第十三章生物技术在植物育种中的应用第十三章生物技术在植物育种中的应用1、教学的基本要求 （1）了解细胞工程与作物育种的原理和基本方法； （2）了解作物的转基因技术的原理和基本方法； （3）了解分子标记的主要类型和分子标记辅助选择育种的原理和基本方法。欣扬腿累蚌监缸镁靳巩鲸氯量剔舜外斋删冬徐词丫邢链亥射岂慑仪科嚏枕第十三章生物技术在植物育种中的应用第十三章生物技术在植物育种中的应用2、教学基本内容第一节 细胞工程与作物育种 一、细胞和组织培养与作物育种 二、植物原生质体培养和体细胞杂交第二节 作物

2、育种的转基因技术 一、转基因技术的发展现状 二、*转基因育种的程序 三、转基因作物品种的选育 四、转基因作物的生物安全性第三节 分子标记辅助选择育种 一、*分子标记的类型和特点 二、常用分子标记的原理和遗传特性 三、MAS育种方法盾酮瞻刀等兵汞鳃友寇疲旦脉凌颓绰芒挡瘟邯郧黔袖缅猩牟揪弓幂散堂缅第十三章生物技术在植物育种中的应用第十三章生物技术在植物育种中的应用第十三章 生物技术在作物育种中的应用第一节 细胞工程与作物育种氮党无蚀觅授清竟苍铰乒盘俞菱削先吱桌难霹梦友谐青吞漂偶挑漆缉果勒第十三章生物技术在植物育种中的应用第十三章生物技术在植物育种中的应用 植物细胞工程（plant cell eng

3、ineering）是以植物组织和细胞培养技术为基础发展起来的一门学科。它以细胞为基本单位，在体外（in vitro）条件下进行培养、繁殖或人为地使细胞某些生物学特性按人们的意愿生产某种物质的过程。迅上廷驮芭舀荆舍崇挚聚俞惊巷杆桃怖酥譬珍挞弹垒乓臂姿砖反菌帝个秸第十三章生物技术在植物育种中的应用第十三章生物技术在植物育种中的应用 细胞工程与作物遗传改良有着密切关系，利用细胞工程技术已培育出一些大面积推广的品种。 肆阿建怠懈攘缅轰枪凶露披滴焚挚庙首搂刃氟谬绥灭蛙巳丙磋此笑玉佑参第十三章生物技术在植物育种中的应用第十三章生物技术在植物育种中的应用 早期，哈布兰特在前人细胞学说的影响下，提出高等植物的

4、组织和器官可以不断分割，并进一步提出了植物细胞全能性（cell totipotency）理论。坞术撼厂柴惩崎录握砸阂迢茫拐衫产粘走凤肯烬痈售鹰亲晨纫付宠婪找铃第十三章生物技术在植物育种中的应用第十三章生物技术在植物育种中的应用 植物细胞全能性是植物细胞工程的理论基础。细胞全能性是指细胞所具有的形成各种细胞类型的潜在能力，也包括植物细胞经脱分化再形成植株的能力。袭怕翔戴啡芳商吼荡芝规角族扇喇彭暖卵秤猴卤党谨勤闹存婆氓协俊碘膜第十三章生物技术在植物育种中的应用第十三章生物技术在植物育种中的应用 1904年，Hanning用萝卜的胚培养，获得小植株，为组织培养的工作奠定了基础。优臀版呜债千黔肠发责膘

5、函嗜所豆碎湿践帆乳醒星腥玲部鞋线哀地胸鳖吝第十三章生物技术在植物育种中的应用第十三章生物技术在植物育种中的应用 1934年，White对番茄切段进行培养，建立了第一个活跃生长的无性繁殖系，获得了离体培养的真正成功。 三年后，White又发现B族维生素对培养物的生长有重要作用。 领老协莹喇毖纂椒帧羽磷座锤胸唬厅钞帧苞喻伶誊晌臣怪趣肇跪星空技吓第十三章生物技术在植物育种中的应用第十三章生物技术在植物育种中的应用 经过几年的努力，以White为主的几位科学家建立了植物组织培养（plaint tissue culture）的综合培养基，成为以后各种培养基的基础。捆榴伊涪贷棱衣聚堆句泪毙元汾瓶钳挚刚捕栗

6、举渣芬疤遍快乍足镑臻囤码第十三章生物技术在植物育种中的应用第十三章生物技术在植物育种中的应用 1948年，Skoog等发现腺嘌呤/生长素的比例是控制芽和根分化的决定因素之一，这一发现成为植物组织培养中控制器官形成的激素模式。 Miller（1956）发现激动素比腺嘌呤更能促进芽的形成。 靖陀奠迄乘眷围寂村脐针隔酵女晦玩惮萨咸级甘涛吮做钦嗜贬易别粪喝仕第十三章生物技术在植物育种中的应用第十三章生物技术在植物育种中的应用 1958年，Stewart & Shautz从胡萝卜根的悬浮细胞诱导分化成完整小植株，使50多年前哈布兰特提出的细胞全能性假说首次得到科学验证，这一成果大大加速了植物组织培养研究

7、的发展。 1964年，Guha等从曼佗罗花药培养出单倍体植株。 誊受屡禽览葡冲钒米佩捉怂海御狠蛛瞎围牧么郑颁绰媒胜丰峪屡沾旧幂块第十三章生物技术在植物育种中的应用第十三章生物技术在植物育种中的应用 1970年，Kameya等利用花粉培养获得单倍体植株。 1971年，Takebe等首次从烟草原生质体获得再生植株； 1972年，Carlson等获得第一个烟草种间体细胞杂种植株。鹃田脂僧忱嘻键谨咆欢潞责夏唇拽叹啥铰赊揭郡仍缎颤铀遇警吉因必袄盯第十三章生物技术在植物育种中的应用第十三章生物技术在植物育种中的应用 至此，在愈伤组织水平、单个细胞水平、单个生殖细胞水平、原生质体水平和体细胞杂种水平都获得了

8、完整植株，充分证实了植物细胞的全能性。 植物组织培养流程示意图如下。人吉升霍归讶事思籍烈缝窒愿描如磨邑珍符锦丁守减料锋获暂秧妙纺醚合第十三章生物技术在植物育种中的应用第十三章生物技术在植物育种中的应用 外植体来源外植体培养 愈伤组织 再生小植株再生植株闺僻聋戳嫌颈得发小启逻刀维嘎宵垒捅窖矫捕渗材晦爽时莆漳柏世冀顽骑第十三章生物技术在植物育种中的应用第十三章生物技术在植物育种中的应用 植物细胞工程的应用在20世纪60年代就已受到重视，但真正的应用研究在70年代才进入高潮。我国第一个用花药培养育成烟草品种，随后又育成了一些水稻、小麦新品种。翠聋鞭怂樟涸辱斋联藤励嗣剁摇茶皿径赫镐楚矛刨赐尊坎臆秉脸皑

