抗核抗体基本概念及对应临床疾病概述课件

1、抗核抗体基本概念及临床检测传统定义 针对细胞核成分的自身抗体的总称。广义定义 针对细胞内所有抗原成分的自身抗体的总称。对ANA的理解不再局限于核成分，而是指核酸和核蛋白抗体的总称 靶抗原存在于包括细胞核、细胞浆、细胞骨架、细胞分裂结构等部位抗核抗体的定义ANA可见于多种疾病，特别是结缔组织疾病，常作为结缔组织病的诊断、病情判断和疗效观察的指标在非结缔组织病中也可出现阳性。正常人中（特别是老年人）也可出现阳性，但滴度低，并且常表现为IgM型高滴度ANA则高度提示自身免疫性疾病 目前，ANA检测已成为临床上的一个极重要的自身免疫病的筛查实验。ANA检测的临床意义系统性红斑狼疮活动期非活动期药物诱导

2、的红斑狼疮混合性结缔组织病（MCTD、Sharp综合征）类风湿性关节炎进行性系统性硬化症多发性肌炎及皮肌炎干燥综合征慢性活动性肝炎溃疡性结肠炎其它风湿病正常人 9510080100100100204020508595305070803040265-10ANA检测的临床意义ANA实验室检测策略推荐ANA间接免疫荧光法筛查实验间接免疫荧光法检测ANA基本原理间接免疫荧光法 包被HEp-2细胞的基质玻片样本中ANA-IgGFITC标记的抗人IgG抗体抗原谱完整 (细胞核、细胞浆中近百种自身抗原)人源细胞，无种属非特异荧光干扰肿瘤细胞，易于培养及商品化生产核质比大，可观察到多种不同荧光核型ANA筛查的

3、经典和标准基质: HEp-2均质型核点型着丝点型核仁型Scl-70粗颗粒型细颗粒型核膜型.核糖体P蛋白线粒体型高尔基体溶酶体肌动蛋白波形蛋白基于Hep-2细胞为基质的ANA初筛实验ANA间接免疫荧光法筛查试验的实际价值初步甄别自身免疫性疾病患者（阴阳性结果）尽可能判断荧光核型（缩小靶抗原确认实验范围）获取抗体滴度信息（判断病情进展、预后等）考虑到荧光法筛查试验存在主观性强的特点，因此应以一种客观和现实的态度去面对筛查试验结果几个相对常见且重要的荧光核型均质型核点型着丝点型核仁型粗颗粒型核膜型.核糖体P蛋白线粒体型肌动蛋白常见且重要核型的标准核型表现相对典型阳性率相对较高靶抗原相对明确应重视AN

4、A滴度的检测抗体滴度的临床意义1、明确界定自身免疫性疾病患者；2、作为疾病进程、临床疗效和病情预后及转归等的判断指标当前国际主流ANA间接免疫荧光法检测系统广泛采用的起始稀释度为1:40。即该检测系统的正常参考范围为1:40。梯度稀释时的稀释因子为1:2。HOB公司产品推荐按照1:80开展稀释。 荧光强弱及血清稀释度荧光强弱判读 观察标本的特异性荧光强度一般用“+”号表示。“”为无或仅见极微弱荧光；“+”为荧光较弱但清楚可见；“+”为荧光明亮；“+”为耀眼的强荧光。临床上根据特异性荧光强度达“+”以上判定为阳性抗体梯度稀释起始稀释：1:80梯度稀释（稀释因子2）1:1601:3201:6401

5、:12801:2560直至抗体转阴各稀释度的反应性抗体滴度临床意义1:801:640阳性+1:80阳性，需结合临床表现综合判断阳性+1:160阳性，提示可能存在相关疾病阳性+弱+1:320明确阳性，提示可能存在相关疾病阳性+阳性+1:640中等阳性，提示可能存在相关疾病阳性+阳性+1:1280强阳性，高度提示存在相关疾病阳性+阳性+1:2560极强的阳性，高度提示存在相关疾病。ANA荧光滴度判读举例HOB公司间接免疫荧光法产品系列产品系列基质检测项目ANA筛查HEp-2细胞ANA各种不同核型dsDNA绿蝇短膜虫抗dsDNA抗体AKA大鼠食管抗角蛋白抗体ANCA中性粒细胞乙醇和甲醛固定抗中性粒细

