巨噬细胞吞噬作用的观察 细胞学实验报告

1、 /7题目：巨噬细胞吞噬作用的观察一实验目的通过小鼠腹腔巨噬细胞对异物吞噬作用的观察，了解巨噬细胞在非特异性免疫中的功能。掌握小鼠等实验动物腹腔巨噬细胞采集和制片的方法。学习小鼠腹腔注射的操作方法和步骤。二实验原理向小鼠腹腔内注射无菌淀粉肉汤，排异反应使小鼠产生大量巨噬细胞，且巨噬细胞吞噬淀粉肉汤后不会对细胞造成伤害，反而被“喂养”。连续多天注射使小鼠腹腔内聚集大量巨噬细胞。台盼蓝是一种生物染料，专一染色死细胞。活细胞的细胞质膜对台盼蓝有不透过性。巨噬细胞吞噬含有台盼蓝的淀粉肉汤后，可以消化其中的淀粉和蛋白质，但是不能消化其中的台盼蓝，因此台盼蓝会聚集在溶酶体中。是一种溶酶体染色的方法当向小鼠

2、腹腔中注射鸡红细胞时，鸡红细胞作为外源物质，会被小鼠细胞识别并吞噬，在适当的的时机，我们就有可以在显微镜下观察到巨噬细胞吞噬鸡红细胞的过程三实验材料及设备实验材料：连续23天向腹腔中注射含台盼蓝的淀粉肉汤的小鼠一只鸡红细胞悬液生理盐水实验设备：普通光学显微镜载玻片、盖玻片若干注射器染色皿若干、吸水纸、滴管、剪刀、白瓷板等四川大学实验报告生命科学学院专业生物技术2016级生技班612组姓名同实验者2018年3月26日四川大学实验报告 /7 /7生命科学学院专业生物技术2016级生技班612组姓名同实验者2018年3月26日小鼠处理与巨噬细胞采集连续2-3天(每天一次)向小鼠腹腔中注射含台盼蓝的淀

3、粉肉汤。选择已注射淀粉肉汤3小时以上的小鼠一只。一人控制住小鼠，露出腹部，另一人用注射器向小鼠腹腔中注射1ml鸡红细胞悬液。按摩小鼠腹部。20-30分钟后，再注射1-15ml生理盐水(0.9%NaCl)按摩小鼠腹部。3分钟后，引颈法处死小鼠迅速在腹腔剪开一个不大的开口(注意要剪开腹部的肌肉层)，用无针头的注射器吸取腹腔液。在载玻片上滴2-3滴腹腔液，加上盖玻片，在显微镜下观察。观察在不同倍数下观察样本，找到正在消化或者吞噬鸡红细胞的巨噬细胞。注意避免玻片液体干涸。五.实验结果图1小鼠腹腔巨噬细胞吞噬鸡血红细胞装片（100X物镜不染色）左上角示未知种类细胞100 x物镜放大倍数，光镜下可见随机分

4、布的不同种类的细胞。巨噬细胞体积最大，未吞噬鸡红细胞时呈边缘不规则的球状，可见胞质中存在不均匀分布内含物。部分巨噬细胞中可见一个或多个颜色更深的橄榄形鸡红细胞。小鼠红细胞呈现两面凹的圆饼状，并且存在一种外表呈不规则突出的细胞，大小和红细胞相似。巨噬细胞较为固定，可见小鼠红细胞在生理盐水中悬浮飘动。长时间录像观察可见巨噬细胞伸出伪足缓慢移动。六实验讨论1.实验结论：当小鼠腹腔中的巨噬细胞遇到鸡红细胞以后，鸡红细胞属于外源性抗原。非特异性识别作用使巨噬细胞迅速聚集并开始吞噬鸡红细胞。在显微镜光镜下可见正在或已被巨噬细胞吞噬的鸡红细胞。2.讨论一：在光镜下可观察到腹腔提取液中存在外表呈不规则突出的细

5、胞，它是什么细胞，为什么？a)猜想一：该细胞为小鼠血小板图2红细胞血小板巨噬细胞电镜观察查询资料可知：血小板是从骨髓成熟的巨核细胞胞浆解脱落下来的小块胞质。所以血小板并没有细胞结构，且体积远小于红细胞。和观察结果不符，故不是小鼠血小板。b）猜想二：该细胞为部分失水的小鼠红细胞光镜下观察发现这样一组细胞（图三）中下是正常的小鼠红细胞，右上可以看出是略微有些皱缩的小图4可见扁形形状的未知细胞鼠红细胞，而左上为未知细胞。可图3未知细胞萎缩红细胞正常红细胞对比见三者体积相似，颜色相似，左上未知细胞的伪足数量也和右侧失水皱缩红细胞凸角数相似。同时由图四可见该未知细胞有一个面较平整。和小鼠红细胞扁平形状相

6、对应。故此可推测出该细胞为部分失水的小鼠红细胞。产生的原因可能是载玻片上的生理盐水不断蒸发，导致边3.讨论二：在巨噬细胞周围，有时细胞“吐出”的透明空泡，这是詔it声am毛缘的盐浓度升高，造成红细胞失水。什么原理?巨噬细胞除了非特异性识别外来抗原和衰老死亡体细胞外，还兼有分泌能力。在某些情况下，巨噬细胞四川大学实验报告 /7生命科学学院专业生物技术2016级生技班612组姓名同实验者2018年3月26日可以通过形成空泡来将水解酶分泌到细胞外，抵抗病原体的侵袭，由于水解酶溶解时无色，故观察时容易表现为一个透明的空泡。團3更组质粒pOiRed-Monunur-ClAarATHP-1细*Z4h后用电锁观显细腿理悲拮果卩皿切玄JI.轴胞顷中充備尢小平一的空泡”型皑糕形秦正肯皿绷胞质中北溝丈小不一的空电知腿抉罐曲到一边；3.地胞核鑽邑质雄轴*积舉在鞍周呈早期调亡熬更14.细胞核弹芭履固嫦、碎裂*呈晚期閒亡改呃.且通过文献查询可知，部分巨噬细胞在凋亡期也会产生空泡。七参考文献李津婴，许燕群.红细胞形态学对溶血性疾病的诊断意义J.诊断学理论与实践,2010,(3):214-217.翟中和，王喜忠，丁明孝等.细胞生物学M.高等理科教育，2004(1):123