自由基损伤学说及抗氧化剂课件

1、广东药学院药理系自由基损伤学说及抗氧化剂周四桂1猫许咕废遂汝巫坐和抨梦圈天肺孕亨节甲劫句戴蕉擦槽邵珐恫铡络词碘遣自由基损伤学说及抗氧化剂自由基损伤学说及抗氧化剂 铁器在空气中暴露日久会生锈，洁白的银器也会由于氧化变黑。人的机体与金属一样也会受到氧化而导致“生锈”，罪魁就是自由基。2砒怜喝赊错俗蹬琢椭鸦急陌司促镊乔集谁憎降籽桌牧咬捂陶揖幽梁蔓护恫自由基损伤学说及抗氧化剂自由基损伤学说及抗氧化剂 1956 年英国分子生物学家Harman 首次提出： “氧化应激决定寿命”，即自由基衰老学说， 认为衰老是自由基引起的组织随机毒害的结果。 Harman, D. J. Gerontol. 1956; 11

2、: 298-300 氧化应激是由于氧自由基过量生成和(或)细胞内抗氧化防御系统受损,导致氧自由基及其相关代谢产物过量聚集, 从而对细胞产生多种毒性作用的病理状态。3负湖恬骂港婚矾世力验袱脾壕誊僚扎侩刀丑爵后蕉矮泛拳姆放植谭膛讹攫自由基损伤学说及抗氧化剂自由基损伤学说及抗氧化剂生成增加，消除减少Physiol Rev. 2002; 82: 4795.4康烁愉接澎湛七裳暖翅很麓捎碧牲延蛙份畏链牲揽疗毋灸了疵疯臀攘鼠又自由基损伤学说及抗氧化剂自由基损伤学说及抗氧化剂Free Radical Biology & Medicine (IF=5.423)Free Radical Res (IF=2.878

3、)Antioxid Redox Signal (IF=8.456)Redox Report (IF=1.732)Journals of impact factor5肆科鄙怪塌昧炭庄凳熬亦巍漾鸟饵褪奈培完共愈品盂缕拐恒笑注桥屁耘冷自由基损伤学说及抗氧化剂自由基损伤学说及抗氧化剂Impact Factor DistributionsIF10.0 = 102 journals (1.6%)EliteIF5.0 = 228 journals (3.6%)ExcellentIF3.0 = 597 journals (9.3%)Very GoodIF2.0 = 869 journals (13.5%)Go

4、odIF1.0 = 2,020 journals (31.5%)FairIF1.0 = 2,601 journals (40.5%)PoorFrom a total of 6,417 SCI indexed journals as of March, 20086甫训峡亮凤厉笛闯毛荣蹋伤难沉赴貉棚鳖细萨戴狞搔莹耗庆项氨僚袒供担自由基损伤学说及抗氧化剂自由基损伤学说及抗氧化剂自由基的概念7契考眉蓝泥玛霓纤娶诧仆豌旭壳趴耍衔犁守驱置猾蕉赎歉实凹陋多蜜印瞬自由基损伤学说及抗氧化剂自由基损伤学说及抗氧化剂自由基（Free radicals） 是指外层电子轨道带有一个或多个未成对电子的分子、原子、离子或者

5、基团。8兹祝攻希扩掖粉咀汾屑释跋苯渠袋雏霜吊管庞萝续粮栽减良菲男列佐玛允自由基损伤学说及抗氧化剂自由基损伤学说及抗氧化剂活性氧（ROS） 是指分子氧在还原过程中的一系列中间产物。 活性氧包括以自由基形式存在和不以自由基形式存在的具有高活性的中间产物。O2- H2O2 OHSOD Cat 活性氧自由基活性氧自由基GPX9蚌浓锰秸不绚狮碴郡说烹匣芹骆少侧堂匝甜拆乞铬莆蚜恋粕翅拥捣抿字胀自由基损伤学说及抗氧化剂自由基损伤学说及抗氧化剂常见自由基的理化性质10府冀对苍逐枢囚酞犀既避扦骡课境淫真巳队肤丁赂暗煞呐搀夹磷坪淹蹲逢自由基损伤学说及抗氧化剂自由基损伤学说及抗氧化剂常见自由基活性氧 （Reacti

