抗氧化剂儿茶素微胶囊制备及其对肾病大鼠的疗效

1、抗氧化剂儿茶素微胶囊制备及其对肾病大鼠的疗效田云，卢向阳，何小解，肖红波，彭丽莎，易著文，罗泽民【关键词】儿茶素抗氧化活性肾病综合征大鼠Preparatinandtherapeutieffetsfantixidantatehinirapsulesnratsithnephrtisyndre【Keyrds】atehinantixidantapaitynephrtisyndrerat当前种种普及利用的合成抗氧化剂由于其埋伏的宁静隐患等渐渐受到人们的排挤，从植物中探求天然、高效、低毒抗氧化剂成为当代食品、医药和保健行业的紧张课题之一。但天然植物抗氧化剂在天然条件下轻易失去抗氧化生物活性，使之应用受到了

2、较大的范围1。肾病综合征nephrtisyndre，NS是原发性肾小球疾病的常见表现，活性氧reativexygenspeies，RS在其产生生长中起着非常紧张作用2。探求一种天然高效抗氧化剂，帮助激素治疗途径，收缩治疗时间、低落糖皮质激素引起的副作用已成为如今临床肾脏病事情者的紧张课题之一。本研究围绕肾病综合征的产生与活性氧自由基的干系以及天然植物抗氧化剂扫除活性氧的特性，对天然植物抗氧化剂抗氧化活性举行评价底子之上，为落服儿茶素不变性差、味涩、易受胃液pH情况影响以及脂溶性差而生物利用率不高的缺陷，进一步研究了儿茶素微胶囊的制备技能，通过微胶囊化来增长儿茶素的不变性和生物有用性，末了通过肾

3、病动物模子试验不雅察儿茶素微胶囊对肾病大鼠的疗效，为利用儿茶素防治临床肾病综合征提供了理论与试验根据，拓宽了儿茶素的应用范畴。1质料与要领1.2要领扫除H22本领测定:在样品池内参加一定浓度梯度的样品水溶液50l以蒸馏水做空缺比拟，然后参加15%H22溶液50l、鲁米诺-碳酸缓冲液pH9.5900l，充实混匀后，立即启动化学发光，记载60s内化学发光动力学曲线。按照参考文献3，用发光按捺率为50%时的样品浓度I50来权衡样品对活性氧的扫除本领。儿茶素含量测定:高效液相色谱法。细密称取适量微胶囊，用少量水洗去外貌儿茶素或置研钵中加少量蒸馏水研磨成糊状并浸提24h，过滤并定容100l;适量质料直接

4、用水溶解并定容至100l，用高效液相色谱阐发儿茶素含量。色谱条件为:色谱柱:Nva-Pak183.9150;活动相:N，N-二甲基甲酰胺-甲醇-冰醋酸8043;二元梯度洗脱A相为超纯水，B相为活动相:B比拟例由初12%经20in变为30%;紫外检测波长:278n;柱温:35;流速:1.0l/in;进样量:10l。微胶囊产率=产物中儿茶素总含量参加到悬浮体系中的儿茶素含量100%;微胶囊服从=1产物外貌的儿茶素含量产物中儿茶素总含量100%。微胶囊超微布局不雅察:扫描电镜SE法在SE样品台上贴一层双面胶，将充实混匀的微胶囊粉末撒在双面胶上，稍加压实，使一部门粉末陷入双面胶中，用刀片轻刮粘在双面胶

5、上的微胶囊化儿茶素粉末，然后轻轻吹去多余的粉末，喷金，用SE不雅察，选择具有代表性的视野举行照相。亚慢性毒性试验:大鼠十二周饲喂试验4。将康健SD大鼠80只随机分成儿茶素微胶囊高1/5LD50、中1/10LD50、低1/25LD50三个剂量组1230g/kgbd、610g/kgbd和240g/kgbd和生理盐水比拟组共四组，每组20只，牝牡各半并分笼豢养。天天给药1次，一连给药12周，不雅察临床反响。停药后24h杀鼠网罗血样，用试剂盒检测血通例、肝肾成效等生化指标，取内脏举行形态学与构造学查抄。2结果2.2儿茶素微胶囊的制备从固形物含量、芯材与壁材的比例以及壁材的构成对儿茶素微胶囊产物质量的影

