无菌药品的概念-无菌药品洁净环境监测-GMP培训讲义课件

1、无菌药品洁净环境监测目录无菌药品概念一二无菌药品洁净环境监测Page 2无菌药品的概念LOGOPage 32010版药典的检验方法3 检验方法接种的培养基培养14天后没有菌生长2结果判定1、无菌药品的定义按照2010版GMP附录1第一条：无菌药品是指法定药品标准中列有无菌检 查项目的制剂和原料药，包括无菌制剂和无菌原料药。2、无菌药品的法定质量标准按照2010版中国药典无菌药品的质量标准（今年执行2015版）1 检验项目无菌检验2010版药典规定的取样法4 取样方法LOGOPage 43、无菌药品VS 无菌检验合格的药品LOGOPage 51批无菌药品无菌检验合格 此批无菌药品的无菌性合格不等

2、于无菌药品 无菌检验1批无菌药品的无菌性合格=此批无菌药品无菌检验合格等于LOGOPage 6检验环境的局限性，目前药典要求万级背景下的100级无菌检验局限性生产人员的水平的局限性洁净室的清洁和消毒无菌药品洁净环境的监测取样数量的局限性，但又不可能100%取样无菌用的培养基灵敏度，硫乙、改良馬丁检验人员的水平的局限性LOGOPage 7无菌药品洁净环境的监测LOGOPage 8环境监测的概念LOGOPage 91、A级洁净区无菌药品的生产和检验悬的A浮级粒洁子净区提供的是一个相对无菌环境，只能 通过微生物计数（监测沉、浮游菌和表面微生物）来证明A级环境中 活的微生物数量。（是定量的，不是定性的

3、（即相对无菌，不是绝对无菌）。2、环境监测的概率环境监测是根据概率原则来判断的。A级洁净区称为无菌环境，即使一个监测点被污染的可能性是很小的，可以接受的（不能用平均数来判断的，监测到微生物必查）。3、环境监测合格（A级生产和检验）的意义不能用环境监测合格来判断1批无菌药品的无菌性合格环境监测不是用于保证无菌药品的无菌或已灭菌。（保证无菌药品的 无菌性是提高培养基模拟无菌灌装、除菌过滤、过热灭菌等）良好的环境监测可以为无菌药品的可以无菌保证提供支持。便携式粒子计数器监测悬浮粒子微生物无菌药品洁净环境监测项目沉降菌浮游菌表面微生物在线连续监测LOGOPage 101、16292医药工业洁净室(区)

4、悬浮粒子的测试方法2、 16293医药工业洁净室(区)浮游菌的测试方法3、 16292医药工业洁净室(区)沉降菌的测试方法国标 的依据2010版GB/T洁净室的分级 ISO14644ISO14644 -1 7 （按粒子划分，静态） 1 空气洁净度等级划分2为认证与连续的相符性的测试和监测技术要求3 计量和测试方法4 7 （略）洁净室的分级 ISO14698ISO14698 -1 3（按微生物划分，静态）1 微生物污染控制（总则）2微生物污染控制（评价与说明）3 微生物污染控制（有微生物污染或生物膜的惰性 表面的清洁与消毒效率的测量方法LOGOPage 111、总则：厂房与设施2、附录1:第三章

5、 洁净度级别与监测GMP依据2010版中国2009版EMEA附件1，第四卷“无菌医药产品的制造”2002版WHO附录6“无菌药品”工业指南-用无菌工艺生产的无菌药品2004版FDALOGOPage 12悬浮粒子监测LOGOPage 13LOGOPage 14GMP洁净度级别悬浮粒子最大允许数/立方米静态动态0.5m5.0m0.5m5.0mCHINA和 EMEAA级352020352020B级3520293520002900C级3520002900352000029000D级352000029000不作规定不作规定WHOA级35000350000B级350003500002000C级350000

6、2000350000020000D级350000020000不作规定不作规定FDA100级(静态)不作规定3520不作规定Page 141000级3520010000级352000100000级3520000不同的GMP对悬浮粒子的要求ISO14644-1对悬浮粒子的浓度的规定LOGOPage 15ISO级别悬浮粒子最大允许数/立方米（N）0.1m0.2m0.3m0.5m1.0m5.0mISO1级102ISO2级10024104ISO3级1000237102358ISO4级100002370102035283ISO5级1000002370010200352083229ISO6级10000002

