2.1-4 维生素的测定

1、植物中维生素的测定方法报告人：王雨嘉1 维生素是调节人体各种新陈代谢过程必不可少的重要营养素。人体如从膳食中摄入维生素的量不足或者机体由于某种原因吸收或合成发生障碍时，就会引起各种维生素缺乏症。近几年已经查明仅有少数几种维生素可以在体内合成，大多数维生素都必须由食物供给。第一节概 述第九章 维生素的测定 2 因此，维生素作为强化剂已在食品工业的某些产品中开始使用，测定食品中的维生素含量，不仅可评价食品的营养价值，同时还起到监督维生素强化食品的剂量，以防摄入过多的维生素而引起中毒，所以，测定食品中维生素在营养分析方面具有重要的意义。第一节概 述3 维生素的种类繁多，而且这些有机物的结构也很复杂，

2、有的属于胺类（为B1），有的属于醛类（为B6），有的属于醇类（为A），有一些属于酚或醌类化合物等。目前已发现的维生素约有二、三十种，按维生素溶解性能可将它们分成两大类：一类是能溶在脂肪中的，叫脂溶性微生物素（如A、D、E、K等）；另一类是能溶解在水中的，叫水溶性维生素（如B1、B2、B6、C、B12等）。 第一节概 述4维生素是一类维持动物机体健康必不可少的低分子有机化合物，是食物的构成成分，是天然有机化合物。 维生素包括很多不同种类的化合物。针对于今天的题目，我们先明确一点，这些不同种类的化合物之所以被归为维生素，并不是根据他们的化学特性，而是根据他们的生物学功能。5在这二类中与我们最密切，

3、而且了解最多的有：维生素A：是人体必需营养素，能促进人体发育，防止眼膜炎、夜盲症等疾病。维生素B：也叫硫胺素，对人体的功能主要是防脚气病、神经炎，帮助消化，促进发育。维生素B2：对人体功能防口角炎、皮肤炎，防止怕光现象。维生素C：防坏血病，促进外伤愈合，使机体增强抵抗力。维生素D：调节体内矿物盐的平衡，特别是对人体内钙、磷的代谢，并能防止软骨病。第一节概 述6也就是说，这类化合物的化学结构各不总是相同。比如：维生素C：六碳的多羟基内酯7维生素A：一元醇类，由四个异戊二烯单位构成8维生素D3：又称7脱氢胆固醇，由胆固醇脱氢生成9维生素B2：由D核醇和7，8二甲基咯嗪组成10 维生素是维持人体正常

4、生命活动所必需的一类天然有机化合物。其种类很多，目前已确认的有30余种，其中被认为对维持人体健康和促进发育至关重要的有20余种。这些维生素结构复杂，理化性质及生理功能各异，有的属于醇类，有的属于胺类，有的属于酯类，还有的属于酚或醌类化台物。11维生素都具有以下共同特点： 这些化合物或其前体化合物都在天然食物中存在；它们不能供给机体热能。也不是构成组织的基本原料，主要功用是通过作为辅酶的成份调节代谢过程，需要量极小；它们一般在体内不能合成，或合成量不能满足生理需要，必须经常从食物中摄取；长期缺乏任何一种维生素都会导致相应的疾病。12 我们在评价食品的营养价值，开发利用高含量维生素的食品资源，指导

5、人们合理调整膳食结构，指导制定加工工艺或贮存条件，最大限量地保留各种维生素，还要控制强化食品中加入量，防中毒，都离不开分析检测工作。维生素分类：脂溶性（A、D、E、K） 水溶性两类（B族、C）13第二节 脂溶性V的测定 VA、VD、VE、与类脂物一起存于食物中，摄食时可吸收，可在体内积贮。 脂溶性维生素具有以下理化性质： 1溶解性：脂溶性维生素不溶于水，易溶于脂肪、乙醇、丙酮、氯仿、乙醚、苯等有机溶剂。 2耐酸碱性：维生素A、D对酸不稳定， 对碱稳定，维生素E对碱不稳定，但在抗氧化剂存在下或惰性气体保护下，也能经受碱的煮沸。14 3耐热性、耐氧化性： 耐热性 氧化性VA 好，能经受煮沸 易被氧

