原料中非蛋白氮的检测课件

1、原料中非蛋白氮的检测1. 器皿和设备1.1 立体显微镜1.2 实验室用粉碎机1.3 PH计1.4 漩涡混合器1.5 45 目筛1.6 试管1.7 培养皿1.8 滴管1.9 点滴板1.10 常规化验设备和玻璃器皿2. 化学试剂2.1 尿素酶，Merck # 1.08489.00005(或等效)2.2 溴百里香酚兰，分析纯2.3 氢氧化钠，分析纯2.4 盐酸 37%，分析纯2.5 二苯胺，分析纯2.6 Chromotropic acid(C10H6O8S2Na2)，分析纯2.7 硫酸 98%，分析纯2.8 碘化钾，分析纯2.9 氯化汞，分析纯2.10 石油醚，分析纯2.11 无水乙醇，分析纯2.1

2、2 三聚氰酸，分析纯2.13 尿素，分析纯2.14 硝酸钾，分析纯2.15 氯化铵，分析纯2.16 三聚氰胺，分析纯2.17 生物蛋白精 ESB2.18 尿醛聚合物2.19 蒸馏水3. 试剂准备3.1 0.4尿素酶 取 0.4g 尿素酶溶于 100ml 蒸馏水中，放在冰箱里保存。3.2 0.1的溴百里酚蓝 取 0.1g 溴百里酚蓝溶于1.6ml 0.1N NaOH(NaOH 0.4g 溶于 100ml 水)，混匀，用蒸馏水定容到 100 ml，用 0.1N HCL(量取 0.88ml HCL加入到 100ml 蒸馏水中)标定PH 2.32.4，之后将溶液转入棕色玻璃试剂瓶，放在冰箱里保存。3.

3、3 0.5二苯胺 取 0.5g 二苯胺，倒入 20ml 蒸馏水，再慢慢加入 80ml 硫酸混匀即可。3.4 0.5的变色酸 取 0.5g 变色酸，倒入 100ml 硫酸中，搅匀即可。3.5 20% NaOH 取 20g NaOH溶于蒸馏水里，然后定容到 100 毫升，混匀，室温保存。 3.6 奈斯勒试剂 3.5g KI加入 1.25g HgCl2 加入 80ml 蒸馏水，搅拌，加 12g NaOH ，用蒸馏水定容到 100ml，用滤纸过滤溶液，将滤液保存到棕色玻璃试剂瓶中。 3.7 75% H2SO4 缓慢将 25ml 浓硫酸注入 25ml 蒸馏水中，混匀，室温保存。3.8 40% 乙醇 将

4、40ml 乙醇与 60ml 蒸馏水混匀，室温保存。3.9 饱和三聚氰酸溶液 取 1g 三聚氰酸溶于 100ml 80蒸馏水中，混匀，室温保存。3.10 参照物准备3.10 参照物准备 通过将几种非蛋白氮化学药品混合到原料中制备非蛋白氮的参照物，按参照物样品重量为100克计算。非蛋白氮类型化学药品化学药品重量(克)0.1%NPN0.25%NPN0.5%NPN1.0%NPN尿素尿素0.1g0.25g0.5g1.0gNO-3K NO30.16g0.4g0.8g1.6gNH+4NH4Cl0.3g0.74g1.49g2.97g尿醛聚合物尿醛聚合物0.1g0.25g0.5g1.0gESB生物蛋白精ESB生

5、物蛋白精0.1g0.25g0.5g1.0g三聚氰胺三聚氰胺0.1g0.25g0.5g1.0g为了使样品结果有效，NPN参照样品必须和待测样品一起检测。 4. 检测步骤 检测方法包括对尿素、铵盐、硝酸盐/亚硝酸盐、尿醛聚合物、生物蛋白精和三聚氰胺的检测。如果样品在检测前需要脱脂，下面有两种脱脂方法。 常规脱脂 快速脱脂 样品放在滤纸里包裹好 将样品放在大烧杯中 加入石油醚没过样品 用石油醚浸泡 搅动15分钟 用滤纸过滤收集脱脂样品 等待2-3小时 取出滤纸包放到通风橱风干 样品放到通风橱风干 称取2克样品+10ml蒸馏水静置10分钟尿素检测铵盐检测硝酸盐检测搅拌、混匀10-15秒取上清液检测非蛋

6、白氮4.1 尿素/铵盐/硝酸盐取上清液检测非蛋白氮静置10分钟取上清液 6-8 滴在点滴板尿素检测加0.1%溴百里香酚兰2-3滴，0.4%尿素酶4-5滴。结果：蓝色铵盐检测硝酸盐检测加2-3滴奈氏勒试剂结果：深橘红色变灰加0.5%二苯胺2-3滴结果：中间出现兰黑色取上清液 6-8 滴在点滴板取上清液6-8滴在点滴板判定最低限0.25%判定最低限0.05%判定最低限0.1%4.2 尿醛聚合物 有两种方法判断尿醛聚合物。4.2.1 方法1 范围：适合于动物类产品和植物类产品。 脱脂后的动物类产品(植物类产品不必脱脂) 用45目筛筛得细粉部分和粗粉部分 取6-8滴0.5%变色酸于点滴板上 取少量筛得

7、的细粉于0.5%变色酸的点滴板上 结果：5-10分钟内出现紫罗兰色判定最低限 0.15%4.2.2 方法2 范围：仅适用于动物类产品。 取3g样品于50ml具塞离心管里 加35ml煮沸的20%NaOH溶液 漩涡混匀后，放置5分钟 将上清液倒掉，留取下沉物 加35ml蒸馏水 混匀，放置5分钟 倒掉上清液 用蒸馏水洗涤下沉物3-4次，直至洗涤液透明 下沉物用蒸馏水转移到10ml试管中 加1ml0.5%变色酸，混合后观察颜色 如果颜色不明显可以再加1ml0.5%变色酸，混合后观察颜色 结果：呈现紫罗兰色判定最低限 0.25%4.3 ESB生物蛋白精检测 范围：适用于动物类产品和植物类产品 用45目筛

8、筛得细粉部分和粗粉部分 取一些筛下细粉放到点滴板上 滴0.5%二苯胺覆盖在样品上 在显微镜下观察结果 结果：表面漂浮灰白色或浅蓝色小点 判定最低限0.1%4.4 三聚氰胺检测 有两种方法判定三聚氰胺。4.4.1 方法1 (0.5%二苯胺/奈斯勒方法) 用45目筛筛得细粉部分和粗粉部分 取一些筛下细粉放到点滴板上 滴0.5%二苯胺覆盖在样品上 在显微镜下观察三聚氰胺为明显的晶体 确认结果后继续下面操作 从脱脂后的筛下细粉里挑出怀疑部分 加2滴75%硫酸，等待1分钟 加5滴奈斯勒试剂，等待3-5分钟 显微镜下观察 结果：白色部分呈橘红色判定最低限 0.05%4.4.2 方法2 (三聚氰酸法) 适合于动物类产品 适合于植物类产品 取 4g 脱脂样品 取 5g 样品用45目筛筛得细粉部分放到具塞离心管 用45目筛筛得细粉部分放到试管里 加 40ml 40%乙醇 用三氯甲烷浮选 盖上盖在振荡机上以 150转/分振荡 5分钟 弃去上清液和三氯甲烷，将沉淀风干或烘干 以3000转/分离心 5分钟 室温