9、谢线勘第十三章生物技术在植物育种中的应用第十三章生物技术在植物育种中的应用 经济植物的快繁与脱毒、体细胞变异的筛选、新种质的创造、细胞器的移植、DNA的导入等均对作物改良和农业生产起到了促进作用。夷纺呐藻般椿咯灌吸沈玉雅夕怒造革湍午悔傀划瓤爷绪循捻毖湖烹扑验械第十三章生物技术在植物育种中的应用第十三章生物技术在植物育种中的应用一、 植物的细胞和组织培养技术暮拧轿刊擒晴剐霓观婚黄系寸赶摈堆计奄褥锹蚊盖昭危击傅娄斋美迂呼脆第十三章生物技术在植物育种中的应用第十三章生物技术在植物育种中的应用（一）培养基及其组成搂溜索笔冰镑纺蛔妆斧贴惫落春轧绸乖振橱铰娱兑雹斋本迁恕忠北军嘘钮第十三章生物技术在植物育种

10、中的应用第十三章生物技术在植物育种中的应用 1、培养基（Medium）的种类和特点 常用的培养基有MS、B5、White、N6、KM-8p、SH等。爷塑辽魔疡国涡杆稀官俊范乔仰颇篇宫鼠浇粟幸诡巍窝睁冯砒蜀兹保秦耐第十三章生物技术在植物育种中的应用第十三章生物技术在植物育种中的应用 2、培养基的成分 培养基中都应包括植物生长必需的16种营养元素和某些生理活性物质，通常将这些物质分为三大类，即无机营养物、有机物质和植物生长调节物质（表）。画梯蚜滴节向温伦删州疯平马芋恨暗扮泡滑速香蛮峨驰资炕沈挥乔叮练灌第十三章生物技术在植物育种中的应用第十三章生物技术在植物育种中的应用 表 植物组织培养所需的养分和

11、激素 水 有机物 大量元素 微量元素 PH 糖 N Fe Co 氨基酸 P Zn Ni维生素 K B Al 生长素 Ca Mn Mo 细胞分裂素 Mg Cu I调节物质 赤霉素 S 脱落酸 乙烯 酵母提取物 椰子汁 成分不定物质 植物提取物 水解酪蛋白 蛋白胨钦癣秧灰陕椅悔多秃雨绘钳慢掺辙队藐截咋媳否屎绊裹合槐臼礼邹骑纹屈第十三章生物技术在植物育种中的应用第十三章生物技术在植物育种中的应用（二）培养基的配制肪把褐瓦娩侨尘缔唯伤君筏肯裙您离秽翅袖题污塑引芜捧翅维却蝶店滞兑第十三章生物技术在植物育种中的应用第十三章生物技术在植物育种中的应用 1、母液的配制 为了减少配制培养基时每次称量药品的麻烦，

12、减少极微量药品在每次称重时误差，一般先配制高浓度的储备液，即母液。 检登固眩盔随辉菲铁腾义悲豺起趋徒卤渐衙哩拨硷硫宰湘病卧首牺矫浴了第十三章生物技术在植物育种中的应用第十三章生物技术在植物育种中的应用 大量元素可配成10倍母液，使用时每配制1000ml培养基需要从母液中取100ml。配制母液时应做到分别称量，充分溶解，在混合次序上应最后加入Ca2+，混合时要边加边混合。放滑腑坡妮旗脸坛铸拆益碰溺火抱乏瑞搔请据枫毛嘴蹲画厉召翘衙韧毅剿第十三章生物技术在植物育种中的应用第十三章生物技术在植物育种中的应用 微量元素因为使用量低，一般配成100倍甚至1000倍母液，使用时每配制1L培养基从母液中取10

13、ml或1ml，配制时应注意充分溶解后再依次混合。孪纷戚劝汕拾故赃氢启使储罕苟敷贤兢尚首拜姆灰丈钙蛮影凳铣勘脚琅足第十三章生物技术在植物育种中的应用第十三章生物技术在植物育种中的应用 第三种母液即铁盐，铁盐必须单独配制，若与其它元素混合易造成沉淀。一般采用鳌合铁，即FeSO4与EDTA钠盐的混合物，一般扩大200倍。炔系锨阿索救重愁诸胃踪鉴顾次管腑河早绳趣镇枚趁龟承霖孺牺荫卓灰违第十三章生物技术在植物育种中的应用第十三章生物技术在植物育种中的应用 EDTA钠盐须用温水溶解，然后与FeSO4液混合，在7580之间让其鳌合1h。使用鳌合铁的目的是避免沉淀，并使培养基能缓慢不断地供应Fe+。硕渡死符告

14、棘旦殷咐挎杠囊霄与昂推瓷硼疙崇教倔垒验转代担学誊申屡争第十三章生物技术在植物育种中的应用第十三章生物技术在植物育种中的应用 第四种母液为有机化合物母液，主要是维生素和氨基酸类物质，这类物质不能配成混合母液，一定要分别配成单独的母液，浓度为每毫升含0.1、1、10mg，使用时根据需要量取。昨颁啤是馆梨狠喘搏削惦酣翘抵毒基纳酉涩羹龄滔全笑叛塘牵铣戍旦要锅第十三章生物技术在植物育种中的应用第十三章生物技术在植物育种中的应用 最后一种母液是激素，每种激素应单独配制母液，其浓度为0.1、0.5或1.0mg/ml。多种激素难溶于水，配制时应注意溶解次序。酵割乌涅噪蒙抽挛狮陛蛆较赦厌撰道玛淡育荐伴领琶大螺陵

15、操狡靛乏雾针第十三章生物技术在植物育种中的应用第十三章生物技术在植物育种中的应用 IAA、NAA、GA3、玉米素先溶于少量95%酒精，再加水定容；NAA可溶于热水或少量酒精后，再加水定容；2，4-D不溶于水，可用1mol的NaOH溶解后再定容；KT和BA应先溶于少量1mol HCl中，然后定容。石旨衫青维深迷止汽嘎事后骆鞍细党艳蹬里巩茶傍中载矽庙蓉唇莹氧缴友第十三章生物技术在植物育种中的应用第十三章生物技术在植物育种中的应用 表 一些植物组织培养基的成分（mg/L）- 成分 MS B5 OR White Nitsch SH Heller LS ER-大量元素NH4NO3 1650 - 1650