6、响中看出表24，随着固形物含量的增长，微胶囊产物的产率和服从均有所上升，但是当固形物含量过高时，进料粘度的增大会增长料液的雾化困难，并使喷头产生堵塞等征象。综合微胶囊产物质量的各项指标，固形物含量以25%为宜。芯材与壁材比例的进步，对微胶囊产物的产率和水分含量影响较小，但活动性明显加强，当芯材与壁材比例进步到73时，产物服从落落许多，因此，芯材壁材以64为宜。壁材构成的改变对微胶囊产物的产率影响不明显，但随着乙基纤维素的增长，微胶囊产物的服从和水分含量都表现为先上升后落落。但当乙基纤维素与聚乙二醇的比例进步到91时，其活动性显着落落，故乙基纤维素聚乙二醇以82为宜。表2固形物含量对微胶囊产物质

7、量的影响表3儿茶素包埋量对微胶囊产物质量的影响表4壁材构成对微胶囊产物质量的影响注:“-表现活动性较差，“-越多，表现活动性越差;“+表现活动性较好，“+越多，表现活动性越好2.3微胶囊超微布局借助扫描电镜，可以看出利用喷雾枯燥法所制备的微胶囊产物不是完全匀称同等，其为巨细约在30150之间较规矩的球状颗粒图1。产物外貌平滑完备、无缝隙，略有凹陷图2，而凹陷为喷雾枯燥微胶囊化产物普及所具有的特性。微胶囊囊壁的局部布局表现为致密的团体布局图3，说明该产物具有较好的包埋结果。图1微胶囊超微布局图图2微胶囊外貌布局图图3微胶囊囊壁布局2.4儿茶素微胶囊宁静性评价儿茶素微胶囊急性毒性试验结果:大、小鼠

8、均没有表现出显着的中毒病症;儿茶素微胶囊对大鼠的LD50为6110g/kg，对小鼠的LD50为5090g/kg。按照急性毒性分级尺度，儿茶素微胶囊属实际无毒级。儿茶素微胶囊亚慢性毒性实行结果:各组大鼠在试验期内运动、饮食、粪便和皮毛光芒等均未见非常;实行末各组大鼠肝成效、肾成效、总胆固醇、红细胞计数、白细胞计数等均无统计学差异P均0.05见表5，其重要脏器系数g/100g体重或g/100g体重差异亦无明显统计学意义P均0.05见表6;剖检及光镜镜检均未创造本色性病变及成心义的变革，表白儿茶素微胶囊不会造成显着的病理损伤。2.5儿茶素微胶囊对肾病综合征大鼠卵白尿及病理损害的影响实行初，各组大鼠尿

9、卵白分泌量无显着差异P均0.05。阿霉素造模后，在第二周末均出现了大量卵白尿，经电镜检测，肾小球基底膜可见足突普及交融，说明阿霉素肾病模子制备乐成。随着周龄的增长，比拟组尿卵白的分泌量渐渐增长，从第二周末始，别的各组大鼠24h尿卵白分泌量均较同时期比拟组要高P均0.01，差异有非常明显意义，见表1。实行第附近末，除比拟组外，别的各组大鼠24h尿卵白的分泌量均高于激素组，差异有非常明显意义;与肾病组比拟:别的各组大鼠24h尿卵白的分泌量均有差异程度低落，差异有非常明显意义。实行末，各组大鼠24h尿卵白的分泌量依次为:肾病组儿茶素治疗组儿茶素微胶囊治疗组激素治疗组比拟组。儿茶素微胶囊治疗组与儿茶素

