细菌感染诊断和防止

1、细菌感染诊断和防止一 细菌的形态观察大小、形态、排列、染色、及其有无特殊结构程序：涂片 染色 镜检最早的显微镜是16世纪末期在荷兰制造出来的。科学上使用显微镜。意大利科学家伽利略通过显微镜观察到一种昆虫后，第一次对它的复眼进行了描述。列文虎克第一次用显微镜观察许多肉眼所看不见的微生物.首先认识显微镜1.光学显微镜2.电子显微镜(一) 显微镜分类1.光学显微镜工作原理 目镜和物镜都是凸透镜，焦距不同。物镜相当于投影仪的镜头，物体通过物镜成倒立、放大的实像。目镜相当于普通的放大镜，该实像又通过目镜成正立、放大的虚像。 光学显微镜可把物体放大1500倍，分辨的最小极限达微米。组成 普通光学显微镜主要

2、主要分为三部分：机械部分、照明部分和光学部分组成。四个都是光学显微镜?普通光学显微镜：观察细菌的大小、形态和细菌特殊结构.暗视野显微镜：一种具有暗视野聚光镜，从而使照明的光束不从中央部分射入，而从四周射向标本的显微镜.常用来不染色细菌的运动荧光显微镜：以紫外线为光源，使被照射的物体发出荧光的显微镜，免疫荧光和荧光蛋白的表达观察 相差显微镜：成像有立体感，常用来不染色细菌的运动及其细微结构2.电子显微镜 1931年，恩斯特鲁斯卡通过研制电子显微镜 电子显微镜由镜筒、真空系统和电源柜三部分组成 电子显微镜是根据电子光学原理，用电子束和电子透镜代替光束和光学透镜，使物质的细微结构在非常高的放大倍数下

3、成像的仪器。现在电子显微镜最大放大倍率超过300万倍 透射电镜：观察内部精细结构 扫描电镜：观察表面形态结构 3.扫描隧道显微镜(STM) 1981年由格尔德宾宁（GBinning）及海因里希罗雷尔（HRohrer）在IBM位于瑞士苏黎世的苏黎世实验室发明，两位发明者因此与恩斯特鲁斯卡分享了1986年诺贝尔物理学奖。是一种利用量子理论中的隧道效应探测物质表面结构的仪器 观察单个原子在物质表面的排列状态和与表面电子行为有关的物化性质。如DNA,RNA,蛋白质的生物大分子和生物膜和病毒的结构.被国际科学界公认为20世纪80年代世界十大科技成就之一。 (二) 标本的检查1.不染色标本的检查2.染色标

4、本的检查1.不染色标本的检查不染色标本一般用于观察细菌动力及运动情况(因为不染色标本直接在普通光学显微镜下，无色透明,不能清楚看到细菌的形态与结构特征,主要靠细菌的折射率与周围环境不同进行观察)。有鞭毛的细菌在镜下呈活泼有方向的运动，无鞭毛的细菌则呈不规则布朗运动。 (不停地做无规则运动的现象)2.染色标本的检查无色透明,直接不易观察其形态结构;染料带电荷;细菌的等电点在pH2-5之间,通常带负电;常用的染色单染法复染法特殊染色法(1) 单染法简单染色通常只用一种染色剂，使细菌整个细胞染上颜色。常用染料:美蓝、结晶紫或石碳酸复红等碱性染料 因为看不清结构。所以只便于检查细菌的形态、大小和排列方

5、式等。不能观察其特殊构造和属性鉴定.(2)复染色法用两种或两种以上的染料染色的方法，称为复染色法或鉴别染色法 革兰氏染色法抗酸染色细菌的革兰氏染色法革兰氏染色是细菌鉴定上一个最重要和广泛应用的方法。染色步骤: 初染-媒染-脱色-复染理论和实际意义 分为G+和G-细菌 了解细菌的致病性 指导临床用药抗酸染色抗酸染色原理:分枝杆菌细胞壁含脂质较多,其中主要成分为分枝菌酸,此物具有抗酸性,染色时与石炭酸复红结合牢固,能抵抗酸性乙醇的脱色作用,因此抗酸菌能保持复红的颜色,达到染色目的。步骤:苯酚复红染色,加温促使菌体着色;3%盐酸乙醇脱色;吕氏美蓝复染,未脱色细菌呈红色为抗酸性细菌,脱色经复染呈蓝色的

6、细菌为非抗酸性细菌。 只要用于结核杆菌和麻风杆菌(3)特殊染色芽孢鞭毛荚膜等特殊结构的观察大多需特殊染色荧光染色法 二 致病菌的检查-细菌学检查1.直接涂片镜检：形态和染色性上有特征的致病菌，直接涂片镜检后有助于初步诊断。如：痰中查抗酸性杆菌，脓液中找G+葡萄串状球菌等等。2.分离培养：所有标本均应作分离培养获得纯培养后进一步鉴定.培养时间不同,一般18-24h,结核4-8w.3.生化试验：各种细菌所具有的酶不完全相同，对营养物质的分解能力亦不一致，因而其代谢产物有别，藉此可对不同致病菌进行鉴别（如肠道杆菌）4.血清学试验：含特异抗体的免疫血清未知纯种细菌进行血清学实验，可确定致病菌的种和型。常见有凝集试验、沉淀反应等。5.动物试验：主要用于分离、鉴定致病菌，测定菌株产毒性等。 常用动物：小鼠、豚鼠、家兔 接种途径：皮内、皮下、腹腔、肌肉、静脉等6.药物敏感试验：测定标本中致病菌对药物的敏感程度。对指导临床用药及控制感染有重要意义。常用纸碟法和试管稀释法。7.分子生物学技术: (1)核酸杂交技术： 分为固相和液相。有原位杂交、检测DNA的Southern印迹，检测RNA的 Northern印迹 (2)PCR技术：快速、灵敏、特异性强。 8.其他： 气液相色谱法、 质粒指纹图谱分析等二 致病菌的检查-血清学诊断用已知的细菌或其特异性抗原检测患者体液中有无相应特异性