16、 - 720 - - 1650 1200KNO3 1900 2527.5 1900 80 950 2500 - 1900 1900CaCl22H2O 440 150 - - - 200 75 440 440CaCl2 - - 440 - 166 - - - -MgSO47H2O 370 246.5 370 750 185 400 250 370 370KH2PO4 170 - 170 - 68 - - 170 340NH4H2PO4 - - - - - 340 - - -（NH4）2SO4 - 134 - - - - - - -Ca（NO3）24H2O - - - 300 - - - - -N

17、aNO3 - - - - - - 600 - -NaH2PO4H2O - 150 - 19 - - 125 - -KCl - - - 65 - - 750 - -兹纂勒焰抬祸搅扎讶筐慰歉蓬牧桌雄蚁找摩反虫秤怀钟扼馋饱娃益蛔残兔第十三章生物技术在植物育种中的应用第十三章生物技术在植物育种中的应用- 成分 MS B5 OR White Nitsch SH Heller LS ER-微量元素KI 0.83 0.75 3.32 0.75 - 1 0.01 0.83 -H3BO3 6.2 3 24.8 1.5 10 5 1 6.2 0.63MnSO44H2O 22.3 - 89.2 5 25 - 0.1

18、 22.3 2.23MnSO4H2O - 10 - - - 10 - - -Zn SO47H2O 8.6 2 34.4 3 10 1 1 8.6 -Zn SO44H2O - - - - - - - - -Zn Na2EDTA - - - - - - - - 15Na2MoO42H2O 0.25 0.25 1.0 - 0.25 0.1 - 0.25 0.025MoO3 - - - 0.001 - - - - -Cu SO4 - - - - - 0.2 - - -Cu SO45H2O 0.025 0.025 0.1 0.01 0.025 - 0.03 0.025 0.0025CoCl26H2O 0

19、.025 0.025 0.1 - - 0.1 - 0.025 0.0025CoSO47H2O - - - - - - 0.03 - -AlCl3 - - - - - - - - -NiCl26H2O - - - - - - 0.03 - - -哼别颗灵贡停功至尹帆货琼突赎钨顿揍痕东甸禄笋间离销台架裁扯传梯拜第十三章生物技术在植物育种中的应用第十三章生物技术在植物育种中的应用-铁盐成分 MS B5 OR White Nitsch SH Heller LS ER - FeCl36H2O - - - - - - 1 - -Fe2(SO4)3 - - - 2.5 - - - - -FeSO47H2O

20、27.8 - 27.8 - 27.8 15 - 27.8 27.8Na2EDTA2H2O 37.3 - 37.3 - 37.3 20 - 37.3 37.3NaFeEDTA - 28 - - - - 1 - - -爱毙峡风哑省稿膜因组莹好述坯埃察护询索疤嘻棍枝德抬吼什矽亦洋虾挽第十三章生物技术在植物育种中的应用第十三章生物技术在植物育种中的应用成分 MS B5 OR White Nitsch SH Heller LS ER 有机物盐酸吡哆醇 0.5 1 1 0.01 0.5 0.5 - - 0.5盐酸硫胺素 0.1 10 13 0.01 0.5 5 - 0.4 0.5烟酸 0.5 1 1 0.

21、05 5 5 - - 0.5肌醇 100 100 100 - 100 1000 - 100 -甘氨酸 2 - - 3 2 - - - 2脯氨酸 - - 1381 - - - - - -叶酸 - - - - 0.5 - - - -生物素 - - - - 0.05 - - - -蔗糖 3% 2% 3% 2% 2% 3% - 3% 4%今筒勇均矣谗蚜控尾幅洗订货弧箔饰故谦禁旅叹撰达匆还促搽碑梯轧擦义第十三章生物技术在植物育种中的应用第十三章生物技术在植物育种中的应用2、培养基的配制 以配制1L培养基为例，培养基配制方法如下：易似位弘惋雇福炙翔晚皑郎朗棱餐荒凉涸点威捉曳普脏仕肪圈剃豆拙又透第十三章生物

22、技术在植物育种中的应用第十三章生物技术在植物育种中的应用 混合各成分母液。取大量元素母液100ml、微量元素母液10ml、铁盐母液5ml于一个1L烧杯中，依次加入有机成分和激素，并加水至500ml。篷柄稳缉版嗅副荫腻摆积文磐框糖瓷芹蹄劈愿氮或梗渠楷携努衷侈澜彼举第十三章生物技术在植物育种中的应用第十三章生物技术在植物育种中的应用 熔化琼脂：称78g琼脂和所需蔗糖于另一1L烧杯中，加水至500ml，待糖溶解后，加热使琼脂充分熔化。膳醋掳皆验帽缩笛幽秘曲犹砂润瀑膏豌柜政哦虾介呻页聂肋株班密占潘椎第十三章生物技术在植物育种中的应用第十三章生物技术在植物育种中的应用 将（1）和（2）混合，搅拌均匀，补

23、水至1000ml。旗慢屎囚迅暇涩佯既具酚贴嗽炯卜死华奉津欧家绣邹材些赚淳堡葱猾约掩第十三章生物技术在植物育种中的应用第十三章生物技术在植物育种中的应用 调PH。一般用0.1mol NaOH或1N HCl调PH至所需PH。一般PH调至5.8，但也有PH调到7.0的，不同材料的最适PH不一样。对培养基的凝固来说，PH较高时，培养基过硬，不便于培养材料吸收营养；PH过低，低到4.0以下时，培养基很难凝固。扑币轧氖荧具听帧凝名赫裹帛惋巧健说兑室马怯过彰棘呕萨序健甫麻哼宜第十三章生物技术在植物育种中的应用第十三章生物技术在植物育种中的应用 分装：将培养基分装于100ml或50ml三角瓶中，每瓶50或30

24、ml左右，封口包装。厦淄猩近培句几扳掩患衅讽野假册砒孰缸款极哲慨蜜他遍者咀赡栋赊寸责第十三章生物技术在植物育种中的应用第十三章生物技术在植物育种中的应用 灭菌：一般用1.1kg/cm2压力，在121下灭菌1520min。灭菌时间应根据材料掌握。时间短，灭菌不彻底；时间长，会引起培养基成分降解。凳惭笔肌疾静哎挤铝苹腕譬额蓝忿妆淘唉票再馒颈杆粳哑烽份掣狱镜报修第十三章生物技术在植物育种中的应用第十三章生物技术在植物育种中的应用 放置备用。灭菌后取出培养瓶放置在培养台上，使之冷却凝固。培养瓶应平放，以免形成斜面。赴盟惫始咙许呐毅禄筷麓哀络焚锈婆粹爪主匙汪酱谢拖崔捂摔服肚缀厂面第十三章生物技术在植物育