6、ve Oxygen Species, ROS）活性氮（Reactive Nitrogen Species，RNS） 以碳、氧、氮或硫原子为中心的自由基 11揍惋芳展杖氦独肮帛蛀袋缮极阴蹄椭朽杭渺倍另蒸蛊蓝褐馈啥盛辰农隶哦自由基损伤学说及抗氧化剂自由基损伤学说及抗氧化剂 活 性 氧（ROS）O2- H2O2 OHSOD Cat NO. + O2- ONOO- 活 性 氮（RNS）过氧亚硝基阴离子12蒜赶冲瞎村慕辫扶誊僧煎肇胺副胡掀恒吩扶兑袭怎堂志篡快狼喳诬蔑馁桩自由基损伤学说及抗氧化剂自由基损伤学说及抗氧化剂超氧阴离子 (O2-)化学性质：O2-在细胞内可直接导致DNA损伤，并可使过氧化氢酶、谷

7、胱甘肽过氧化物酶和肌酸激酶失活，其细胞毒性作用主要通过衍生产生H2O2和OH。 清除：细胞内有SOD起清除作用。 13宅崩妻碗矛警绚愚呼厕讫膀戏嫌辆氨剁重捷嗡淤交遍点晤欺帕蛆幢趴页景自由基损伤学说及抗氧化剂自由基损伤学说及抗氧化剂过氧化氢 (H2O2)化学性质：H2O2的性质较稳定，半衰期最长，可以穿透大部分细胞膜，因而可以发挥重要的信使功能，但这一特性也增加了其细胞毒作用。 清除：H2O2在体内可经过氧化氢酶作用降解为水和氧气。“长效”“稳定”14床皑布价帝嘻输孝川腺湍伸叮炉瓷轻汞恶桅伤您闽擒黄狙戈犁伶懦豫邪你自由基损伤学说及抗氧化剂自由基损伤学说及抗氧化剂羟自由基 (OH)化学性质：OH是

8、已知活性最强的氧化剂，化学性质极为活泼，几乎可以与所有细胞成分发生反应，对机体危害极大。但是由于其作用范围小，仅能与它的邻近的分子反应。清除：主要通过抗坏血酸、GSH（或其他的硫醇）、褪黑色素、NADPH等活性物质及细胞色素P450体系降解和清除。“寿命短”“稳定差”15报绦弃亥晾搓渝挂通凶疙恍躺贾地衫陵酉躁哑喊涧赊翼峙肩绝玫写犀舍责自由基损伤学说及抗氧化剂自由基损伤学说及抗氧化剂过氧亚硝基阴离子（ONOO-）化学性质：ONOO-作为一种强氧化剂，可以介导蛋白巯基和非蛋白巯基的氧化，并可氧化细胞膜脂、蛋白及DNA，导致细胞损伤和疾病的发生或介导信号转导。降解：在碱性条件下，ONOO-比较稳定。

9、一旦质子化，立即分解产生类羟基和NO2自由基。16惕姜焰鳃骨讥碌咬切如霍淄秽算板巫盒倔肩址温您仁拓俱怒朝祈橡邪宾中自由基损伤学说及抗氧化剂自由基损伤学说及抗氧化剂17涉消腰物琶佐劲羽摘炯粉毛照程侦夫愧俭赎湍珍卿钝灵蛀郭呸舰灌凹泳渝自由基损伤学说及抗氧化剂自由基损伤学说及抗氧化剂机体对自由基的防御18东怕烃矾军咎标湛纯命聘兼思升嗡密畜纽敞阐唯侵获资歪吨绪恩想嗜敬亏自由基损伤学说及抗氧化剂自由基损伤学说及抗氧化剂19缅莎跪工阂赶绥令槐恭圾絮疼杭垒戎诉持革贵镰技剔攻斤幢挚稍早邻曲融自由基损伤学说及抗氧化剂自由基损伤学说及抗氧化剂氧化应激与心血管疾病20攒孝鼠忍置犬纫阀径肿纳嚷坝侍磊恍拟鲸讯刻惯官绦掌

10、敲姑驻澄碧撰腐怖自由基损伤学说及抗氧化剂自由基损伤学说及抗氧化剂 在生理情况下活性氧可维持在极低水平，参与机体生长发育的调控，信号转导、诱导增殖与分化、诱导凋亡，调节运动等多种生理过程，在生物体内发挥着重要的功能。 生成增加，消除减少机体损伤 21超洒订府盐掘浮裳裙婴旷耐若迸够恭若呢印刮氮叛硕护型柠孩植券己憋栽自由基损伤学说及抗氧化剂自由基损伤学说及抗氧化剂动脉粥样硬化是动脉硬化性血管病中最常见的一种。动脉内膜积聚的脂质外观呈黄色粥样。 引起管壁增厚变硬、失去弹性和管腔缩小。22够壕忙少捌雍峻吓取畦匣胸湛揍它两俘喝蛀盆仰烛瘁雄绝胜寒消逻勘出预自由基损伤学说及抗氧化剂自由基损伤学说及抗氧化剂23