6、化 （光、热 促进其氧化）V D 好，能经受煮沸 不易被氧化 V E 好，能经受煮沸 在空气中能慢慢被化 （光、热、碱促进其 氧化）15 根据上述性质测定脂溶性维生素时，通常：皂化样品 水洗去除类脂物 有机溶剂提取脂溶性维生素(不皂化物) 浓缩 溶于适当的溶剂 测定。 在皂化和浓缩时，为防止维生素的氧化分解，常加入抗氧化剂(如焦性没食子酸、维生素C等)。 对于A、D、E共存的样品，或杂质含量高的样品，在皂化提取后，还需进行层析分离。16国际单位： IU （International Unit) 1 IU = 0.3g VA = 0.025 VD = 1.79 g-胡萝卜素 = 1.1mg -

7、VE = 3 g VB17 一、维生素A 目前维生素A都是合成的，来源：（1）从动物肝脏中得到；（2）从维生素前体而得到（维生素前体：主要指类胡萝卜素，主要是-胡萝卜素） 维生素A的测定常用的方法有三氯化锑比色法、紫外分光光度法、荧光分析法、液相色谱法。第九章 维生素的测定 18 对于三氯化锑比色法适用于样品中含VA高的样品，方法简便、快速、结果准确，但是对维生素A含量低的样品，如每克样品中含510g维生素A时，这时样品由于受其脂溶性物质的干扰，不应用比色法测定。 对于紫外分光光度法不必加显色剂显色，可直接测定维生素A的含量，对样品中含VA低的也可以测出可信结果，操作简便、快速。 第二节 脂溶

8、性维生素的测定一、维生素A191、维生素A的性质 因有许多不饱和链，故见光易分解； 在缺氧情况下，对热较稳定，对光特别敏感。如测强化奶粉时，速度要快，一般要求测定时间长短，因为时间长，见光时间长，见光分解，故测出的比出厂的含量要少； 对碱稳定。 第二节 脂溶性维生素的测定一、维生素A202、测定步骤 样品用有机溶剂萃取脂类 样品可以根据脂肪的测定处理脂肪，即索氏抽提法，采用乙醚作提取剂，也可用热苯回流方法提取脂类。如果样品中含蛋白质和淀粉多的情况下可采用乙醚提取法。 脂类的皂化 脂类有维生素和脂肪这两部分通过皂化（50%KOH、无水C2H3OH、热回流）把它们分开，得到一部分皂化物和一部分不皂

9、化物。 第二节 脂溶性维生素的测定一、维生素A21皂化条件：（1）C2H3OH脂类 = 81；（2）KOH量 = 脂量皂化价（mg）2.5；（3）皂化温度与时间：70、30分钟在皂化时可以加入抗氧剂连苯二酚和对苯二酚，防止氧化。 提取：不皂化物和皂化物经水、苯、乙醚萃取可得到不皂化物。第二节 脂溶性维生素的测定一、维生素A2、测定步骤脂类的皂化22 柱层析分离干扰物质 采用柱层析分离干扰物质，如果柱层析把-胡萝卜素也洗脱下来，那么这时维生素A与-胡萝卜素就是一个混合物，还要将它们分离开。如果样品中只有维生素A而不含-胡萝卜素时，这时可直接定容。 维生素A与-胡萝卜素分离： 吸附剂：8分中性Al

10、2O3和2分碱性Al2O3混合，装柱 分离方法：a. 用2%丙酮石油醚洗-胡萝卜素；b. 用乙醚洗VA。 第二节 脂溶性维生素的测定一、维生素A2、测定步骤23 3、测定方法 SbCl3比色法 维生素ACHCl3 SbCl3CHCl3形成兰色物质在620nm有最大吸光峰 这种兰色物质不稳定，很快褪色或变成其它物质，所以在分析时最好在暗室中进行，并且做标准曲线。 计算：每百克样品含VA的量= C（V1/V2）（100/W） C ：从标准曲线上查得VA的量 V1 ： CHCl3定容的量 V2 ： 测定所取样液体积 第二节 脂溶性维生素的测定一、维生素A24 紫外分光光度法 a. 原理：VA为脂溶性