6、胞胞浆抗体组织器官大鼠肝/肾/胃ASMAPCAAMALKM-1LC-1HEp-2细胞产品系列 （举例）166孔1010孔812孔ANA靶抗原确认实验条带酶免分析法检测ANA基本原理LIA检测方法原理底物颜色反应硝酸纤维膜IgG抗体碱性磷酸酶标记的抗人IgG抗体ANA谱系列U1-nRNP 和 Sm抗原SLE: 5-30%SLE: 15-40%MCTD: 95-100%功能:参与mRNA前体的剪切SS-A (Ro-60), Ro-52 和SS-BAnti-SS-A (60 kDa)干燥综合征.:40-95%SLE: 20-60%新生儿狼疮: 96%Anti-SS-B干燥综合征.:40-95%SLE

7、: 10-20%新生儿狼疮: 78%Anti-Ro-52 (52 kDa)非特异功能: 调控RNA翻译功能:RNA聚合酶III辅助蛋白XScl-70 (DNA-拓扑异构酶I)功能: 在DNA复制和转录过程中完成双链解螺旋疾病:硬化症: 50% - 75%Anti-Scl-70 特点局限型和弥散型硬化症病中的阳性率分别为10% 和48%。抗Scl-70抗体阳性的患者通常病情发展快、预后差、多器官累及。PM-Scl抗原: 几种多肽复合物(分子量间于20-100kDa)，主要的靶抗原为100 kDa 相关疾病: 硬化症:2% - 5% 肌炎:8%重叠综合征:24%Jo-1抗原:组氨酰tRNA合成酶(

8、50 kDa),细胞浆中的磷蛋白相关疾病: 多肌炎/皮肌炎的血清学标志，阳性率为25- 35%，当伴有肺间质纤维化的多肌炎，阳性率可高达70%。 着丝点抗原：动粒中的4种蛋白：A (17 kDa), B (80 kDa), C(140 kDa), D蛋白 (50 kDa)。着丝点蛋白 B为主要的靶抗原 (与IIF：100%)功能: 分裂期纺垂体的附着点 相关疾病:硬化症:18%局限型: 80% - 95%(CREST综合征) PCNA:细胞增殖相关核抗原I型抗原:DNA聚合酶的辅助蛋白 发挥控制细胞周期的作用相关疾病: 系统性红斑狼疮的特异性抗体，但其发生率仅为3%。 染色体结构示意图DNA核

9、小体染色体染色质组蛋白dsDNA抗原：双链DNA，天然DNA(脱氧核糖核酸骨架)相关疾病：dsDNA: 为SLE的诊断标准之一，阳性率为60-90%，不同的检测方法诊断特异性差别较大。抗体滴度与疾病的活动性、狼疮肾炎的发病风险具有相关性。组蛋白抗原:H1, H2A, H2B, H3, H4，H2A-H2B，H3-H4(主要的靶抗原为H1和H2B)相关疾病: 药物诱导性 LE: 100%(抗组蛋白抗体是该病唯一的标志性抗体)各种结缔组织病：SLE: 30-80% SSc: 30% SS: 10%核小体抗原:组蛋白和DNA形成的复合物相关疾病: SLE：高特异性指标，阳性率为50-95%，特异性几乎100%，抗核小体抗体可独立于抗dsDNA抗体单独出现，因而抗核小体抗体与抗dsDNA抗体联合检测，可提高SLE的血清学检出率。40 S亚基60 S亚基P0P1P1P2P2抗原:核糖体60S 亚基中的3种蛋白质:P0, P1, P2. 具备相同的碳端抗原位点核糖体 P蛋白相关疾病: SLE:为SLE的高特异性指标，阳性率为5-15%，常见于神经狼疮。AMA与AMA-M2靶抗原:线粒体亚结构上几种生化性质明确的物质