疱疹病毒课件

1、四、微生物检验 HSV感染已有疗效显著的抗病毒治疗方法。临床上迫切需要快速准确的诊断方法。 (一)标本采集 一般采集病损皮肤粘膜的拭子。新鲜水 疱液含有高浓度的病毒，可用棉签吸取残 存的水疱液后，用力擦拭病损部位的基底 部，以采集感染的上皮细胞。HSV能在病毒 运送液中存活23天。不得在-20冻存。 （二）标本直接检查 1.直接显微镜检 查用荧光素标记 或酶标记单克隆抗体检测HSV抗原。 2.核酸检测 也可采用DNA杂交或者 PCR法直接检测标本中的HSVDNA， 敏感性、特异性高。（三）病毒分离和鉴定是最为敏感的方法，并且可对HSV分离株进行分型，能在许多培养细胞产生CPE。常用原代人胚细胞

2、和人二倍体细胞分离HSV。CPE的特点是，感染细胞肿大、变圆，折光性强，有细胞融合，形成多核巨细胞， CPE出现快而明显。可在接种后1824h出现CPE，病毒含量如在细胞培养液中加地塞米松，可加快CPE的出现，增加CPE病灶的数量。 通常采用特异性的MoAb进行组化染色，可进行鉴定和分型。也可用型特异性DNA探针进行的鉴定和分型。(四)抗体检测双份血清HSV抗体阳转，可诊断为原发感染，但无法区分HSV型别。抗HSVIgM抗体的检测无法用于区分原发感染和复发感染。复发感染时抗HSVIgM抗体也升高，单份血清检出HSVIgG抗体表明个体曾感染过HSV。常用的检测方法是ELISA。微生物检验临床标本

3、主要有疱疹病损部位的涂片、皮肤刮取物、水疱液、活检组织和血清。主要通过病毒分离、免疫荧光和原位杂交或者PCR等检测技术，在患者的组织或者体液中证实VZV或者其成分的存在。 微生物检验 病原学诊断方法包括直接检查、 病毒分离和鉴定以及血清学诊断。 （一）直接检查 包括检测病毒颗粒、病毒包涵体 或者抗原或者核酸。 1检测病毒颗粒 可采用假复制方法 对HCMV先天性感染患儿的尿液和 口腔标本进行电镜检查，敏感性 为噬斑形成单位/ml，优点是快速 缺点是不敏感。2检测病毒包涵体 活检组织标 本切片或者脱落细胞涂片，以 HE等常规染色，观察巨细胞以 及细胞核内嗜碱性包涵体。可 用于快速诊断，但敏感性较低

4、。3检测病毒抗原 活检组织标本 切片、脱落细胞或者周围血白 细胞涂片、接种标本并培养数 日的盖玻片细胞培养物。进行 免疫荧光染色，检测特异性抗 原。该法敏感特异快速，可用 于快速诊断。4检测病毒核酸 用PCR法检测 核酸。敏感性高，能检出活 动性感染和潜伏感染。(二)病毒分离和鉴定是诊断最可靠的金标准。将标本接种人胚成纤维细胞，观察46周，期间盲传2次。产生特征性的CPE，细胞肿胀变圆，形成巨大细胞，可作出初步诊断。经过MoAb免疫染色作出最终鉴定。改良快速诊断法是培养24h后用荧光素标记的MoAb直接检测表达的早期抗原，在接种后24h即可检出。 (三)抗体检测 常用ELISA检测特异性IgG

5、和IgM抗体。(四)结果分析1先天性感染的诊断 在出生最初 3周内从新生儿尿液、呼吸道分泌 物或者其他体液分离出HCMV是最 敏感和特异的确诊依据。2血清学试验结果的分析 6个月 以上的患儿，母体抗体已经消失， 如果出现双份血清抗体阳转，可 作出原发感染的诊断，可诊断为 近期感染。 3免疫功能缺损个体HCMV感染检 测结果的分析 检出HCMV提示 存在活动性感染，但不能确定 HCMV感染与疾病的相关性。（五）评价HCMV检测结果分析必须结合患者的临床评价，才能对HCMV感染和疾病提供准确的诊断，及时进行对应的抗病毒治疗。抗原分类潜伏期抗原，为潜伏感染细胞所 合成，包括EBV核抗原(EBNA)和

6、潜 伏期膜蛋白(LMP)。这类抗原的表 达表明存在EBV基因组。早期抗原(EA)，属于病毒非结构蛋 白，其合成不依赖于病毒DNA的复制。 EA的表达显示开始病毒复制，是增 殖标志。晚期抗原(LA)，包括衣壳抗原(VCA) 和包膜抗原(MA)。微生物检验 病原学诊断方法包括直接检测病 毒抗原或者核酸、病毒分离和鉴 定以及抗体检测。 (一)直接检查 在病变组织中检测EBV抗原或者 核酸是EBV感染诊断的重要方法。 大部分病变组织中存在EBV的核蛋 白和膜蛋白等病毒产物以及EBV基 因组核酸。用核酸杂交和PCR或者 RT-PCR可检出基因组核酸及其转录 产物。（二）病毒分离和鉴定分离EBV的标本可以

7、是唾液、咽漱液及血细胞等，咽漱液中分离率最高，可达80以上。将咽漱液接种人脐带血淋巴细胞，培养4周，如果出现大量的转化淋巴细胞，则提示病毒培养阳性，鉴定通过免疫荧光技术检测EBV核抗原。 (三)抗体检测是最常用的诊断方法。由于不同病人体内针对EBV不同的抗原成分所产生的抗体的组成及水平均有一定的特征性，为疾病诊断提供了参考指标。 （四）结果分析与评价根据抗体模式和滴度，可归为3大类：易感：抗VCA抗体阴性；原发感染：抗VCA抗体阳性，EBNA 抗体阴性；既往感染且具有免疫力：抗VCA抗 体和抗EBNA抗体均阳性。80的 EBV活动性感染的患者产生抗EA D抗体。 第五节人疱疹病毒6、7、8型

8、一、人疱疹病毒6型 感染在人群中十分普遍。少数发生 幼儿急疹或婴儿玫瑰疹。在器官移 植等患者，可发生重症感染，如脑 炎和肺炎等。 为疱疹病毒科中的一个独特成员。 基因组DNA为160170kb，G+C mol 为4344。在CD4+T细胞中增殖 良好。 微生物学检验包括病毒分离和鉴定、病毒核酸检测和抗体检测。采集患者外周血单个核细胞，与经过PHA刺激的脐带血淋巴细胞共同培养。出现肿大的气球样细胞提示存在病毒，可用免疫荧光法鉴定。是HHV-6活动性感染的强有力的诊断依据。采用核酸杂交技术检出HHV-6核酸。用血清学方法检出患者血清中的特异性IgM和IgG抗体。从患者外周血中检出病毒或者病毒DNA是HHV-6活动性感染的强有力的诊断依据。二、人疱疹病毒7型从慢性疲劳综合征患者的外周血单个核细胞、幼儿急疹患者、肾移植患者以及各种免疫抑制治疗病人中分离出HHV-7。在健康人的唾液中大量存在HHV-7。目前认为HHV-7是一种普遍存在的人类疱疹病毒，但除了幼儿急疹外，还没有发现其他任何疾病和HHV-7存在着必然的联系。 三、人疱疹病毒8型是从伴