11、的，测定VA时必须先将样品中的脂肪抽提出来进行皂化，萃取不皂化部分，在经柱层析除去杂质等干扰物质，在紫外328nm下测定，求出含量。 第二节 脂溶性维生素的测定一、维生素A3、测定方法25 b. 方法 1） 提取及皂化 :称样10.00g 于烧杯中 加40ml水搅匀 移250ml分液漏斗中 加氨水5ml 加乙醇35ml 摇匀 用乙醚抽提（每次40ml抽提三次） 收集乙醚层 用10ml水洗乙醚层三次 水层再用30ml乙醚抽提一次 合并所用乙醚 用索氏法除乙醚 待瓶中乙醚除尽后 加30ml80%的KOH 40mlC2H5OH 加0.8g焦性没食子酸 83水浴30分钟（皂化脂肪） 冷却后移入250m

12、l分液漏斗中 加60ml水 用40ml乙醚抽提三次 合并乙醚抽提液 用水洗至中性 用索氏法除乙醚 除去后用5ml石油醚溶解瓶中内容物 然后移入刻度试管中 第二节 脂溶性维生素的测定一、维生素A3、测定方法 紫外分光光度法26 2）层析 在层析柱内装8cm高度中性氧化铝 2cm高度碱性氧化铝及1cm无水硫酸钠 以石油醚浸透 装皂化后的样液慢慢于柱内 用12ml石油醚洗试管 洗液倒入柱内，活塞打开以每分钟为35滴左右的速度打开，当液面降到接近硫酸钠时 加5ml石油醚 随后用5ml洗脱液逐次洗涤。 层析柱上第一个黄色层析层，一般是-胡萝卜素，此带在12%洗脱液前后洗去，收集于10ml容量瓶中直到流出

13、物不呈黄色为止，此层可测-胡萝卜素用，而VA一般在50%洗脱液洗出，用2ml刻度吸管收集1ml。吸约0.2ml于小试管中加0.3ml25%三氯化锑溶液如呈兰色表明有VA存在，故0.5ml用石油醚定容10ml。第二节 脂溶性维生素的测定 紫外分光光度法b. 方法27高效液相色谱法测定食物中VA、VC （GB/T 5009.822003中第一法） 高效液相色谱法测定维生素A是近几年发展起来的方法，此法能快速分离和测定视黄醇和它的同分异构体、酯及其衍生物。这里介绍的是同时测定维生素A和维生素E的方法。试剂：重蒸水：蒸馏水中加少量高锰酸钾，临用前再蒸馏一次。28二、胡萝卜素的测定 （GB/T 5009

14、.832003 ）第一方法是HPLC； 第二方法为纸层析法。胡萝卜素是一种广泛存在于有色蔬菜和水果中的天然色素，有多种异构体和衍生物，总称为类胡萝卜素，其中在分子结构中含有 一紫罗宁残基的类胡萝卜素，在人体内可转变为维生素A，故称为维生素A原。如、胡萝卜素，其中以胡萝卜素效价最高。29 胡萝卜素原只存在于植物性食品中，但以含有胡萝卜为食物的家禽、兽类、水产动物及其加工产品，以及为着色而添加胡萝卜素的食品，当然也含有胡萝卜素。胡萝卜素的结构如下：30 胡萝卜素对热及酸、碱比较稳定，但紫外线和空气中的氧可促进其氧化破坏。因系脂镕性维生素，故可用有机溶剂从食物中提取。 胡萝卜素本身是一种色素，在45

15、0 nm 波长处有最大吸收，故只要能完全分离，便可定性和定量。但在植物体内，胡萝卜素经常与叶绿素、叶黄素等共存，在提取 一胡萝卜素时，这些色素也能被有机溶剂提取，因此在测定前，必须将胡萝卜素与其它色素分开。常用的方法有纸层析、柱层析和薄层层析法。31 三、维生素D的测定 维生素D是指含有抗伺楼病活性的一类物质，具有维生素D活性的化合物约有l 0种，其中最重要的是维生素D2、维生素D 3及其维生素D原。维生素D 2无天然存在，维生素D2只存在于某些动物性食物中。但它们都可由维生素D原(麦角固醇和7一脱氢胆固醇)经紫外线照射形成。 维生素D2 药片吃多了中毒。32分析方法中较好的是比色法和高效液相