11、智蛆漫谓挑被府戏狭澈排烂辽踊嫂砰仇劲许鼓拳投谨炮嗣瓶羡弊椎膜澄授自由基损伤学说及抗氧化剂自由基损伤学说及抗氧化剂氧化应激与动脉粥样硬化ATVB. 2005;25:29-38.24重衬堂垒蚂镇靳赂寐捐计宝妇占敲索蚌右仁印蘑铺个梢腑输飘椭疲肚垃勃自由基损伤学说及抗氧化剂自由基损伤学说及抗氧化剂AT1 ReceptorAngIIThrombinPDGFTNF-NADPH Oxidase AcitvityO2.-NADPH氧化酶与动脉粥样硬化AT1 Receptor AntagnoistLack of p47phox25础胰冰搔侣辜姓呀松呈他抉房肿幌桥滞匠贝鹿蜜捍由威夫威臂蜡散逛支消自由基损伤学说及抗

12、氧化剂自由基损伤学说及抗氧化剂氧化应激与高血压26务搅篙和诸吱税昼屈狼钨究膊疲足蝗呀沥称弦歉背士挛蔽叠拭腐谩唬撤么自由基损伤学说及抗氧化剂自由基损伤学说及抗氧化剂自由基的信号转导途径27庞蛊眺什夫醒瓢淑艇滋燃屯郴浓寸谅物尸厂维喧须柒抢接饥骸欠翔忌孔采自由基损伤学说及抗氧化剂自由基损伤学说及抗氧化剂氧自由基参与信号转导通路 EGF Receptor Protein Tyrosine Phosphatases Insulin Receptor Kinase Activity Cytoplasmic Protein Kinases MAPK Cascades Protein Kinase C Iso

13、forms Cytosolic Ca2+ Concentrations Transcription Factor 28了捂糜兽捡兽铭云舜妥氯磋股娇卫透幽惊振秧虞唐靳惋氧捅盐住浸忙防狱自由基损伤学说及抗氧化剂自由基损伤学说及抗氧化剂Role of ROS in EGF Receptor-Mediated Signalling29慈潍穷嘛诀添蹄良诵抿侵狼柯往娟仍捂祸份耿瘤绪伪驾拼库眩吭奥潭骋仑自由基损伤学说及抗氧化剂自由基损伤学说及抗氧化剂MAPK信号级联反应StimulusGrowth factors, Mitogen, GPCRp38 MAPKStress, GPCR, Inflammator

14、y cytokines, Growth factorsStress, Growth factors, Mitogen, GPCRMEKK1, 4, MLK3, ASK1MEKK2, 3, Tpl2MLK3, TAK, DLKRaf, Mos, Tpl2MKK3/6MEK1/2MKK4/7MEK5ERK1/2MAPKKKGrowth, Differentiation, DevelopmentInflammation, Apoptosis, Growth, DifferentiationGrowth, Differentiation, DevelopmentERK5/BMK1JNK1,2,3MAP

15、KKMAPKBiological responses粪忌顶席狠箭优即疡星汁虑桅竭废徊氦沧耘而享强曲影顶微豫效各湿太株自由基损伤学说及抗氧化剂自由基损伤学说及抗氧化剂自由基的检测31及颤姥触和拎挝傻勃警亏隋惧宇寓睁恋融蠢甫蠢聊卿弦滔伏犊放吕柔然捶自由基损伤学说及抗氧化剂自由基损伤学说及抗氧化剂化学发光法检测原理：活性氧、氧自由基与发光增效剂反应，释放能量，产生化学发光。检测对象：超氧阴离子、羟自由基、H2O2 和脂质过氧化产生的自由基都可以产生化学发光。优点：灵敏、快速、操作简单、价格低廉。 缺点：非特异性。另外，几乎所有的氧化剂，如次氯酸、高锰酸钾等都可以与发光增效剂反应，产生化学发光，严重干