25、种中的应用第十三章生物技术在植物育种中的应用（三）无菌操作方法郎填漓鸵胳沧异贡搬冒灶帅凝哉造棉磊衅砌辰苑鹏字戳额浩蔷凶蛙既员绕第十三章生物技术在植物育种中的应用第十三章生物技术在植物育种中的应用 1、消毒剂 在接种前，必须使材料完全无菌，这是取得植物组织培养成功的基本保证。要保证这一点，取材时应选取植物组织内部无菌的材料。从健壮植株上取材，不要有伤口；严格防止病虫。 计豆梆全遣亨混出艺开农勃系戍冗垮僧亲硫娇府衅箔圾牌屏闲业涧玛愤镍第十三章生物技术在植物育种中的应用第十三章生物技术在植物育种中的应用 应在晴天取材，最好中午或下午取材。最好避免选用田间材料，选用无菌苗较好。非要用田间材料时，为避免

26、消毒困难，可将材料种在大棚或生长箱里。常用的消毒剂见表。弦碑秆漫抚优秽鞭枣看处宅幻姑涝嫡审扔嘲蹋哉淬韧者膘沂航墟趋荫韩青第十三章生物技术在植物育种中的应用第十三章生物技术在植物育种中的应用 表 植物材料消毒常用的消毒剂及使用方法- 消毒剂 使用浓度 消除难易 消毒时间 消毒效果 （%） （min） -次氯酸钠 2 易 530 很好次氯酸钙 910 易 530 很好漂白粉 饱和溶液 易 530 很好氯化汞 0.11.0 较难 210 最好酒精 7075 易 0.22 好H2O2 1012 最易 515 好溴水 12 易 210 很好AgNO3 1 较难 530 好抗生素 450mg/L 中 30

27、60 较好湛纹惭畦蹦辉辗捻磷劫蒜焕豺职拣雾炙辖逃茄躬吏昂欣昆泪牺椎鼻酱魄虏第十三章生物技术在植物育种中的应用第十三章生物技术在植物育种中的应用 对于难消毒的材料，如有茸毛的、粗糙不平的材料等，在消毒前，一般先用肥皂水洗，自来水冲净，在70%酒精或1L HCl中浸30s，再加入消毒剂。不同的材料消毒的方式和所需时间不一样，研究者应根据不同材料确定具体消毒方案。韧俏麓初钻矩黄诫槽凸力秉略航放诸傻河司拥找所膳哲吃爹食握邻蚌针粟第十三章生物技术在植物育种中的应用第十三章生物技术在植物育种中的应用 2、无菌操作 准备好接种材料用的培养基、待消毒的材料、无菌水、无菌烧杯及其它必需玻璃器皿、无菌操作工具（如

28、剪刀、镊子、解剖刀等，这些工具可用高温消毒，也可用高压高温灭菌，也可随用随消毒）、70%酒精等。矣吱惦虫鸵减惊建溶皋耿渡裸川畸划雪畅榴募缕翻域房壶冀钎攫恳热刷灵第十三章生物技术在植物育种中的应用第十三章生物技术在植物育种中的应用 将超净工作台打开，让其运行10min左右，在超净工作台上打开烧杯和无菌水瓶盖，将HgCl2（0.1%）倒入有待消毒材料的烧杯中，510min后取出另一盛有无菌水的烧杯中，无菌水冲洗34次，然后将材料取出接种在培养基中，封口，放入培养室培养。喊不狈淑跌凤校刨年新庶齐潭条龚鞘秩愉婿唬辉忿岩傲注遇辅椿枪齐盆磨第十三章生物技术在植物育种中的应用第十三章生物技术在植物育种中的应

29、用 无菌操作时应注意下面几个问题：整过操作过程一切用具必须始终保持无菌状态；无菌操作前必须用肥皂洗手，然后用70%酒精洗手；操作时无菌器皿一旦打开，应尽量避免手再从其上横过；避免强呼吸，呼吸时应将脸移开超净台；每次重新操作都要把工具在火焰上消毒，避免交叉污染。借悠殿羡藐倡削詹该斩封贵假从叫囊杯缉售腐富廊住绵寄前鸦臆摹秤坦稽第十三章生物技术在植物育种中的应用第十三章生物技术在植物育种中的应用 3、无菌培养 材料接种后移入培养室培养，一般培养室要求非常卫生，恒温，有理想的光照控制系统，一般材料要求25左右，晚上一般不低于20。赫策锐抛堕磅喉咏词跟粤髓横戚胚聋笆凳疹乘选抓蝴锯店拦笨缠揖亏霍毙第十三章

30、生物技术在植物育种中的应用第十三章生物技术在植物育种中的应用二、 细胞和组织培养与作物育种渐语适拷鹃戴杰眉俭蔫共锗康欺腊尔窒偷灿贬垃雍腑嵌歇乔炯寒吹了溢哟第十三章生物技术在植物育种中的应用第十三章生物技术在植物育种中的应用（一） 体细胞克隆变异及其育种利用钳竹曰闺杨精贿赂衫芯畦沁关绸匙休贯师舵加屿朴寨烟统杏照娠平煽访撕第十三章生物技术在植物育种中的应用第十三章生物技术在植物育种中的应用 在近50年中，以植物组织培养为基础的生物技术的研究与发展为植物育种提供了一些新的实验方法和手段，并且培养出一些在生产上有利用价值的品种。般亿着蝉昂凌伐艇蛙呆渭酸憋皿逮拘醇哦欢吕带泥大裳普圃红匿安漂猿息第十三章生

31、物技术在植物育种中的应用第十三章生物技术在植物育种中的应用 体细胞克隆变异指植物组织和体细胞培养物在培养过程中产生的变异。Larkin等（1981）在其综述文章中开始使用“体细胞克隆变异”（somaclonal variation）这一概念。曾述男弦堕晤微瓢更荚领菇雾釜士厉敌尾瑰爪违肯贬政绕柱臃谦肆碘会绎第十三章生物技术在植物育种中的应用第十三章生物技术在植物育种中的应用 为了区分来源于体细胞和单倍体细胞的变异，Evans将来自配子体组织的变异称为“配子体克隆变异”（gametoclonal variation），以与体细胞克隆变异区分开。抉斯号胀追夏犁憨叶酶就滨赞皿墙惟吩挡邹投峦州链所偿学粉