10、治疗组24h尿卵白的分泌量在第附近末差异无明显意义，但在第六周末差异明显P0.05。实行第附近末，与肾病组比拟，激素组大鼠病理积分低落，差异有非常明显意义P0.01，见表8。与激素组比拟，微胶囊组大鼠病理积分固然增高，但并没有统计学意义。实行第六周末，各组大鼠病理积分由高至低依次为:比拟组、肾病组、儿茶素组、微胶囊组、激素组。与肾病组比拟，激素组与微胶囊组大鼠病理积明白显低落，差异有非常明显意义P均0.01，与激素组比拟，儿茶素组及微胶囊组大鼠病理积分均增高，差异有明显意义P别离0.01、0.05，详细见表8。经相干阐发创造:24h尿卵白分泌量与肾脏病理积分呈高度正相干r0.827，P0.01

11、。说明儿茶素微胶囊可以通过低落尿卵白的分泌量，来减轻肾脏损害，延缓肾脏病理慢性希望。3讨论近二十多年来抗氧化剂的研究与应用获得了飞速的生长，种种普及利用的合成抗氧化剂由于其埋伏的宁静隐患等渐渐受到人们的排挤，从植物中探求天然、高效、低毒抗氧化剂成为了如今抗氧化剂生长的一个一定趋势。从如今的研究来看，天然植物抗氧化剂中绝大部门都是多酚类物质，此中应用得较好的有儿茶素、葡萄籽提取物、迷迭香提取物等。本研究通过体外抗氧化试验表白:儿茶素对三种重要活性氧的扫除本领均比葡萄籽提取物和迷迭香提取物要强。但是，儿茶素分子中的酚羟基很生动，在外界条件下极不不变，轻易因产生氧化、聚合或缩合等反响，而失去部门抗氧

12、化活性及别的生物学成效6，且非庇护状态下，其在体内的生物利用率也很低。为了有用办理这一题目，本文利用喷雾枯燥法将其制备成微胶囊，并对制备工艺举行了开端探究2022年8月25日申报国度创造专利，2022年10月22日通过初审，申请号：202210046696.8。通过电镜不雅察及宁静性评价，所制备的儿茶素微胶囊不但具有较好的包埋结果，并且属于实际无毒级、无任何毒副作用，表白其可应用于临床研究。大量卵白尿是肾病综合征的重要临床表现，一连大量卵白尿可导致肾脏一连损伤，从而引起肾脏慢性举行性损害，因此有用操纵卵白尿的分泌是治疗肾脏病的底子地点7。别的，活性氧自由基的过量积累也是造成肾脏病慢性希望的紧张

13、缘故原由2。如今临床上治疗肾病综合征的首选药物是糖皮质激素，然而大量的研究创造假设恒久利用糖皮质激素可使肾小球入球小动脉阻力落落，肾小球内压力增长，改变肾小球对大分子物质的通透性，增长尿卵白的排挤，加快肾脏的损伤8。比年来，海内也有学者研究创造糖皮质激素不但可使患者尿卵白增长，尚可引起肾小球滤过率和有用肾血浆流量增长9。因此，探求一种交换或帮助激素治疗途径，收缩治疗时间、低落糖皮质激素引起的副作用已成为如今临床肾脏病事情者的紧张课题之一10。本课题组通过儿茶素对大鼠肾病综合征防治机制的研究创造:儿茶素对付防治肾小球疾病的慢性希望具有较好的作用.通过进一步体系研究，不雅察儿茶素微胶囊对肾病综合征大鼠卵白尿和肾脏病理积分的影响创造:儿茶素治疗组、儿茶素微胶囊治疗组和激素治疗组均可在一定程度上低落卵白尿分泌和肾脏病理积分，但又存在一定差异，与游离儿茶素治疗组比拟，儿茶素微胶囊治疗组的疗效更好。这大概与儿茶素微