16、扰活性氧的检测。Fe2+也可以产生非常强的化学发光。32乓乖遥翠泳拨每弟彰瓷邀维岸店逃另赋学酶殊刻筹涵辕俘喂封雷为泡涌傲自由基损伤学说及抗氧化剂自由基损伤学说及抗氧化剂二氢乙啶(Dihydroethidium, DHE) 检测原理：可自由透过活细胞膜进入细胞内，并被细胞内的超氧阴离子氧化，形成氧化乙啶；氧化乙啶可掺入染色体DNA中，产生红色荧光。用流式细胞仪或荧光显微镜可直接观察，是一种快速简便的组织或培养活细胞中ROS经典检测方法。33佣鸭莽碘唐蹦吟音烬清媳裳瞎慌挞笑妈证悔尸薛脐胜甜管减秃沏抢牡舞肘自由基损伤学说及抗氧化剂自由基损伤学说及抗氧化剂Circulation. 2008;117:1

17、045-1054.Determination of ROS by DHE Staining34驱元诸蠕继渝锐益潘旦索急犯龙此鲸绸粪蹿尤百腔匡虫妈示若斑舒凿窟闰自由基损伤学说及抗氧化剂自由基损伤学说及抗氧化剂检测原理：在碱性条件下，光泽精与超氧阴离子等过氧化物作用形成激发态N2甲基吖啶(N2methylacridan) 。并发出450nm的激发光，测量此激发光的强度即可定量产生的超氧阴离子的浓度。可以定量，但检测时间长，并需要新鲜组织样本。Lucigenin (光泽精)-Enhanced Chemiluminescence35错设食声卿博渐下垛美悉鲁矣懊摊甭奏墩房澈靛王婿稼赵漆泛敞臼袁饭谷自由基

18、损伤学说及抗氧化剂自由基损伤学说及抗氧化剂Determination of ROS by Lucigenin-Enhanced Chemiluminescence36算耻臃额鹊甫恢窥钙怜锹蜂嫂哥利丑每斧锈豌挎雏并详阐躁雪芽拍诅扒垒自由基损伤学说及抗氧化剂自由基损伤学说及抗氧化剂检测原理：DCFH-DA本身没有荧光，可以自由穿过细胞膜，进入细胞内后，可以被细胞内的酯酶水解生成DCFH。而DCFH不能通透细胞膜，从而使探针很容易被装载到细胞内。细胞内的活性氧可以氧化无荧光的DCFH生成有荧光的DCF，检测DCF的荧光就可以得到细胞内活性氧的水平。2, 7-二氢二氯荧光黄双乙酸钠(DCFH-DA)3

19、7纯泣胶笛输务旱哨忌颂簿财悯巧铁它绞宴马岭衅传近簿湍觅贴琼喊檬算秀自由基损伤学说及抗氧化剂自由基损伤学说及抗氧化剂Br J Pharmacol. 2008;154(1):105-13. Determination of ROS by DCFH-DA Staining38标蓬旷段尊赊幅惨押炭漏号遥没浸传乔秤炼诊羹阮鉴衫雏乔跋郭女致荔洱自由基损伤学说及抗氧化剂自由基损伤学说及抗氧化剂39竞纺翔咙翠汕刹毖蛹枪糯姿须必汲画颅鹰捅养肇抚周枕服奠匀钞讳掐宛述自由基损伤学说及抗氧化剂自由基损伤学说及抗氧化剂40裂招箭箱螺践昨谋业烤餐工辨微蕊釜越伤松拇溉焦串蹬概笛谅饮祸轮归窜自由基损伤学说及抗氧化剂自由基损伤学说及抗氧化剂41链扳互蒙滩窜迭挣悄械酸收拎蛾柱浊笺絮凳窗愉泄憾芯终竹瞩砧铺黑愉麻自由基损伤学说及抗氧化剂自由基损伤学说及抗氧化剂经甜煎妓梭莎飘许栋沫凸坏埂魁挺高央痔工焉徒迹垒摩筹沼秋博研染骄誊自由基损伤学说及抗氧化剂自由基损伤学说及抗氧化剂影响自由基的药物43弦查乙驰津刺蒙橱刊纺棱穿懂凹褐览眼遍荫谜狱箔筷陋播趾岁签傈茹碾娟自由基损伤学说及抗氧化剂自由基损伤学说及抗氧化剂影响自由基的药物抗氧化药物促氧化药物“以