食药用菌液体菌球生产标准

1、食药用菌液体菌球消费标准编写 刘随记二零一四年六月二十六日 TOC o 1-5 h z 目录一、封面1二、目录2三、标准范围3四、本标准所引用的标准性文件和文献 3五、关键专业术语和定义3六、液体菌球消费技术要求6七、根本消费设施和设备7八、液体菌球消费工艺流程图 8九、液体菌球消费技术工艺要求 8食药用菌液体菌球消费标准一、 范围本标准规定了食药用菌菌球消费厂房、各种设施、设备、品种、工艺流程、技术要求、保藏运输。本标准适用于食药用菌液体菌球的消费。二、本标准所引用的标准性文件和文献GB/T4789.28-2003食品卫生微生物学检验一染色法、培养基和试剂GB5749-2006生活饮用水卫生

2、标准GB/T 5009.98-2003食品容器及包装材料用不饱和聚酯树脂及其玻璃钢制品卫生标准分析方法GB50073-2001干净厂房设计标准GB/T 29859-2021 生物信息专业术语GB150-1998 钢制压力容器NY/T 883-2004家用微生物菌剂消费技术规程DB21/T 1693-2021食用菌液体菌种消费技术规程三、关键专业术语和定义以下专业术语和定义适用于本标准。胡E 动式液体培养器mobile cultivation apparatus for edible fungus liquidspawn指在液体菌球养器上安装了可挪动的装置，培养器工作时能整体挪动，而挪动中又不影

3、响培养器的性能。液体菌球接种器材 edible fungus-liquid interface trap inoculator指能将菌种从培养器中按无菌操作要求转接到液体菌球液体上的设备。接种量 inoculation amount指接入培养器中的菌种的数量，以菌种体积与培养基体积的百分比标示。液体菌种菌龄 period of liquid spawn running指菌种接入培养基开场计算的液体菌球生长发育时间。培养器空7肖 empty fermenter cultivation apparatus指对用外源蒸汽灭菌，尚未加水投料的空培养器进展高压蒸汽灭菌。培养器实消 full fermen

4、ter cultivation apparatus指对投料后的培养器进展高压蒸汽灭菌。投料 feeding指将配置好的培养液投放到培养器中。定容 constant volume指培养器中参加培养液后，加水至所要求体积。摇瓶液体菌种 liquid spawn in shake pot指装在玻璃三角瓶内在摇床上恒温振荡培养的液体菌种。起始 pH initial pH value指液体培养基配置后尚未接种时的pH值。镜检 microscopic examination指通过显微镜观察食药菌液体菌球生长发育和有无杂菌污染的过程。外源蒸汽灭菌 exogenous steam sterilization指

5、用锅炉蒸汽给培养器灭菌的方法。固体专用菌种瓶 solid special strain combination指将检验合格的固体专用种按无菌操作要求，转移至装有无菌水的大三角瓶中，充分搅拌呈均匀的液态菌种的过程。死角 dead angle指培养器蒸汽灭菌时未能到达彻底灭菌的地方。恒温培养摇床 thermostatic culture cradle指具有不锈钢万用夹具、数显控温、无级调速和良好的热循环功能，是一种多用处的生化器，适用于菌种各种液态菌球振荡培养。盘旋式振荡器 cyclotron oscillator指具有外形大方，容量大，噪音低，重量轻，体积小等特点，速度可调，并带有定时装置。生物

6、接种箱 biological inoculation box指有各种形状和规格，只要操作方便，能到达无菌状态的机器设备。超净工作台clean bench指一种智能化控制操作区高干净度工作环境的空气净化设备。高压杀菌器 autoclave指用比常压高的压力，把水的沸点升至100c以上的高温，而进展液体或器具灭菌的一种高压容器。.21 试管 test tube指用作于少量试剂的反响容器，在常温或加热时使用。显微镜 microscope指主要用于放大微小物体成为人的肉眼所能看到的仪器。恒温培养箱 constant incubator指作细菌培养、育种、发酵及其他恒温试验用的机器设备。生物培养箱 bi

7、ology incubator指具有制冷和加热双向调温系统温度可控的功能的机器设备。菌种 culture指用于发酵过程作为活细胞催化剂的微生物。四、液体菌球消费技术要求4.技术人员食药用液体菌球消费应有与液体菌球消费所需的专业技术人员。消费操作人员应该保持良好的个人卫生，勤洗澡、勤换衣、勤理发、不保存长 指甲。进入消费车间必须穿戴经灭菌的工作服、口罩、鞋、帽。严禁在消费车间内吸烟，随地吐痰和乱扔杂物。食药用菌液体菌球消费车间设计到达 NY/T528-2002标准要求。食药用菌液体菌车间必须建在交通、水源和电源方便，无有害气体、烟雾，远 离垃圾场和畜禽场舍的地方。消费车间地面应具备防水、防腐蚀、