7、37000102000352008320293ISO7级352000832002930ISO8级352000083200029300ISO9级352000008320000293000中国GMP欧盟GMPWHOFDAGMPISO 洁净级别对比LOGOPage 16中国GMP欧盟GMPWHOFDAGMPISO14644-1A级: 静态A级: 静态A级: 静态100级4.8A级: 动态A级: 动态A级: 动态B级: 静态B级: 静态B级: 静态1000级5、6B级: 动态B级: 动态B级: 动态10000级7C级: 静态C级: 静态C级: 静态C级: 动态C级: 动态C级: 动态100000级8D

8、级: 静态D级: 静态D级: 静态9各标准的综合比较比较点LOGOPage 6中国GMP对非无菌药品的洁净环境，明确规定参考无菌药品D级标准Page 17具体内容1GMP(中国、欧盟、WHO、美国等)对洁净环境的空气悬浮粒子指标，均以 ISO14644为准2各国GMP悬浮粒子指标仅规定0.5微米和5.0微米两个粒子浓度（美国5.0微 米一个粒子浓度）；而ISO14644对悬浮粒子指标规定从0.55.0微米之间粒子浓 度，且将悬浮粒子作为唯一指标3GMP(中国、欧盟、WHO)对无菌药品洁净环境均采用ABCD四个等级与ISO 相应的5级7级8级相对应；FDA对无菌药品洁净环境均采用 1001000

9、10000100000四个等级与ISO相应的5级7级8级相对应4GMP(中国、欧盟、WHO)对无菌药品洁净环境的监测分别有“静态”和“动态” 两种标准（D级悬浮粒子没有动态标准），且规定从“动态”恢复到“静态”的 世界限度（1520分钟后自净）；而FDA对无菌药品洁净环境监测仅有“动态” 一种标准，但建议周期性进行监测5中国GMP与（欧盟、WHO）GMP对无菌药品洁净环境的分级和标准是完全一致静态测试VS动态测试）概念静态测试动态测试依据GB/T16292-2010(悬浮粒子) GB/T16293-2010(浮游菌) GB/T16294-2010(沉降菌） 2010版GMP2010版GMP取样

10、点数目（最少)GB/T16292-2010(悬浮粒子)（1（2）表1最少采样点数目用风险评估确定每个洁净区的取样点数目 用风险评估确定每个洁净区的取样点位臵取样点位臵GB/T16292-2010(悬浮粒子)采样点一般离地面0.8米的高度的 水平面上均匀布臵；采样点多于5点时。也可采用0.81.5米高度的区域内分层布臵，但 每层不少于5点。取样点时间（沉降菌）30分钟4小时标准1、2010版GMP附录1:第三章洁净度级别与监测2、企业制定警戒限度和纠偏限度LOGOPage 18最少采样点数目（GB/T 16292-2010）LOGOPage 19最少采样点数目（企业规定标准）LOGOPage 2

11、0面积（）洁净度级别A 、B级C级D级102221020422204082240100164210020040103注：表中的面积，对于单向流洁净室，指的是送风面积，对于非单向流洁净室，指的是房间面积。在线连续 粒子监测系统悬浮粒子监测便携式 粒子计数器LOGOPage 21悬浮粒子监测（便携式）（静态和动态）比较点具体内容1采样量要符合GMP标准（A级0.5微米，静和动均为20个/立方米），保证至少检测出20个粒子每个采样点每次采样量至少2.83升/分钟（目前有2.83升/分钟、28.3升/ 分钟、50升/分钟和100升/分钟）23GMP标准中A级区至少采样1立方米=1000升（依据SO14

12、644-1依据） 最小采样量（立方米）=20（个）某粒径的限度标准（个/立方米） 如：A级区5微米的标准; 20个/立方米;最小采样量=20个20个/立方米=1立方米洁净级别2.83升/分钟28.3升/分钟50升/分钟100升/分钟A级（1000升）350min35min20min10min其他级别（6.9升）2.44min1min结论：监测A级区，必须用大流量计数器，其他可以用小流量LOGOPage 22便携式粒子计数器LOGOPage 23悬浮粒子连续动态监测原理（等动力采样或等速度采样）LOGOPage 24悬浮粒子连续动态时时监控LOGOPage 25沉降菌浮游菌表面微生物微生物监测项

