细菌鉴定的总体思路课件(PPT 57页)

1、临床常见细菌鉴定的思路检验科 张诗海第1页，共57页。细菌鉴定的指南一、培养特性 1、温度 2、气体 3、营养要求 4、PH 5、湿度第2页，共57页。细菌鉴定的指南二、生长特性 1、生长速度 2、菌落特征 3、液体培养基的生长特性三、细菌的形态与染色四、生理及生化特性五、血清学诊断六、致病性试验：动物接种第3页，共57页。细菌的分类及鉴定步骤细菌的分类单位 由高到低 分7个层次， 界 门 纲 目 科 属 种有的种还分血清型（如沙门菌及志贺菌等）和生物型（如流感、副流感嗜血杆菌1-8生物型等）还有噬菌体分型（如伤寒沙门菌、铜绿等）。第4页，共57页。细菌鉴定步骤1、首先必须分离有单个菌落的纯培

2、养2、革兰氏染色，先确定是G-b，G+b，G+c，G-c3、如为G-b，G-c先做氧化酶试验，如为G+c或G+b先做触酶，根据结果，选择最少几项关键性鉴定试验。第5页，共57页。 G+c(动力、触酶、O/F)w/- F + O/- + F+/- - F微球菌气球菌链球菌葡萄球菌第6页，共57页。革兰阳性球菌之葡萄球菌一、革兰阳性球菌，排列成葡萄状，触酶（+） ：首先做血浆凝固酶试验、甘露醇、尿素及对新生霉素的敏感性，如果确定不了，再加做麦芽糖、蔗糖、蕈糖、木糖、硝酸盐，同时结合菌落颜色和溶血情况。第7页，共57页。几种常见葡萄球菌的鉴定 凝固酶 甘露醇 尿素 新生金葡 + + - S中间 +

3、- - S表皮 - - d S腐生 - + + R溶血 - d - S第8页，共57页。革兰阳性球菌之链球菌 二、革兰阳性球菌，排列成链状，触酶（-） ： 根据溶血情况， 先做七叶苷 6.5%NaCl 肉汤。溶血： 1、 - - 沉淀生长，加做杆菌肽S为化脓性链球菌 2、 - - 微混，加做CAMP+为B群链球菌（无乳链球菌） 3、 - - 沉淀生长，加做杆菌肽R，为溶血性链球 菌（非A、B） 4、 + 沉淀生长，加做杆菌肽R，为咽峡链球菌（草链中的一种）第9页，共57页。革兰阳性球菌之链球菌 溶血： 1、 -或+ - 沉淀生长，为草链 2、 - - 混浊生长，加做胆汁溶菌试验+，菊糖+， O

4、ptochin S，为肺炎链球菌不溶血或 溶血： 1、 + - 混浊生长，为D群链球菌 2、 + + 混浊生长，为肠球菌第10页，共57页。革兰阳性球菌如D群链球菌和肠球菌要进一步鉴定：D群链球菌 乳糖 + -牛链 马肠链 肠球菌 山梨醇 + - 棉子糖 甘露醇 + - + -粪肠球 禽肠球 屎肠球 坚忍肠球第11页，共57页。革兰阳性球菌之绿色气球菌绿色气球菌是一种条件致病菌，它可引创面感染、败血症等。绿色气球菌在血平板上生长灰色、光滑、有 溶血的菌落。革兰染色为G+C，排列呈四联状。绿色气球菌生化反应 试验 +% 试验 +% 试验 +% 触酶* 0 麦芽糖 100 阿拉伯糖 48 硝还*

5、0 蔗糖 100 棉子糖 19 七叶苷 * 100 乳糖 90 木糖 10 6.5%NaCl * 100 果糖 100 山梨醇 0 葡萄糖* 100 蕈糖 90 甘露醇* 86 水杨苷 76 *为确诊试验第12页，共57页。革兰阳性球菌之溶血孪生球菌本菌染色多变，可以染成阴性，呈单个或成双、短链排列。血板上35度培养24h形成较大的菌落，呈水滴状，易融合生长，48h后菌落周围出现宽大的透明溶血环，有自溶现象，类似肺炎链球菌的菌落。肉汤培养中呈混浊生长，6.5%高盐肉汤中能生长。生化反应：触酶-，氧化酶-，分解葡萄糖、果糖；不分解乳、麦、菊、蔗、阿拉伯糖、甘露醇、卫矛醇；七叶苷-，靛基质-。对青