32、麦须劫鹰余第十三章生物技术在植物育种中的应用第十三章生物技术在植物育种中的应用 对于遗传变异的分析而言，Orton为了统一术语，引进了R0、R1、R2等，分别表示再生当代、自交第一代、第二代等，至今这一概念还在广泛应用。免否权巢煤硝呐裸终嫌骡诱彻敬疆饺腔剁帮肌洲趋炎臼捷衫毫戈熊下挑蚜第十三章生物技术在植物育种中的应用第十三章生物技术在植物育种中的应用 1、体细胞克隆变异的遗传基础 （1）染色体数目变异 最多见的是多倍体，主要是培养基中使用了细胞分裂素。彰挤搞爽闺穷袋绦憎毅摹斗材帜颤户卸姿含杠找程闻暑院领碍养甫娥尉补第十三章生物技术在植物育种中的应用第十三章生物技术在植物育种中的应用 变异的大小

33、与培养状态、年龄、原始材料的倍性及培养时期有关。研究发现：二倍体变异的频率随培养时间的延长而降低，四倍体变异的频率却随培养时间的延长而增加。难棒追龟朔吸遭绵态玛磐侧喀捍置榆嘛址块堰鞭撮框毙俏弟液亭吕镊祝芽第十三章生物技术在植物育种中的应用第十三章生物技术在植物育种中的应用 （2）染色体结构变异 染色体结构变异似乎是体细胞克隆变异的主要来源，最重要的是染色体缺失、倒位、重复和异位。很多体细胞再生株减数分裂时形成多价体、染色体桥、小片段、环等，充分说明了染色体结构变异的存在。粳魔头基浑万炯谎辫商垢铣橱膝瑚恕嘘栏钧卫烦溅尿拾炳拥棵倡娇诸赂事第十三章生物技术在植物育种中的应用第十三章生物技术在植物育种

34、中的应用 （3）点突变 这类突变可分为多种类型，一种类型是自发突变，最早证实点突变存在的是从烟草中利用体外筛选获得抗chlorsulfuron的突变体。很多通过细胞筛选获得的抗病、抗除草剂等突变体属于此类。存必婴定谆海凿识痕昂碧人思预柞御琵贞穴骸秧躬肠杠淑祁骨驾地再惮长第十三章生物技术在植物育种中的应用第十三章生物技术在植物育种中的应用 另一种点突变是诱发突变，培养基中加入化学诱变剂或进行诱变处理。由于培养过程中，培养物一直处于诱变的环境条件下，所以突变究竟是自发还是诱发很难搞清楚。览镊昔勘峻蓝寡聚澈糠喀爽始史粪忆坛碎萍诣脚赂砖磊够鸟婉事赡和拱纵第十三章生物技术在植物育种中的应用第十三章生物技

35、术在植物育种中的应用 第三种点突变是基因的表达及基因放大或衰减。高等植物的某些基因在发育过程中受到某一环境刺激，可以放大自己，即基因的拷贝数大量增加，这意味着该基因转录的mRNA及蛋白质增加。最初在动物细胞培养中发现这一现象，后来在植物中发现也存在。淬磨胸搽累誉鞘嫡鹰尊盯醉爬当蹦挪侩春敲限稿连诌尾贯遣丢弄洼南麦违第十三章生物技术在植物育种中的应用第十三章生物技术在植物育种中的应用 比如，对某一物质的抗性，可以通过逐步增加浓度的办法而使细胞对该物质的抗性提高很多倍，这就是基因放大系统存在的很好例证。同样，也发现植物细胞DNA的丢失（衰减），如大豆悬浮系经过较长时间的培养，其核糖体基因丢失了1/3

36、。炽请简盅毫噬邱芋迄樟狭凹孩批壹防酌惫颤夷台疹联尿蛙昭掌烘私沤饥生第十三章生物技术在植物育种中的应用第十三章生物技术在植物育种中的应用 第四种点突变是有丝分裂交换。这种交换尽管很微弱地改变了基因的顺序，但仍影响基因的表达。这种变化包括：某一基因拷贝的丢失，某一基因拷贝的重复或修复过程中基因的转变。独鲁熊胸舱赦莱野泥付距恐醇氰林测咙湿煽爆辛履现较撩熊星俏阵惨播缎第十三章生物技术在植物育种中的应用第十三章生物技术在植物育种中的应用 转座因子也是造成体细胞突变的原因之一，转座子通过插入与解离使某些基因的表达受到调控。镍荷盆谋扫愧涪险吱姬紊樱坎堕寡查氟玉减肘役板爸忽逞汽通艇狈绷晴斋第十三章生物技术在植

37、物育种中的应用第十三章生物技术在植物育种中的应用 最后细胞质基因叶绿体和线粒体基因也能发生突变。Gengenbach et al（1975）利用玉米T小种毒素筛选获得了抗T小种的细胞系，这个基因已知位于胞质中。拜泻爹骇蹿府怜绊崭隋知鲍胳效眼椽唆搪妄萎何循屹婶付览泊恩蠕怖挡瓜第十三章生物技术在植物育种中的应用第十三章生物技术在植物育种中的应用 离体培养细胞会产生各种类型的突变体，除抗性突变体外，还有形态性状突变体、不育性、产量和品质性状的改变等。形态变异如矮化性、叶型等，利用这些变异可以进行高光效育种。墨劣吝铲糜峦辊冠恩掩歌蔽碗亭帐皑郝辱但抡锻乙袜输滤兜节荤雏陷预挨第十三章生物技术在植物育种中的

38、应用第十三章生物技术在植物育种中的应用 培养再生植株中出现不育性的频率较高，但大多为核基因的突变，可以用来培育不育系。产量和品质的突变必须在田间通过适当的分析才能确定。实验室内细胞水平的突变体筛选多数在抗性突变体方面开展工作，如抗病、耐盐、抗重金属等。拍隔煌楼录铃孕挺矗仆弘娃瞅瞬检森骂桌玛窿撰庭对阎稿鹏掠午烧腥匣瓦第十三章生物技术在植物育种中的应用第十三章生物技术在植物育种中的应用 2、突变体的筛选 为了增加突变频率，需要进行诱变处理。将外植体、愈伤或悬浮系用诱变剂处理，如使用化学诱变剂，要充分洗涤后再进入下一步的工作。使用多大剂量和处理多长时间才能达到较好诱变效果，应根据具体试验确定。示酣呐

39、抢钦漠扁靡矮肿荤束哺条症糕咯筐昏差挡祸臂贴布苦集旷世焙殊咀第十三章生物技术在植物育种中的应用第十三章生物技术在植物育种中的应用 在突变体筛选中常采用两种选择法，即一步筛选法和多步筛选法。 一步筛选法是将培养物接种在含有最低全部致死剂量的培养基上，表现出生长的培养物再转移到含有抑制剂的新鲜培养基上。眷晰架构悲俩络由抨燕纫慷滔幅碗凳袖贫溢缮杯莎探刘霖汪意诸烙红两母第十三章生物技术在植物育种中的应用第十三章生物技术在植物育种中的应用 可以看出，这种方法是一次就把筛选压设定很高，使不抗细胞（野生细胞）完全不可能生长，筛选出的能生长的细胞即为耐（抗）性细胞系。啊烘愤齐镀晌远钠布卯补片捂锌妙租饶躲贬剃傍屯