13、目LOGOPage 26沉LOGOPage 27菌浮菌洁净级别沉降菌（90mm） (cfu/4小时)浮游菌(c降fu/立方米)表面微生物接触碟（90mm）5指手套A级11游11B级51055C级1010025-D级10020050-微生物监测动态标准（2010版GMP）LOG沉降菌浮游菌O微生物监测动态监测风险评估比较点具体内容一依据：第十一条 应当对微生物进行动态监测，评估无菌生产的微生 物状况。监测方法有沉降菌法、定量空气浮游菌采样法和表面取样法（如棉签擦拭法和接触碟法）等。动态取样应当避免对洁净区造成不 良影响。成品批记录的审核应当包括环境监测的结果。二微生物动态监测取样点应考虑以下因素

14、：1、容易遭受微生物污染，很有可能对产品质量造成不良影响2、取样点在实际生产中微生物便于繁殖3、统计学的知识4、取样点不容易清洁和消毒5、 根据取样点的洁净级别6、很有可能污染产品的取样点7、关键洁净区的确认和关键操作点的确认Page 28沉降菌LOGOPage 29浮游菌微生物监测动态监测风险评估的工具具体内容一鱼骨刺图（因果关系图）二风险评估工具1、风险估值（RPN）RPN=严重程度S可能性P可检测性D2、FMEA3、FTA(故障分析)无菌药品灌装A级隔离系统风险点LOGOPage 30无菌药品灌装A级隔离系统示意图LOGOPage 31通过风险评估确定AB微生物动态监测采样点图LOGOP

15、age 32沉降菌沉降菌LOGOPage 33LOGO沉降菌采样点原则序号采样原则一采样点的位臵：1、操作区采样点位臵距离地面在0.81.5m处（略高于操作面）2、如采送风口位臵应离开送风面30cm3、可在关键设备或关键工作区域内增加采样点二最少TSA无菌平皿数三沉降菌TSA平皿暴露时间 1、静态：30min;2、 动态：4小时（不是绝对的）3、如同一位臵使用多个平皿进行监测并累计计数，单个沉降 平皿的暴露时间可以少于4小时洁净级别Page 34最少TSA无菌平皿数A级14B级2C级2D级2浮游菌LOGOPage 35浮游菌采样点原则序号采样原则一采样点的位臵：1、操作区采样点位臵距离地面在0

16、.81.5m处（略高于操作面）2、如采送风口位臵应离开送风面30cm3、可在关键设备或关键工作区域内增加采样点二最少采样量（L）LOGOPage 36洁净级别最少采样量（L）AB级1000C级500D级100沉降菌表面微生物表面LOGOPage 37表面微生物采样点原则LOGOPage 38采样对象序号采样对象采样原则1操作人员洁净服表面口罩、胸前、袖口、肘部、膝盖2关键设备关键部位表面与产品接触3墙表面距离地面在0.81.5m处4地表面房间中央，人员活动频繁处5A级隔离器表面靠近灌装处6手套（五指）表面A、B级操作人员表面微生物采样点示意图LOGOPage 39LOGO空气净化系统监测计划洁

17、 净 区 监 测 和 验 证年度洁净级别确认日常环境监测动态监测静态监测无菌洁净区BC级、D级区无菌洁净区A/BC级、D级区Page 40环境监测结果鉴别（以微生物鉴别）LOGOPage 41鉴别项目内容鉴别目的1、积累数据，用于偏差调查和趋势分析2、提供动态监测评价的依据鉴别程度1、根据生产工艺而定2、根据检出微生物污染的洁净区的级别而定鉴别方法1、表型鉴别1.1 肉眼观察（计数、鉴别是细菌还是霉菌） 1.2革兰氏染色（球菌是还是杆菌或芽胞菌） 1.3生化反应2、遗传性鉴别（FDA指南中对微生物鉴别的要求)遗传性鉴别比表型鉴别更精确和准确尤其适用无菌药品无菌试验检查不合格原因的调查微生物表型

18、鉴别所用仪器LOGOPage 42微生物遗传学鉴别所用仪器LOGOPage 43洁净环境监测的趋势分析（以B级洁净区为例）LOGOPage 440.5m趋势图监测状态监测日期静7月11日静7月19日静7月29日动8月5日静8月12日动8月18日静8月25日静8月31日动9月9日静9月18日动9月22日静10月4日动10月13日静10月20日动10月27日静11月3日动11月10日静11月17日动11月25日静12月1日动12月7日动12月16日静12月22日050000100000150000200000250000300000350000400000悬浮粒子数监测状态和监测日期B级洁净区0.