6、、氯霉素敏感，对丁胺卡那耐药。第13页，共57页。革兰阳性球菌之马红球菌马红球菌是马、猪和牛的致病菌，近来发现本菌也可引起艾滋病、血液病和肾移植病人的肺部感染。 本菌为革兰阳性无动力杆菌，为多形态，有时呈杆状， 有时呈球状。在血平板上35 24-48h，可长出淡桔红色 到粉红色的粘液样大菌落，不溶血。 生化反应：触酶+，氧化酶-，硝还+，靛基质-，枸盐-， 明胶酶-，脲酶不定，不分解糖类，可形成类CAMP样 反应。第14页，共57页。 G-c(触酶、氧化酶、 O/F)+o脑膜炎奈瑟氏菌淋病奈瑟氏菌其他奈瑟菌布兰汉菌属金黄色奈瑟菌第15页，共57页。革兰阴性双球菌氧化酶+ 脑膜炎 卡他布 淋病

7、双球菌 兰汉菌 奈瑟菌葡萄糖 + - +麦芽糖 + - -硝还 - + -DNA酶 +第16页，共57页。 G-b(动力、氧化酶、触酶、O/F)-+- 莫拉菌属+- -+fw- -+- +0/f -+f +F -+O/- -F + +-+- 嗜血杆菌黄色杆菌莫拉菌属假单胞菌巴斯德菌弧菌属不动杆菌产碱杆菌军团菌属弯曲杆菌属邻单胞气单胞+/-F肠杆菌科第17页，共57页。革兰阴性杆菌之嗜血杆菌嗜血杆菌为G-小杆菌，在巧克力平板上生长灰色、透明的小菌落，似露滴状，有时呈球杆菌，有时呈丝状，一般情况下在血平板上不生长。 氧化酶（弱+），在血平板和MH上同时做卫星试验， 两种平板上均阳性，为副流杆菌嗜血

8、杆菌，血平板上 阳性、MH上阴性，为流感嗜血杆菌。 注：杜克嗜血杆菌是软性下疳的病原菌，72h后才生长 细小的菌落，阴道分泌物培养时要注意。第18页，共57页。革兰阴性杆菌手工鉴定的主要生化试验涂片为革兰阴性杆菌，做氧化酶试验。 1、氧化酶- 做全套生化 克氏双糖、尿素、苯丙氨酸、葡萄糖酸盐、 葡萄糖、甘露醇、IMViC、硝酸盐第19页，共57页。革兰阴性杆菌手工鉴定的主要生化试验致病性大肠埃希菌 克氏双糖、苯丙氨酸、葡萄糖酸盐、甘露醇、IMViC、山梨醇。 迁徙生长，可能为变形杆菌 克氏双糖、尿素、苯丙氨 酸、葡萄糖酸盐、甘露醇、靛基质、麦芽糖。 灰凸的菌落，染色为典型的阴性球杆菌 克氏双糖

9、、葡 萄糖、甘露醇、靛基质、枸橼酸盐、硝酸盐、丙二酸盐 、42。 灰黄色菌落 可能为嗜麦芽窄食假单胞菌 同氧化酶+ 生化试验。第20页，共57页。革兰阴性杆菌手工鉴定的主要生化试验 2、氧化酶+全套生化 克氏双糖、葡萄糖、甘露醇、靛基质、枸橼酸盐、硝酸盐、七叶苷、乙酰胺。可疑气单胞菌 克氏双糖、葡萄糖、甘露醇、靛基质、枸橼酸盐、硝酸盐、七叶苷、赖氨酸、蔗糖、VP（25）。可疑弧菌 同气单胞菌生化试验，另加不同浓度的NaCl。第21页，共57页。肠杆菌科 肠杆菌科为一大群革兰阴性杆菌，氧化酶阴性.多数菌种为周毛菌，能运动，少数无鞭毛，不能运动。绝大多数菌种在普通营养琼脂上生长良好。发酵葡萄糖，还

10、原硝酸盐。临床常见的10多个菌属，30多个种。 第22页，共57页。肠杆菌科与其他科细菌的区别 试验 肠杆菌科 弧菌科 非发酵菌葡萄糖发酵 F F O/-氧化酶 - + +*形态 杆状 弧形或杆状态 杆状鞭毛 周毛或无 单毛 单毛、丛毛、 周毛或无* 不动杆菌和嗜麦芽窄食假单胞菌除外。第23页，共57页。肠杆菌科的初步分类 肠杆菌科初步分类菌属 苯丙氨酸 葡萄糖酸盐埃希菌属 志贺菌属 沙门菌属 枸橼酸杆菌属 爱德华菌属 耶尔森菌属 克雷伯菌属 + 肠杆菌属 +沙雷菌属 +哈夫尼亚菌属 +变形杆菌属 + 摩根菌属 + 普罗维登斯菌属 + 第24页，共57页。苯丙氨酸、葡萄糖酸盐阴性各菌属的鉴别