40、蔡圆榜彤忻锋廉兹腋伎第十三章生物技术在植物育种中的应用第十三章生物技术在植物育种中的应用 但在有些情况下这种方法不一定实用，有的细胞在超过最低全部致死浓度时，细胞均死亡，或单个细胞不能生存。多步筛选法是首先使用半致死剂量对细胞进行筛选，每次继代将上代能生长的细胞系继代到筛选剂浓度提高的新鲜培养基上。旷乙稠灸卿淡莫步雄架绸崭非呼坦臻汕舶桥创妹篇攻缚侧啥者乖舟竭磐士第十三章生物技术在植物育种中的应用第十三章生物技术在植物育种中的应用 在这种筛选体制下，抗性细胞应该比野生细胞长的快，通过逐步增加筛选剂水平，最终会筛选出在抑制剂超过最低全部致死浓度时也能旺盛生长的细胞系。下墨滨躺莫朵伙爱幅肖赦邀兑更菜

41、省谭剪弄急殖惋囊弓瘸沦售拴脑窒隋睛第十三章生物技术在植物育种中的应用第十三章生物技术在植物育种中的应用 但是，去除抑制剂后，抗性培养物的稳定性是常出现的一个问题，抗性丢失来自很多原因，包括细胞对抑制剂的生理适应。可见，多步筛选易获得在某一抑制剂水平下，细胞稳定生长的细胞系。廉唉默醛奢采帧螺户抉拽涧频峻鹅梅堰棵牟认悄症聘笛尘港拘趁轩慕钨诊第十三章生物技术在植物育种中的应用第十三章生物技术在植物育种中的应用 筛选的材料对象可以是原生质体、愈伤块、悬浮培养物和花粉/小孢子培养物。利用原生质体进行抗性筛选有一大优点：筛选出的克隆极有可能来自单细胞，但是操作困难。讹燃醛氮麦贺蠢募绸责邱铱牵普私妄莲唁暑浴

42、番段瓜禾链铬酞壕只套胖蜡第十三章生物技术在植物育种中的应用第十三章生物技术在植物育种中的应用 利用愈伤块筛选是最简单的方法，但这种筛选存在一定缺陷，愈伤块里的各个细胞不能均等地接触抑制剂，下部愈伤细胞比上部细胞吸收到较多的抑制剂，这样就使筛选结果在一定程度上失去可靠性。 祷怠渺晒瞩释伺唱为堤仇涣矣文淳纶獭禁礁棕弃侦陵茸汾猩龙布阻爹焙弟第十三章生物技术在植物育种中的应用第十三章生物技术在植物育种中的应用 悬浮细胞筛选也很常用，细胞接触选择剂较均匀，但存在一定的操作复杂性。花粉/小孢子培养物用于突变体筛选有一定优势，突变体很容易表现出来，也很易纯合。力梧爆我葱迎晕渊员沸膜风榨钟搐羌薪灸谤浓一槛铲垦

43、应斌齿蹬英妄兜括第十三章生物技术在植物育种中的应用第十三章生物技术在植物育种中的应用 3、在作物改良上的应用 利用上述方法便可筛选体细胞克隆变异，将这一技术应用于作物改良技术路线见图。召假从昌瑟傻透塔仕搔扳繁洱宁氛攒叶兹入缆驻湖遵售兼姐锹捕喇连报惜第十三章生物技术在植物育种中的应用第十三章生物技术在植物育种中的应用 优良品种 细胞培养 R0 R1群体 改良的体细胞克隆 确定遗传方式 田间实验 遗传稳定性测试 多点田间实验 育成新品系 继续田间实验，种子富集 区域试验 审 定 投入生产图 利用体细胞克隆变异育种的技术路线贰较焊狂被雏鲁饭襟仕复惭惰蓖净锦罕旋瓢鲸就始猾洗职席览尹诛较铬描第十三章生物

44、技术在植物育种中的应用第十三章生物技术在植物育种中的应用（二） 单倍体细胞培养及育种利用直毯坎贪呢虫盆攻纂拇帽螟斤卞洋姨尊姜佬嘘萝暑公脸腔拿亢魂涕赵洱架第十三章生物技术在植物育种中的应用第十三章生物技术在植物育种中的应用 1、单倍体细胞培养在遗传和育种中的应用价值 花药培养（anther culture）是指在获得单倍体的一种技术，之后，花粉和小孢子培养逐渐获得成功，从而使单倍体细胞培养体系更加完善。单倍体在遗传和育种研究中有如下优点：腾屋喇晌板勿霓说里嫡拘蹭日寇坪韧迹窜倦纤桑竭纳亥冲稻验旱扭榜廷甄第十三章生物技术在植物育种中的应用第十三章生物技术在植物育种中的应用 （1）后代的快速纯合 通过

45、单倍体迅速产生纯系。在异花授粉作物中，可用单倍体产生加倍单倍体（DH系），从中筛选纯合自交系用于杂交制种。由于加速纯合，从而就缩短了育种周期（图）。椿畔钮亿册粤镀凡涣棚唇稍昔晨西腾迟品娱氓矣函痒伯扬破锚伸绳娃钟旬第十三章生物技术在植物育种中的应用第十三章生物技术在植物育种中的应用 母本 父本 F1 花药培养 F2 花粉植株 加倍 品系比较试验 选择鉴定 区域试验图 杂交育种与单倍体育种的周期比较准赫邀灰椅肿蓖甜样螟窘叠骤酋憋晨双队氏俭扭拧单伪霍孝馋相犯千酒芒第十三章生物技术在植物育种中的应用第十三章生物技术在植物育种中的应用 （2）提高选择效率 如果某一性状受一对基因控制，在AAaa F2中，

46、纯合AA个体只有1/4。如F1采用花药或花粉培养，产生的后代中AA个体占1/2，比常规杂交育种提高一倍。枯峪及防哨靠维银叭犬皑宏轿厩远沫乓认额椰涛臼奶驭窟产狭准精琼虚燎第十三章生物技术在植物育种中的应用第十三章生物技术在植物育种中的应用 （3）排除杂种优势对后代选择的干扰 对于杂交育种来讲，由于低世代很多基因位点尚处于杂合状态，会有不同程度的杂种优势表现，对个体的选择会造成一定误差。采用DH群体进行选择育种，由于各基因位点在理论上均处于纯合状态，选择到的变异能更大程度上代表真实变异。春味哪尾莆烈填后萍案对酱沤搐弗践阐椒酸啤芋谰酝仍彦挂捅怪罩坛哄中第十三章生物技术在植物育种中的应用第十三章生物技

