头孢西丁耐药的葡萄球菌mecA基因检测及耐药性分析

1、百度文库-好好学习，天天向上 头孢西丁耐药的葡萄球菌mecA基因检测及耐药性分析作者：陈颖，宋明胜，周建党，徐令清，伍勇【摘要】目的对头抱西丁纸片扩散法检测耐甲氧西林葡萄球菌(MRS)的可靠性进行评价，并分析头抱西丁耐药的葡萄球菌即MRS感染及耐药性情况，以指导临床合理用药。方法临床分离葡萄球菌310株，以PCR检测葡萄球菌mecA基因为判断MRS的标准，按美国国家临床实验室标准化研究所(CLSI/NCCLS)标准操作规程进行头抱西丁、苯唑西林纸片扩散法(KB法)药敏试验检测MRS，同时检测MRS及甲氧西林敏感葡萄球菌(MSS)对10种常用抗生素的耐药性。结果在310株葡萄球菌中金黄色葡萄球菌

2、198株，凝固酶阴性葡萄球菌112株，经mecA基因检测，耐甲氧西林金黄色葡萄球菌(MRSA)为(113/198)，耐甲氧西林凝固酶阴性葡萄球菌(MRCNS)为(70/112)；头抱西丁纸片扩散法检测MRSA的敏感性和特异性均为100%，检测MRCNS敏感性为%，特异性为100%;除复方新诺明和万古霉素外，MRS对其余8种抗生素的耐药率明显高于MSS，差异具有统计学意义(P&11;。结论头抱西丁纸片扩散法操作简便，结果可靠，可作为临床实验室检测MRS的常规方法；MRS的感染发生率及耐药性较高，且对各类抗生素多重耐药，需加强其耐药性监测。【关键词】头抱西丁；葡萄球菌；耐药性分析；mecA基因葡萄

3、球菌是引起医院感染的常见病原菌，其中耐甲氧西林葡萄球菌(methicillinresistantstaphylococcus,MRS)有逐渐上升的趋势，并具有多重耐药性，所造成的医院感染一直是临床普遍关注的问题。为及时准确地掌握MRS的感染率及耐药率，我们采用PCR方法检测葡萄球菌mecA基因为判断MRS的标准，按照美国国家临床实验室标准化研究所(CLSI/NCCLS)标准操作规程进行头抱西丁、苯唑西林纸片扩散法(KB法)药敏试验检测了310株葡萄球菌，同时检测了其对10种常用抗生素的耐药性，并且进行了统计分析，现将结果报告如下。1材料与方法材料菌株我院2006年1月至2006年6月临床分离葡

4、萄球菌310株,其中金黄色葡萄球菌198株、表皮葡萄球菌47株、腐生葡萄球菌36株、溶血葡萄球菌29株，标准菌株为湖南省临检中心提供的金黄色葡萄球菌ATCC25923。百度文库-好好学习，天天向上百度文库-好好学习，天天向上 一 试剂苯唑西林(0X)、头抱西丁(FOX)、头抱唑啉(CZO)、氨苄西林(AMP)、红霉素(ERY)、克林霉素(CLI)、万古霉素(VA)、复方新诺明(SXT)、阿米卡星(AMK)、利福平(RA)、环丙沙星(CIP)、左氧氟沙星(LVX)纸片以及药敏培养基(MH琼脂)均购自OXOID公司；PCR扩增所需试剂均为上海生工工程公司产品，上游引物P1：5/TGGCTATCGT

5、GTCACAATCG3/,下游引物P2：5/CTGGAACTTGTTGAGCAGAG3，扩增片段为310bp。仪器BioRadicycler荧光定量PCR系统。方法纸片扩散法按CLSI/NCCLS标准操作规程进行，检测各菌株对每种药敏纸片的敏感性，以ATCC25923为标准质控菌株，药敏结果依据CLSI/NCCLS(2006年)判断。mecA基因检测(PCR)模板的制备：将液体培养基中适量的指数生长期细菌(最多可达1X109CFU/mL)，离心后彻底弃净上清液，用上海生工细菌基因组DNA抽提试剂盒提取DNA作为PCR的模板。反应体系：总体积25uL,其中含10XPCRbufferuL、25mm

6、ol/LMg2+uL、10mmol/LdNTPuL、TaqDNA酶、25pmol/L的引物1和引物2各1uL、DNA模板5uL、无菌双蒸水12uL。反应条件：94C5min预变性，94C30s,57C30s,72C100s循环30次，72C延伸5min。扩增时以ATCC25923作为阴性对照。结果判断：5uLPCR产物点入含EB的20g/L琼脂糖凝胶，XTBE为电泳缓冲液，用水平式电泳槽稳压100V，电泳4min，凝胶成像系统观察结果、成像。统计学处理采用WHONET5软件统计葡萄球菌对10种抗生素的耐药率，比较采用软件进行x2检验，以P,MRS对其余8种抗生素的耐药率明显高于MSS，具有统计

7、学意义(P&11;oMRS的多重耐药性除与产生B内酰胺酶有关外,可能还与产生新的内酰胺酶类低亲合力PBP2a改变抗菌药物作百度文库-好好学习，天天向上百度文库-好好学习，天天向上一 一 用靶位、产生修饰酶、膜通透性降低及主动外流泵等机制有关6。因此，准确检测MRS,对于指导临床用药有重要参考意义。快速鉴定出携带mecA基因的MRS，可使临床及时选择治疗有效的药物，迅速控制以多重耐药为特点的MRS所造成的感染，限制其播散。同时，也可以减少抗生素的滥用。总之，根据耐药性的变迁，有计划地将抗生素分期、分批交替使用，可能对减少MRS有一定作用。【参考文献】FrancoisP,PittetD,Bento

8、M,etal.RapiddetectionofmethicillinresistancestaphylococcusaureusdivectlyfromsterileornonsterileclinicalsamplesbyanewmolecularassayJ.JClinMicrobiol,2003,41(1):254260.Performancestandardsforantimicrobialsusceptibilitytesting;fourteenthinformationalsupplementS.NCCLS,2004,M100S14,47.张险峰，王琳.头抱西丁纸片法筛查耐甲氧西林葡萄球菌的评价J.苏州大学学报(医学版)，2008,28(1):142143.杜宗敏，杨瑞馥，郭兆彪，等.金黄色葡萄球菌及其甲氧苯青霉素耐药性的MALDITOFMS鉴定J.分析测试学报，2003,TOC o 1-5 h z22(1):6366.KatayamaY,ZhangHZ,ChambersHF.PBP2amutationsproducingveryhi