正交投影鉴别决明子色谱指纹图谱峰纯度

1、正交投影区分决明子色谱指纹图谱峰纯度方洪壮沈德凤任淑清【关键词】正交摘要：应用正交投影法对色谱指纹图谱的峰举行区分。用比较组分光谱与目的色谱峰前后的零浓度区光谱构建正交投影阵，对目的色谱峰的光谱举行投影，以投影前后光谱的夹角余弦作为判据来区分目的色谱峰的峰纯度。对决明子药材色谱指纹图谱的峰纯度区分，识别出大黄素、大黄素甲醚及大黄酚三个纯色谱峰。正交投影区分色谱指纹图谱峰的纯度要领效果可靠，配景的滋扰可消除。关键词：正交投影；色谱指纹图谱；色谱峰纯度；决明子正确识别色谱峰的纯度是色谱的定性和定量阐发的条件。由于中药的化学身分多为次生代谢产物，互相间的化学布局不同很孝理化性子近似，其色谱峰在色谱指

2、纹图谱上不成制止有重叠，正确鉴别色谱峰纯度更显紧张。区分色谱指纹图谱色谱峰的纯度、确认色谱峰不但增长指纹图谱的信息量，并且有助于对中药的深化研究。色谱峰纯度的定性可归结为仪器要领和化学计量学要领1，此中后一要领又是前一要领的基矗本研究按照正交投影的原理和多组分色谱相干光谱的要领2，3，应用正交投影法对中药决明子药材的色谱指纹图谱中的色谱峰举行了纯度区分，识别出三种蒽醌类身分的纯色谱峰。实行效果表现，所提出的要领效果可靠，有必然的有用代价。1要领原理设X为接纳联用色谱测得的中药色谱指纹图谱的N阶二维数据矩阵,它们的行标的目的表征了色谱的流出信息个流出时间点,列标的目的表征了光谱信息N个汲取波长；

3、用Xa表现X中的待区分的目的组分色谱峰的N阶二维数据矩阵，思量到仪器的配景，可把矩阵Xa分成两个部门，即：XaXbX(1)X表现来自目的组分的重要信息，而Xb那么表现来自仪器的配景。在目的色谱峰前后的零浓度区内别离各拔取一点s目的色谱峰前与e目的色谱峰后，以此两点的光谱矢量Bs和Be及比较组分的光谱失量B，构成光谱矩阵A：A=Bs,Be,B(2)并布局正交投影阵：IAA+(3)此中,I为单元矩阵，A+为A的广义逆阵。用矩阵对X沿色谱标的目的的每一光谱矢量xj举行投影运算：xj*xj(4)xj表现X的第j条光谱,xj*表现xj投影后的剩余光谱。为消除不等性噪声4的影响，令投影后所得的剩余光谱xj

4、*与投影前的原始光谱xj的夹角余弦为rj，即：rj=xj*xjT/(xj*xjT)JY(5)并以rj作为区分色谱峰纯度的判据3。由于扣除了xj与A相干的光谱信息，xj*保存了xj与A不相干的光谱信息，以是，rj值越小,即经投影所得的剩余光谱xj*与投影前的原始光谱xj的夹角越大，说明xj*保存xj的光谱信息越少，xj与A相干性越大；反之rj值越大,说明xj*保存xj的光谱信息越多,xj与A的光谱相干性越校当rj值即是0时,xj*与xj完全正交,完全扣除了xj与A相干的光谱信息,xj*完全只剩下随机噪声。以投影矩阵对指纹图谱X中的目的色谱峰X的每一列光谱举行投影，可得沿色谱标的目的的光谱残差夹角