16、色谱法。是AOAC选定的正式方法。 (一)三氯化锑比色法 (二) 液相色谱法 它的的灵敏度较比色法高30倍以上，且操作 简便，精度高，分析速度快。是目前分析 维生素D的最好方法。试剂 10% 焦性没食子酸一乙醇溶液 33单宁 鞣质，具有多元酚基和羧基的有机物质。包括：水解类（产生没食子酸） 缩合类（产生焦性没食子酸、焦儿茶酚）1.没食子酸3，4，5三羟基苯甲酸 （五倍子酸）2.焦性没食子酸（苯三酚）有毒OHOHHOOHOHCOOHHO34紫外吸收光谱是一种分子吸收光谱。它是由于分子中价电子的跃迁而产生的。Beer-Lambert定律是吸收光谱的基本定律 ，数学表达式：A 表明物质在一定波长处的

17、吸光度与浓度之间呈线形关系。因此，只要选择适宜的波长测定溶液的吸光度，就可以求出其浓度。 通常选择被测物的吸收峰处进行测量。维生素D2紫外吸收测定法 35维生素D2的吸收峰在265nm处，于是我们采用将其溶解 在乙醇溶液中，测 其265nm下的吸收值，就可测定其含量。计算结果由此式计算： c维生素D2的质量浓度，mol/L； b 测定时所用的比色杯长度，cm； A在265nm下读取的吸光度； 36第三节 水溶性维生素的测定 水溶性维生素B1、B2和C，广泛存在于动植物组织中，饮食来源充足。但是由于它们本身的水溶性质，除满足人体生理、生化作用外，任何多余量都会从小便中排出。为避免耗尽，需要经常地

18、由饮食来提供。37 水溶性维生素都易溶于水，而不溶于苯、乙醚、氯仿等大多数有机溶剂。在酸性介质中很稳定，既使加热也不破坏；但在碱性介质中不稳定，易于分解，持别在碱性条件下加热，可大部或全部破坏。它们易受空气、光、热、酶、金属离子等的影响； 维生素B2对光，特别是紫外线敏感，易被光 线破坏； 维生素C对氧、铜离子敏感，易被氧化。38 根据上述性质，测定水溶性维生素时，一般都在酸性溶液中进行前处理。 维生素Bl、B2 盐酸水解 酶解 提取 纯化 维生素C通常采用草酸、草酸醋酸、偏磷酸醋酸溶液直接提取。在一定浓度的酸性介质中，可以消除某些还原性杂质对维生素C的破坏作用。草酸价廉，使用方便，对维生素C

19、有很好淀粉酶、木瓜蛋白酶活性人造浮石、硅镁吸附剂39 一、维生素B1的测定 VB1又叫硫胺素 1、食品中VB1的存在形式 常以游离态存在；复合脂形式存在（磷蛋白）； 辅羧酶形式存在。 VB1在酵母、米糠、麦胚、花生、黄豆以及绿色的蔬菜和牛乳、蛋黄中比较丰富，动物组织不如植物含量丰富。第九章 维生素的测定 40 2、VB1的性质 VB1在中性、碱性下不稳定，易分解； VB1在酸性条件下稳定，即使加热酸性也稳定； VB1为白色结晶，微溶于C2H5OH，不溶于乙醚或CHCl3，易溶于水。 第三节 水溶性维生素的测定一、维生素B1的测定41 3、VB1的测定 世界各国都用荧光法测定 原理：硫胺素在碱性

20、铁氰化钾溶液中，被氧化成一种兰色荧光物质，即为硫色素，在紫外光下，硫色素发出荧光。 第三节 水溶性维生素的测定一、维生素B1的测定42 方法 萃取 100g样品于干燥烧杯中，加入100ml0.1N H2SO4，打成匀浆，煮沸30分钟，称取一定的样品经高压锅121、20分钟高压酸解 水解 在酸解的样品中冷却后加入含有10%糖化酶的10ml2.5MNaAC溶液，摇匀，用15%NaOH调PH=4.5，用淀粉酶使淀粉水解，也可用磷酸酶使淀粉水解，于50恒温箱中12小时 第三节 水溶性维生素的测定一、维生素B1的测定3、VB1的测定43一、维生素Bl的测定 维生素Bl又名硫胺素、抗神经炎素，通常以游离态