8、防渗漏、防滑、易清洗，有适当的排水坡 度1.0%1.5%和良好的排水设施。4.消费车间墙壁和顶部应能防潮、防霉、防水、易清洗。消费车间门窗应设置有防各种蚊虫的纱网。4.消费车间入口处应设置洗手、消毒和干手设施。4.消费车间要安装排风设备。4.消费车间必须设置缓冲间消费车间应设置与职工人数相适应的更衣室、浴室、厕所。消费车间应设置封闭式废弃物专用桶。五、根本消费设施和设备培养摇床、盘旋振荡器、生物接种箱、生物培养箱、电子天平、 、酸度仪、空 气压缩机、液体菌种接种器材、高压蒸汽灭菌锅、蒸汽锅炉、净化工作台、恒温 摇床、恒温培养箱、冰箱、显微镜、磅秤、天平、自备电源发电机 。培养器、 高压灭菌锅和

9、蒸汽锅炉应使用政府有关部门检验合格，符合国家压力容器标准的 产品。消费用具玻璃三角瓶、接种器材、试管、量杯量瓶、玻璃漏斗、菌浆瓶、药棉、定量定性滤纸、精度pH试纸等。根本操作车间设施配料间、杀菌间、冷却间、接种间、培养间、化验室、菌种保藏室的根底设施要配套，布局合理，要有最根本温控设施。培养原料符合WS/T232-2002商业性微生物培养基质量检验规程。化学试剂类符合NY/Y528-2002食药用菌菌种消费技术规程要求。生物制剂和天然材料类符合NY/Y528-2002食药用菌菌种消费技术规程要求。消费品种符合NY/Y528-2002食药用菌菌种消费技术规程要求和 GB/T12728-2006食

10、用菌术语相关规定。应使用经省和国家级以上农作物品种审定委员会登记的食药用菌品种。六、液体菌球消费工艺流程图1825 C,5d7d七、液体菌球消费技术工艺要求（一）、菌浆菌种的培养菌浆菌种专用瓶使用玻璃植被瓶和棉塞，植被瓶 250 ml,棉塞要使用梳棉，不应使用脱脂棉。菌浆菌种培养基般使用马铃薯葡萄糖琼脂通用培养基。分装菌种培养基的分装量为50 ml。7.1.4灭菌菌浆菌种培养基分装后应立即灭菌。Mpa, 30min。灭菌完毕后，应自然降压，不应强迫降压。灭菌时应防止棉塞被冷凝水打湿。灭菌效果的检查灭菌后的培养基置于28c恒温培养48 h后检查，并经显微镜镜检确定无微生 物长出为灭菌合格。接种在

11、无菌条件下用接种器材将菌种移植在菌浆菌种培养基上。超净工作台消毒处理方法先用75%酒精或新洁尔灭溶液进展菌种培养基外部外表擦拭消毒，然后开紫外 灯灭菌30min。无菌接种操作超净工作台上要严格按无菌操作要求接种。将引进或购置的食药用菌菌种接种 到培养基上，然后再把培养基和菌种用专用的工具搅拌成 0.3 cm颗粒状。接种完 毕后及时贴好标签。超净工作台接种后的处理每次使用后，要及时清理清洁，排出废气，去除废物，台面要用75%酒精或新洁尔灭溶液擦拭消毒，然后开紫外灯灭菌 30min。培养室消毒处理在使用培养室的前两天，要使用二氧化氯烟雾剂熏蒸消毒处理。培养室条件要求培养温度18C28C，培养时间2

12、540d,保持空气相对湿度在 65%75%, 注意避光。培养期间的检查培养期间应定期检查，及时挑出不合格菌种。入库完成培养的菌浆菌种及时登记入库。记录消费各环节应详细记录。留样留样的数量应以每个品种3支5支，于4c下贮存。二液体菌球菌种培养液体菌球培养基配方.1配方1:马铃薯、葡萄糖、麦秋、蛋白月东、磷酸二氢钾、硫酸镁、维生素 B1 聚氧丙稀甘油、pH值自然；.2配方2:马铃薯、葡萄糖、麦秋、苹果汁、维生素 B1、pH值自然；.3配方3:甘薯、葡萄糖、磷酸二氢钾、pH值自然；.3配方4:大米浸出液、葡萄糖、蛋白月东、牛肉膏、 pH值自然原材料符合NY/T528-2002标准要求。详细配方根据消

13、费品种的营养需求，用水符合GB5749-2006,生活饮用水卫生 标准。起始pH值培养基调节起始pH6.56.8。投料与定容将熬制好的液体培养液分别装入1000ml的三角瓶内，装入量为300ml,塞上特 制的棉塞，用牛皮纸把棉塞包住以免受潮。培养基灭菌灭菌器内蒸汽压力到达 0.105 Mpa 0.125Mpa,培养基温度到达温度 121c 124C,保持时间40min,防止灭菌死角。冷却降温灭菌完毕使培养基自然降温至常温。接种把灭菌后的液体培养基、菌桨菌种、所有的接种用具放入超净工作台内用臭氧和紫外线分别消毒30分钟，然后迅速将菌种移入到液体培养基中并塞紧棉塞，接种完毕，液体菌种进入培养阶段。