5、余弦曲线，假设该曲线目的色谱峰时间范畴的rj值为零或靠近于零，那么说明它所对应的目的色谱峰为一与比较组分雷同的单一物质峰，不然，目的色谱峰为一重叠峰。2实行部门21仪器与试剂HP1100高效液相色谱仪，包罗Agilent1100四元泵，HP1100二极管阵列检测器，HP色谱化学事情站。决明子药材河北；大黄素、大黄素甲醚、大黄酚比较品均购自中国药品生物成品检定所。乙腈、甲醇为色谱纯，盐酸、磷酸及氯仿为阐发纯。22样品制备221比较品溶液称取大黄素、大黄素甲醚、大黄酚比较品适量，以甲醇为溶剂，配制成200g/l的大黄素、大黄素甲醚、大黄酚三种身分的混淆比较品溶液。222供试品溶液取决明子样品，破坏

6、，过80目筛，称取2g，加1.5l/L的盐酸溶液30l，加热回流1.5h，放冷，加氯仿25l，回流20in,取出，分取氯仿层，酸水层再加氯仿25l，回流20in，分取氯仿层，同上法操纵，加氯仿再回流提取2次，归并4次氯仿提取液，加水20l振摇洗脱，弃去水层，将氯仿液蒸干，残渣加甲醇微热使溶解，定量转移10l量瓶中，加甲醇至刻度，摇匀。安排，取上清液经0.45微孔滤膜过滤。23色谱条件色谱柱：HypersilDS(4.0250,5),庇护柱：Sienhe18柱(3.020,5)；活动相：乙腈A-0.1%磷酸水溶液(B)作梯度洗脱，0in，5%A-95%B；10in，15%A-85%B；20in，

7、35%A-65%B；55in，70%A-30%B；56in后100%A；流速：1.0l/in；柱温：室温；检测波长：278n；参比波长：340n；光谱数据记载范畴：220500n，波长隔断2n；进样量：10l。24目的峰确定取决明子供试品溶液按选定色谱条件测定,记载其色谱图，效果见图1。另取大黄素、大黄素甲醚、大黄酚比较品混淆溶液同法测定。比力比较品与决明子图谱，并使用色谱事情站峰判断成效，开端确定图1中的8、9、10号峰别离为大黄素、大黄酚、大黄素甲醚目的峰。25色谱峰纯度区分别离于大黄素、大黄素甲醚、大黄酚比较品混淆溶液的各色谱峰处网罗色谱光谱二维数据，并在供试品溶液色谱8，9，10号峰前

8、后的零组分区网罗色谱光谱二维数据，按3式别离布局各比较品的正交投影阵，以投影矩阵对指纹图谱中相对应的图谱片断的每一列光谱举行投影，并按5式盘算目的色谱峰的光谱正交投影前后光谱失量的夹角余弦。由盘算效果可知图1中的8、9、10号峰别离为大黄素、大黄酚、大黄素甲醚的色谱纯峰。3效果与讨论31目的色谱峰的配景的影响试验中创造目的色谱峰的峰前与色谱峰后的二维数据配景对色谱峰纯度的区分均有影响，对付色谱指纹图谱中的大黄素、大黄酚、大黄素甲醚峰纯度的区分，如光谱矩阵A中不包罗Bs和Be，即不思量对配景举行扣除，均难以得到确定的效果。以10号峰大黄素甲醚为例，正交投影前后光谱失量的夹角余弦曲线图图2表白，对配景滋扰举行扣除后可正确地识别。这是由于中药身分的庞大性及色谱的流出时间较长，在中药色谱指纹图谱的测定中不成制止地存在着仪器的配景，如不举行二维数据的配景扣除，必将对色谱峰纯度产生误判。32不等性噪声影响实行表白，对目的色谱峰的光谱举行投影后，得到的剩余光谱并非为零或靠近于零，而剩余光谱与投影前的光谱余弦值近似为零。图3为在相应色谱保存时间内的大黄素甲醚剩余光谱模的曲线及相应的剩余光谱与投影前的光谱余弦值曲线，从图3中可知，两者相差很大。实行所区分的大黄素与大黄酚的盘算出现了雷同的效果。这是由于，当无滋扰存在时，假设指纹图谱X中目的色谱峰与比较组分为同