21、，或以焦磷酸酯形式存在于自然界。在酵母、米糠、麦胚、花生、黄豆以及绿色蔬菜和牛乳、蛋黄中含量较为丰富。1、VB1的测定 方法 纯化（采用柱层析提纯） 吸附剂采用的是人造浮石。人造浮石用25%KCl溶液分数次洗涤，主要是把VB1吸附上去，吸附上去后，再用热水淋洗，最后用25%KCl-HAC把VB1洗脱下来，这样就得到纯VB1，再根据上面的原理在碱性下分析。 分析装填柱子（离子交换柱） 提纯 氧化 测定 第三节 水溶性维生素的测定44 纯化（采用柱层析提纯） 吸附剂采用的是人造浮石。人造浮石用25%KCl溶液分数次洗涤，主要是把VB1吸附上去，吸附上去后，再用热水淋洗，最后用25%KCl-HAC把

22、VB1洗脱下来，这样就得到纯VB1，再根据上面的原理在碱性下分析。 分析装填柱子（离子交换柱） 提纯 氧化 测定 第三节 水溶性维生素的测定一、维生素B1的测定3、VB1的测定 方法45二、维生素B 2的测定 维生素B2即核黄素。在食品中以游离形式或磷酸酯等结合形式存在。膳食中的主要来源是各种动物性食品，其中以肝、肾、心、蛋、奶含量最多，其次是植物性食品的豆类和新鲜绿叶蔬菜。 分析方法：GB/T 5009.852003中第一法为荧光法。 第二法为微生物法。第三节 水溶性维生素的测定46三、维生素C的测定 维生素C是一种已糖醛基酸，有抗坏血病的作用，所以被人们称做抗坏血酸，主要为还原型及脱氢型两

23、种，广泛存在于植物组织中，新鲜的水果、蔬菜，特别是枣、辣椒、苦瓜、柿子叶、猕猴桃、柑橘等食品中含量较多。它是氧化还原酶之一，本身易被氧化，但在有些条件下又是一种抗氧化剂。 第三节 水溶性维生素的测定47 维生素C（还原型）纯品为白色无臭结晶，熔点190192，溶于水或乙醇中，不溶于油剂。在水溶液中易被氧化，在碱性条件下易分解，在弱酸条件中较稳定，维生素C开始氧化为脱氢型抗坏血酸（有生理作用）。如果进一步水解则生成2，3-二酮古乐糖酸，失去生理作用。 第三节 水溶性维生素的测定三、维生素C的测定48 根据它具有的还原性质可以测定维生素C的含量。常用的测定方法有：（1）2，6-二氯靛酚法 （还原型

24、VC）（2）2，4-二硝基苯肼法 （总VC）（3）碘酸法（4）碘量法（5）荧光分光光度法 第三节 水溶性维生素的测定三、维生素C的测定492,6-二氯酚靛酚滴定法测定维生素C含量其能还原2,6-二氯酚靛酚染料。维生素C具有还原性的烯二醇基，我们通过氧化还原滴定来测定维生素C50 维生素C 2,6-二氯酚靛酚 维生素C 2,6-二氯酚靛酚（还原型） （氧化型，粉红色） （氧化型） （还原型） + + = 2,6-二氯酚靛酚染料的钠盐在水溶液中显蓝色，在酸性溶液中呈红色，被还原后红色消失。51基础化学实验一：P166 “ 药片中维生素C含量的测定 ”实验中，同样利用维生素C的还原性,以淀粉为指示剂

25、,以I2为滴定剂对其进行测定。 52（一）2，6-二氯靛酚滴定法1、原理：还原型抗坏血酸还原染料2，6-二氯靛酚，该染料在酸性中呈红色，被还原后红色消失。还原型抗坏血酸还原2，6-二氯靛酚后，本身被氧化成脱氢抗坏血酸。在没有杂质干扰时，一定量的样品提取液还原标准2，6-二氯靛酚的量与样品中所含维生素C的量成正比。 第三节 水溶性维生素的测定二、维生素C的测定532、试剂 1%草酸溶液：称取10g草酸，加水至1000ml； 2%草酸溶液：称20g草酸，加水至1000ml； 维生素C标准液：准确称20mgVC溶于1%草酸中，并稀释至100ml，吸5ml于50ml容量瓶中，加入1%草酸至刻度，此溶液