14、培养温度接种后的液体菌球菌种要放在旋转式振荡器上进展培养，培养温度1825c。培养时间液体菌球菌种的培养时间要以品种而定，担子菌57天，子囊菌35-45天。留样与检测.1留样将培养的液体菌球菌种2减出放在4c生化培养箱，进展留样保存。7.3.2无菌检测对留存的液体菌球菌种样品应在无菌 PDAF板上划线培养，在2528c恒温培养2d5d,假设划痕上没有细菌、霉菌、酵母菌菌落生长，那么说明该样品无杂菌。对留样样品应在取样后及时镜检，确定菌球生长发育状态和有无杂菌污染。,3 pH 值采用酸度计测定，应在规定范围之内。,4菌液湿重采用15cm的定量滤纸，将100ml液体菌液，过滤至无水水滴滴下，称重后

15、 减去滤纸湿重。,5镜检采用显微镜，低倍、高倍、油镜，观擦菌丝生长状况和有无杂菌污染。测试液体菌种感官指标表1液体菌种感官指标感官检测名称感官指标菌球菌种色泽液体菌球菌种呈白色或乳黄色，滤液呈棕色或乳黄色。菌球菌种形状菌液菌球稍粘稠，菌粒悬浮、分布均匀、 4c低温保臧白卜沉 现象，别分开的液体为黄白色或微棕色。在 1825 c放置一 周液体外表会有厚垣菌膜形成。菌球菌种的气味有独特的菌体香味，无酸、辛、苦、臭味等异味。液体菌种理化检测指标表2理化指标液体菌球菌种理化检测名称理化指标pH值在品种正常范围内菌粒湿重g/100ml10显微镜卜观察液体菌球菌种和杂菌鉴别菌粒内原生质分布均匀、染色剂着色

16、深。无霉菌菌丝，酵母和细菌菌体。留存样品无菌检查在PDA上划痕处无霉菌、酵母菌、细菌菌落生长。7记录与存档液体菌球菌种消费的每个环节都要有详细的消费记录，并由主管指导审核，签 字后归档保存。贮存运输在2 c4 c的冰箱中可保存3 0 do三液体菌球的培养8造粒液体菌球培养液配方配方1:马铃薯、玉米粉、葡萄糖、蛋白月东、磷酸二氢钾、硫酸镁、维生素 B1、聚氧丙稀甘油、pH值自然；配方2:麦秋、葡萄糖、麦秋、苹果汁、维生素 B1、pH值自然；配方3:鲜苹果、葡萄糖、磷酸二氢钾、酵母膏、pH值自然；配方4:大米、玉米粉、葡萄糖、蛋白月东、牛肉膏、 pH值自然。原材料符合NY/T528-2002标准要

17、求。详细配方根据消费品种的营养需求，用水符合GB5749-2006,生活饮用水卫生 标准。起始pH值培养基调节起始pH。投料与定容将熬制好的液体培养液分别装入1000ml的三角瓶内，装入量为6 00ml,塞上特 制的棉塞，用牛皮纸把棉塞包住以免受潮。培养基火菌,培养液温度到达温度121C124C,保持时间3 0min,防止灭菌死角。冷却降温灭菌完毕后使培养液自然降温至常温。接种把灭菌后的培养液及所有的接种用具放入超净工作台内用臭氧和紫外线分别消毒30分钟，然后迅速将菌球菌种移入到液体培养液中并塞紧棉塞，接种完毕后，菌球液体进入培养阶段。接种量一级造粒每瓶接入量为15ml, 二级造粒每瓶接入量5

18、ml,菌球培养接入量2 5ml。培养温度接种后的菌球菌液要放在摇床上进展培养，培养温度1825c。培养时间液体菌球的培养时间为，一级造粒7天，二级造粒5天，菌球培养8 - 1 0天。留样与检测留样将培养的液体菌球2减出放在2 c生化培养箱，进展留样保存。无菌检测对留存的液体菌球样品应在无菌 PDA平板上划线培养，在1 8 2 3 C恒温培 养2d5d,假设划痕上没有细菌、霉菌、酵母菌菌落生长，那么说明该样品无杂 菌。对留样样品应在取样后及时镜检，确定菌丝生长发育状态和有无杂菌污染。pH值采用酸度计测定，应在一之内。8菌液湿重采用15cm的定量滤纸，将100ml液体菌球，过滤至无水水滴滴下，称重后 减去滤纸湿重。8镜检采用显微镜，低倍、高倍、油镜，观察菌球生长状况和有无杂菌污染。8测试液体菌球感官指标表1液体菌球感官指标感官检测名称感官指标菌球色泽液体菌球呈白色或乳黄色，滤液呈棕色或乳黄色。菌球形状菌液菌球呈悬浮状、分布均匀、2 C低温保臧白卜沉现象，别离菌球*白色或黄白色。在1825c放