19、5微米悬浮粒子监测趋势图1211 缓冲室1212 更无菌 外衣室1213 人流 气闸1214 压盖室1215 铝盖灭 菌后室1210 灭菌 后室1209 灌装室1206 物流 气闸1203 人流 气闸1202 更无菌外衣室LOGOPage 455.0m趋势图02000400060008000100001200014000监测静 静 静 动 静 动 静 静 动 静 动 静 动 静 动 静 动 静 动 静 动 动 静11 19 29 5 日 12日 日 日日18 25 31 9 日 18日 日 日日 日 日监 7月 7月 7月 8月 8月 8月 8月 8月 9月 9月 9月 10 10测 日期22

20、 月 4 月10 10 11 11月 月 月 3 月13 20日 日11 11 12 12 12 12月 月 月 1 月 7 月 月27 日 10 17 25 日 日 16 22日日 日 日日 日悬浮粒子数监测状态和监测日期B级洁净区5.0微米悬浮粒子监测趋势图1211 缓冲室1212 更无菌 外衣室1213 人流气闸1214 压盖室1215 铝盖灭菌后室1210 灭菌后室1209 灌装室1206 物流气闸 1203 人流 气闸LOGOPage 46沉降菌趋势图2103456静静静动静动静7月 7月 7月 8月5 8月 8月 8月静动静8月 9月9 9月动静动静动静动静动9月 10月 10月

21、10月 10月 11月 11月 11月 11月沉降菌数11日 19日 29日 日 12日 18日 25日 31日 日 18日 22日 4日 13日 20日 27日 3日 10日 17日 25日监测状态和监测日期B级洁净区沉降菌监测趋势图 1211 缓冲室1212 更无菌外衣室1213 人流气闸 1214 压盖室1215 铝盖灭菌后室1210 灭菌后室1209 灌装室1206 物流气闸1203 人流气闸1202 更无菌外衣室1201 手消毒室 1216 卡式瓶暂存室 警戒限度纠偏限度LOGOPage 47浮游菌趋势图024681012监测状态静 静 静 动 静 动静静 动 静 动 静 动 静 动

22、 静 动 静 动监测 7月 7月 7月日期 11日 19日 29日8月5 8月 8月 8月 8月 9月9 9月 9月 10月 10月 10月 10月 11月 11月 11月 11月日 12日 18日 25日 31日 日 18日 22日 4日 13日 20日 27日 3日 10日 17日 25日浮游菌数监测状态和监测日期B级洁净区浮游菌监测趋势图 1211 缓冲室1212 更无菌外衣室1213 人流气闸1214 压盖室1215 铝盖灭菌后室1210 灭菌后室1209 灌装室1206 物流气闸1203 人流气闸1202 更无菌外衣室1201 手消毒室1216 卡式瓶暂存室警戒限度 纠偏限度 GMP

23、标准LOGOPage 48无菌药品洁净环境污染微生物原因调查（调查B级洁净区污染的微生物）LOGOPage 49悬浮粒子LOGOPage 50出：通过上述对B级洁净区沉降菌和浮游菌的监测趋势分析图，可以看1、通过监测趋势分析图，可以直接观察出不同B级洁净区污染微生 物的趋势，在趋势图中标出GMP标准、纠偏限度和警戒限度。2、通过趋势图，可以客观地反应洁净区运行和维护状态，有利于 提前发现潜在的风险和偏差，及时寻找污染微生物的原因并采取相应 措施，避免洁净环境质量进一步恶化。3、从上述监测趋势分析图可以发现：人流气闸、物流气闸和更B级无菌衣室的微生物数量虽然符合GMP 标准且低于纠偏限度和警戒限度，但比其余B级洁净室的微生物数量多，也应对微生物进行表型和遗传型鉴别（以表型鉴别为例）。4、通过对B级洁净室污染微生物，采用表型鉴别，经分析，污染的 是革兰氏阳性球菌（ 简写G+C）悬浮粒子革兰氏阳性球菌在油镜下观察LOGOPage 51B级洁净区污染革兰氏阳性球菌原因1、悬浮粒子污染2、微生物的污染3、残留物污染1、空气2、水3、人员4、表面LOGOPage 521、原辅料2、包装材料3、设备及容器4、生产过程5、人员6、环境7、更衣程序控制B级洁净区污染微生物措施1、针对所有进入 A/B级洁净区人员 进行连续3次的更 衣程序的确认，均 合格方可进入2、针对