26、每毫升含有0.02mgVC；第三节 水溶性维生素的测定二、维生素C的测定（一）2，6-二氯靛酚滴定法54 0.02%2，6-二氯靛酚溶液：称取2，6-二氯靛酚50mg，溶于200ml含有52mg碳酸氢钠的热水中，冷却后，稀释至250ml，过滤于棕色瓶中，贮存于冰箱内，应用过程中每星期标定一次。第三节 水溶性维生素的测定二、维生素C的测定（一）2，6-二氯靛酚滴定法2、试剂55标定一：吸标液（VC）5ml于三角瓶加6%KI溶液0.5ml加1%淀粉3滴用0.001N KIO3标液滴定到淡兰色。计算： 抗坏血酸浓度（mg/ml）= （V1 0.088）/ V2V1 - 滴定时消耗0.001N KIO

27、3标液的体积（ml）V2 -维生素C重量（g）0.088 -1ml0.001N KIO3标液维生素C的量（mg/ml） 第三节 水溶性维生素的测定二、维生素C的测定（一）2，6-二氯靛酚滴定法56标定二：吸5ml已知浓度V C标液 加5ml1%草酸 用染料2，6-二氯靛酚滴定至溶液呈粉红色，在15秒不褪色为终点计算：每毫升2，6-二氯靛酚相当于维生素C的毫克数等于滴定度（T） T= （C V1）/ V2C - 维生素C的浓度（mg/ml）V1 -维生素C的体积（ml）V2 -消耗2，6-二氯靛酚的体积（ml） 第三节 水溶性维生素的测定二、维生素C的测定（一）2，6-二氯靛酚滴定法57 0.0

28、01N KIO3标液：吸0.1N KIO3溶液5ml于500ml容量瓶内加水至刻度，每毫升相当于VC0.008mg； 0.5%淀粉溶液； 6%KI溶液。第三节 水溶性维生素的测定二、维生素C的测定（一）2，6-二氯靛酚滴定法2、试剂583、操作方法 提取：称样50g加2%草酸100ml到入捣碎机中处理过滤颜色若深可加白陶土 滴定：吸5ml样液于三角瓶用染料滴定至粉红色15秒内不褪色计算：VC（mg/100g）=（V T）/ W 100 V -消耗染料体积（ml）T -1ml染料所能氧化维生素C的毫克数W- 滴定时所有滤液中含有样品的克数 第三节 水溶性维生素的测定二、维生素C的测定（一）2，6

29、-二氯靛酚滴定法594、注意事项 所有试剂的配制最好都用重蒸馏水； 滴定时，可同时吸二个样品。一个滴定，另一个作为观察颜色变化的参考； 样品进入实验室后，应浸泡在已知量的2%草酸液中，以防氧化，损失维生素C； 贮存过久的罐头食品，可能含有大量的低铁离子（Fe2+），要用8%的醋酸代替2%草酸。这时如用草酸，低铁离子可以还原2，6-二氯靛酚，使测定数字增高，使用醋酸可以避免这种情况的发生；第三节 水溶性维生素的测定二、维生素C的测定（一）2，6-二氯靛酚滴定法60 整个操作过程中要迅速，避免还原型抗坏血酸被氧化； 在处理各种样品时，如遇有泡沫产生，可加入数滴辛醇消除； 测定样液时，需做空白对照，

30、样液滴定体积扣除空白体积。第三节 水溶性维生素的测定二、维生素C的测定（一）2，6-二氯靛酚滴定法4、注意事项61（二）2，4-二硝基苯肼法 可测总抗坏血酸，总抗坏血酸包括还原型、脱氢型和二酮古乐糖酸型。此法是将样品的还原型抗坏血酸氧化为脱氢型抗坏血酸，然后与2，4-二硝基苯肼作用，生成红色的脎。脎的量与总抗坏血酸含量成正比，将红色脎溶于硫酸后进行比色，由标准曲线计算样品中总VC 第三节 水溶性维生素的测定二、维生素C的测定62 1、原理：用酸处理过的活性碳把还原型的抗坏血酸氧化为脱氢型抗坏血酸，在继续氧化为二酮古乐糖酸。二酮古乐糖酸与2，4-二硝基苯肼偶联生成红色的脎，其成色的强度与二酮古乐糖酸浓度呈正比，可以比色定量。第三节 水溶性维生素的测定二、维生素C的测定（二）2，4-二硝基苯肼法63 2、步骤 样品处理与分析 称一定样 加等量2%草酸 于高速捣碎机捣碎 取匀浆20g 用1%草酸定容100ml 过滤 取滤液10