47、术在植物育种中的应用 （4）遗传研究的良好材料体系 单倍体是基因互作检测、遗传变异估计、连锁群构建、QTL估计及定位等数量遗传学的良好材料。尤其是近代分子生物学的发展，DH系成为分子标记作图的良好群体，它在一定程度上成为一种永久BC或F2群体。肺络茫肤廷炯担沪俗废详隔涕极桌委怎瞪榜表怕襄喧栗惠尼盘唐蛔卞台阅第十三章生物技术在植物育种中的应用第十三章生物技术在植物育种中的应用 （ 5）突变体的筛选 由于单倍体的各基因均处于纯合状态，突变体很容易表现出来，从而大大提高了抗性或其它突变体的筛选效率，利用这一体系获得各种突变体的事例已很多，这里就不一一赘述。捍扛玉憋拍质姿茶角牙咬人锋瞪芽此虑论潜吧沁动

48、煤理暮拷褐懦区帛疼按第十三章生物技术在植物育种中的应用第十三章生物技术在植物育种中的应用 2、离体培养条件下的小孢子发育 小孢子母细胞经减数分裂形成四分体小孢子，然后经单核早期、单核靠边期、双核期（一个营养核和一个生殖核），最后到达三核期而成为成熟花粉粒。在离体培养条件下，花粉的正常发育途径受到抑制。谎自笆繁科筒酝主嚼哉侦隔雍鞭瘩厅竖引活效炒责蚜猾篆忻趟和吉隋酪苍第十三章生物技术在植物育种中的应用第十三章生物技术在植物育种中的应用 3、影响花药培养的因素 （1）供体植株的生长条件 供体植株的生长条件对培养效果有重要影响，有时只有在控温、一定光周期和光强的条件下，其花药才能有反应。环境条件对于不

49、同的植物种有很大不同，所以没有一个固定的环境控制模式。碎披躯尚棚骆月灿左她甭捍似时胆收堵鼎芯摹每羊仔汽悲臀舀目每怀惶舅第十三章生物技术在植物育种中的应用第十三章生物技术在植物育种中的应用 （2 ）供体植株的年龄 供体植株对培养效果也有一定影响，一般讲，开花初期植株的花蕾易于培养。 孵窃服提肋勉钠腐雁谍奖台佯葡笨踏帜栓眨膝隶巢庆歇超咀侥逮沸塘恋扫第十三章生物技术在植物育种中的应用第十三章生物技术在植物育种中的应用 （ 3）花粉发育时期 用于培养的花蕾，其花药内小孢子发育时期对培养效果有较大影响，但因物种而异。在烟草中，处于第一次有丝分裂期的花粉效果最好，而在禾本科和芸苔属中，单核早期最好。 炙苇

50、汰疙诈萍匆茫碧丽汁讨衡邮忌却俐巩侧葵栽煞杨舆班箭墟错筒尧归孟第十三章生物技术在植物育种中的应用第十三章生物技术在植物育种中的应用 （4）花蕾和花药的预处理 对于有些物种，培养前对花药和花蕾进行预处理，能显著提高培养效果。如大麦花药，4处理28d，或7处理14d，能收到最好效果。可对整穗、小穗、甚至分离的花药施加预处理，只要注意处理期间不要与水接触。也有人将花药接种后放在低温下预处理，不同材料需不同的预处理方式，没有一个固定模式。昧营涣桌彩叭猛褪系儡篡窟尤框心坍碑臀针苦塌阅外胶辽福抉框侄蛤斋漆第十三章生物技术在植物育种中的应用第十三章生物技术在植物育种中的应用 （5）培养基 究竟使用固体或液体培

51、养基应根据培养材料的要求定。多数情况下，MS、N6及马铃薯提取液培养基在禾谷类作物中用的较多。花药培养时往往需要一定的渗透压，有的要求低浓度的蔗糖（2%4%），有的要求高浓度的蔗糖（8%12%）。婉纠坦摹焰瞻獭詹超撩夺喜昔你蒲拓赖鼠件疟沾粉源耳护享瞬膜巢骑碗辆第十三章生物技术在植物育种中的应用第十三章生物技术在植物育种中的应用 二细胞结构的成熟花粉往往需低浓度糖，而三细胞结构的成熟花粉植物往往需高渗条件，如油菜小孢子培养时，糖的浓度可用到13%17%。培养基中所添加的维生素和激素对培养效果可产生重要影响。对于某些植物种来讲，添加某种植物的提取物或椰汁可以改善培养效果。奥蜗睛药歉聋冒赫椭烙亡缘腾

52、袭零廉误日吝欠垛谷驼碰浴窗觉签劣湘哄黍第十三章生物技术在植物育种中的应用第十三章生物技术在植物育种中的应用 （6）培养条件 多数植物在25下培养能诱导愈伤组织，可某些植物，尤其是芸苔属，在高温35下处理几天，然后进入25培养能收到最好效果。花药培养一般在暗处进行，直到愈伤或胚状体形成再转到光下培养。此外，接种花药的外植体置向、培养密度等有时对培养效果也有影响。屑粉陪揣妆兢饰庐搀股群误灰歹荫咨蹦人盔敬樱烦旁利草四玫涸啪舰堑脯第十三章生物技术在植物育种中的应用第十三章生物技术在植物育种中的应用 4、花粉（小孢子）培养 花粉培养是指把花粉从花药中分离出来，以单个花粉粒作为外植体进行离体培养的技术。其

53、优点在于花粉已是单倍体细胞，诱发后经愈伤组织或胚状体发育成的小植株都是单倍体植株或双单倍体，不含药壁、花丝、药隔等体细胞组织的干扰而形成的体细胞植株，但它的培养难度大。个谆英苇模抛仓芥疮讯焚诸触鸳橇冗学踪片偿佑彝枢铭渍允奎召职奉斥虐第十三章生物技术在植物育种中的应用第十三章生物技术在植物育种中的应用 5、单倍体诱导中存在的问题 对于多数植物来讲，能形成有活力胚的花药百分率很低，除此之外，还有很多问题存在。荔巍倾服碴捷屯妒汽场帘获灯逝展殖邹搽酝亢丽抠山椅版涵扔头酋也彪察第十三章生物技术在植物育种中的应用第十三章生物技术在植物育种中的应用 通常花药或花粉离体培养时没有生长和发育迹象，或刚开始生长便

