药物化学实验：实验六 乙醚注入法制备亚甲基蓝脂质体

1、实验六、乙醚注入法制备亚甲基蓝脂质体HydrophilicHydrophobic一、实验目的:（1）掌握注入法制备脂质体的工艺;（2）熟悉脂质体的形成原理，作用特点；二、基本原理（1）定义：脂质体(liposome): 系指将药物包封于类脂质双分子层内而形成的微型泡囊体。双分子层结构，成分为：磷脂和附加剂（主要为胆固醇）。（2）分类：1.按照所包含类脂质双分子层的层数不同，分为单室脂质体和多室脂质体。小单室脂质体(SUV)：粒径约0.020.08um；大单室脂质体 (LUV）为单层大泡囊，粒径在0.1l um。多层双分子层的泡囊称为多室脂质体 (MIV)，粒径在15um之间。2.按照结构分：单

2、室脂质体，多室脂质体，多囊脂质体。3.按照电荷分：中性脂质体，负电荷脂质体，正电荷脂质体。4.按照性能分：一般脂质体，特殊功效脂质体。（3）制备方法：注入法、薄膜分散法、超声波分散法、逆向蒸发法。（4）质量评价：1、形态、粒径及其分布采用扫描电镜、激光散射法或激光扫描法测定。根据给药途径不同要求其粒径不同。2、包封率和载药量包封率：包封率=（脂质体中包封的药物/脂质体中药物总量）100%载药量：载药量=脂质体中药物量/（脂质体中药物+载体总量）100%3、脂质体的稳定性1)、物理稳定性：主要用渗漏率表示。渗漏率=（放置前介质中药物量放置后介质中的药量）/制剂中药量x100%胆固醇可以加固脂质双

3、分子层膜，降低膜流动，可减小渗漏率。2)、化学稳定性：(1)磷脂氧化指数：氧化指数=A233nm=A215nm；一般规定磷脂氧化指数应小于0.2。(2)磷脂量的测定：基于每个磷脂分子中仅含1个磷原子，采用化学法将样品中磷脂转变为无机磷后测定磷摩尔量（或重量），即可推出磷脂量。4、防止氧化的措施：防止氧化的一般措施有充入氮气，添加抗氧剂-生育酚、金属络合剂等；也可直接采用氢化饱和磷脂。5、脂质体的灭菌：灭菌的一般方法有过滤除菌、无菌操作、射线照射（60钴1520kGy）、121热压灭菌等。三、实验操作（乙醚注入法）处方： 亚甲蓝 2ml 胆固醇 0.15 g注射用大豆卵磷脂 0.45 g 乙醚

4、5 ml磷酸盐缓冲液（PBS） 20 ml制备脂质体 30 ml制备工艺：（1）称取亚甲蓝至30 mlPBS溶液中，保持60水浴搅拌；（2）称取注射用大豆卵磷脂（PL）与胆固醇（CH）至烧杯中，加10 ml乙醚溶解；（3）缓慢将此乙醚溶液滴加至60水浴搅拌的亚甲蓝PBS溶液中，保持水浴温度持续搅拌20 min，再室温下磁力搅拌1.5-2 h，取样镜检（ 400）；3500-4000 rpm离心10 min，弃上清，取沉淀与10 mlPBS（或蒸馏水）重新混合，取样镜检。制备装置水浴：软磷脂的分散常温下：脂质体的形成四、结果：（1）脂质体的显微镜下观察（2）画图，测定脂质体的粒径五、讨论与思考（1）脂质体的优缺点？（2）如何提高脂质体的稳定性？（3）显微镜下微粒粒径的计算方法。六、参考结果：包裹亚甲蓝的脂质体在显微镜下的结果（400）七、参考文献：1. /link?u