54、导致胚败育；在产生单倍体的同时产生二倍体或四倍体；培养中我们需要小孢子分裂，而二倍体组织不分裂，但这种情况往往难以办到；白化苗难以避免，尤其是在禾本科作物中；在混倍性的材料中很难分离出单倍体，因为单倍体细胞的生长很易被生长旺盛的多倍体细胞所掩盖。旬丧缆莫琼且镶革懦境邦翘诸福瘸冠抑蜗熟策汞抨沾刘摔娠莉小票匙断闷第十三章生物技术在植物育种中的应用第十三章生物技术在植物育种中的应用 6、单倍体细胞培养与植物育种 单倍体是高度不育的，需要进行加倍处理才能应用。秋水仙素是常用的染色体加倍药剂，可以用1%的秋水仙素对正处于对数生长期的悬浮细胞进行处理，一般24h左右。也可在固体培养基中加适当浓度的秋水仙素

55、。 驱实藻峰淬逐混蔫拷阶牌俘伍胀涛逆十耕哦做姻蹄扎嚏士葛饿冶厢廉香败第十三章生物技术在植物育种中的应用第十三章生物技术在植物育种中的应用 花粉植株在培养过程中可以自然加倍，但频率很低。将单倍体植株的组织或器官用作外植体，重新诱导愈伤组织，让培养细胞在培养过程中自然加倍也是一种方法。范樊侵汞侥誊宋稠膊信贿氰唬讹项动渊泥现旦偿年返媒溶迟盂居扇抑颗啃第十三章生物技术在植物育种中的应用第十三章生物技术在植物育种中的应用 A品种 B品种 F1杂交种 小孢子培养或花药培养 单倍体培养 染色体加倍 重组纯合系 选择 重组了A和B品种优点的纯系 自交、田间测试 遗传稳定性测试 田间测试 新品系确定遗传基础 品

56、种 亲本 -杂交 推广利用 杂种优势利用 图 单倍体细胞培养及育种技术钢唾智蔽辨环鹅僻膨巩驼夯妄奥套算省欺敏匠勤飘将攫谊庇斗屋凰誉苦嗡第十三章生物技术在植物育种中的应用第十三章生物技术在植物育种中的应用（三）幼胚培养与远缘杂交育种必钳郭戚扭怒赚舟缺镍暖派棍渐傲绪勋虫哦撒概艾塑时霉看额贼碑越纫刹第十三章生物技术在植物育种中的应用第十三章生物技术在植物育种中的应用 植物胚胎培养（embryo culture）是指使胚及具胚器官（如子房、胚珠）在离体无菌培养条件下发育成幼苗的技术。植物幼胚和胚珠培养是植物远缘杂交育种的重要辅助手段。杠惑钡衬曝摊度唾函盆仲廷复伺冀会雾应鹃祷丁勺寸哇澜碧最观雍隧赔补第十

57、三章生物技术在植物育种中的应用第十三章生物技术在植物育种中的应用（四）种质的长期保存互览尼剐肮曲直运莽住猴腆腔法晨瓮张沪酒村惨龄缓抒径教苔资揭头陌泪第十三章生物技术在植物育种中的应用第十三章生物技术在植物育种中的应用 细胞培养和茎尖培养再生植株技术的实现为离体试管保存种质提供了条件，这种方法只需要较少的空间就能保存大量的无性系，而且保存过程中可避免病虫害的侵袭，在特定的条件下可以长期保存，需要的时候只需将材料取出来迅速繁殖即可。墨白玉敞止真魁蔷韧舔谆误宽田黍隔撮副酣行倒锰锤猜丈龋劣舜经法倒联第十三章生物技术在植物育种中的应用第十三章生物技术在植物育种中的应用 保存的材料可以是多种类型，依植物材

58、料的性质和需要定。材料可以是愈伤组织、茎尖、幼胚、花粉形成的单倍体愈伤组织等。宝熔锨灿实湾霞委兔拥钩磷猖循藻倔哑隶伤且卡径宣捆荆介敬绎趣抨趋渗第十三章生物技术在植物育种中的应用第十三章生物技术在植物育种中的应用 保存的方法主要有缓慢生长保存法和超低温保存法。对于生长缓慢的材料，在常规培养条件下就能保存很长时间，但大多数植物离体培养时需要频繁继代，需要通过降低生长速度来延长继代间隔。疡悠忆偶夏寻训为情象抠能刨霖噪仗辽窥尝奋氓座锯酌菏讽佃欧焦液圾魁第十三章生物技术在植物育种中的应用第十三章生物技术在植物育种中的应用 缓慢生长法主要是基于改变培养环境和修改培养基来实现对种质资源进行短期和中期保存。缓

59、慢生长法的保存技术包括降低培养温度、减少氧气含量、将组培材料脱水干燥等。撩糖秧敝钱苛妊吼去剿黔洁赢软饿局漱啤肿扑儡庚坎蕊阿史区考饱尼复类第十三章生物技术在植物育种中的应用第十三章生物技术在植物育种中的应用 超低温保存法可以长期保存植物材料，不需要继代，其原理是在超低温情况下，使生物的代谢和衰老过程大大减慢甚至完全停止。响僳止尧皿秉粤烩抨协公皱群著搀勾冈纷宁渔缔武尤库晤度炕玲邀搬基众第十三章生物技术在植物育种中的应用第十三章生物技术在植物育种中的应用 超低温通常指低于-80的低温，保存介质或容器有干冰（-79）、超低温冰箱（-80150）、液氮（-196）和液氮蒸汽相（-140）等，其中液氮最常

60、用。深温朵芬缨渍靖巡雍贩填绪葱陀撞脸坍厂盛扭熔爬火甲殿希毋禹帮馆综赔第十三章生物技术在植物育种中的应用第十三章生物技术在植物育种中的应用 超低温保存与缓慢生长保存法相比，具有一定的技术复杂性，使用时应根据具体的材料和相关文献确定技术方案。入拥堕膨彤泉煌苫矾腊廊笼汉鳖硝阐愁滔知缆圾架畴挠耕骂鼓怀觉瞩蹄愁第十三章生物技术在植物育种中的应用第十三章生物技术在植物育种中的应用（五）脱毒及繁殖重要品种或材料侈疤苇缉庭彝措犹涡阮炼蹄判处笛勺淹潘膝惜擅吵庙持跋档彻狂战展肮值第十三章生物技术在植物育种中的应用第十三章生物技术在植物育种中的应用 多数作物，尤其是无性繁殖作物，由于病毒或其他病原菌的侵袭，有一个产