11、枸橼酸 爱德华 结肠试验 埃希菌属 志贺菌属 沙门菌属 杆菌属 菌属 耶尔森菌动力 +/- - + + + -*硫化氢 - - +/- +/- + -靛基质 + -/+ - -/+ + -/+枸橼酸盐 - - +/- + - -脲酶 - - - -/+ - +/-赖氨酸 +/- - +/- - - +/-*25-30培养动力+ 第25页，共57页。葡萄糖酸盐阳性各菌属的鉴别 试验 克雷伯菌属 肠杆菌属 沙雷菌属 哈夫尼亚菌属动力 - + + +山梨醇 + +/- + -DNase - - + -明胶酶 - - + -第26页，共57页。苯丙氨酸阳性各菌属的鉴别 试验 变形杆菌属 摩根菌属 普罗

12、维登斯菌属硫化氢 + - -枸橼酸盐 +/- - +/-鸟氨酸 +/- + -第27页，共57页。大肠埃希菌与其他3种埃希菌的鉴别 黄色素 吲哚 乳糖 山梨醇 戊五醇大肠埃希菌 - + + + -弗格森埃希菌 - + - - +赫曼尼埃希菌 + + d - -伤口埃希菌 d - -/+ - -第28页，共57页。志贺菌属的生化反应 试验 反应 试验 反应葡萄糖产气 -* 吲哚 d乳糖 -* 甲基红 +蔗糖 - VP -甘露醇 +/- 枸橼酸盐 -卫矛醇 - 丙二酸盐 -肌醇 - KCN -水杨苷 - 明胶酶 -硫化氢 - 赖氨酸 -脲酶 - 动力 -*福氏6型某些生物型、鲍氏志贺菌13、14型

13、可产生少量气体。*宋内志贺菌可迟缓发酵乳糖第29页，共57页。志贺菌属的血清反应本菌属仅有菌体（O）抗原，而无鞭毛（H）抗原。某些菌株在新分离时，有表面（K）抗原，可阻止O抗原与相应诊断血清发生凝集反应。K抗原不耐热，加热10060min即可破坏，而O抗原为多糖复合物，耐热，加热后不被破坏，仍可与特异性抗血清凝集。根据生化反应和O抗原之不同，可将志贺菌属分为四个血清群。 A群 即痢疾志贺菌，均有K抗原，国内仅发现1、2型。 B群 福氏志贺菌， C群 鲍氏志贺菌， D群 宋内志贺菌，仅1个血清型。第30页，共57页。沙门菌属的生化反应 试验 反应 试验 反应葡萄糖产气 +* 吲哚 -乳糖 - 甲

14、基红 +蔗糖 - VP -甘露醇 + 枸橼酸盐 +/-麦芽糖 + 丙二酸盐 -鼠李糖 + KCN -水杨苷 - 明胶酶 -硫化氢 +* 赖氨酸 +*脲酶 - 动力 +*伤寒沙门菌不产气 *鸡沙门菌和雏沙门菌无动力*甲型副伤寒沙门菌赖氨酸、硫化氢均为阴性。 第31页，共57页。枸橼酸杆菌属的鉴别 菌种 硫化氢 吲哚 侧金盏花醇 丙二酸盐弗劳地枸橼杆菌 + - - -/+异型枸橼酸杆菌 - + + +丙二酸盐阴性枸橼酸杆菌 - + - -第32页，共57页。爱德华菌属爱德华菌属有3个菌种，只有迟缓爱德华菌有临床意义，可引起腹泻、伤口感染和败血症。生化特性是发酵葡萄糖产酸产气，不分解甘露醇、乳糖，产

15、硫化氢，IMViC为+-。动力+，赖氨酸、鸟氨酸+，精氨酸-。 第33页，共57页。耶尔森菌属 耶尔森菌属包括11个菌种，其中最重要的为3个菌种。3种耶尔森菌的生化鉴别菌种 动力 VP 吲哚 脲酶 山梨醇 鸟氨酸鼠疫耶尔森菌 25- - - d - - 35- -假结核耶尔森菌 25d - - + - - 35- -小肠结肠炎耶尔森菌 25+ +/- d +/- + + 35- -第34页，共57页。7种克雷伯菌属种间的主要鉴别 菌种 吲哚 甲基红 VP 枸盐 丙二 鸟氨酸 42 4肺炎克雷伯菌 - - + + + - + -产酸克雷伯菌 + -/+ + + + - + -臭鼻克雷伯菌 - +

16、 - -/+ - - + -鼻硬结克雷伯菌 - + - - + - + -解鸟氨酸克雷伯菌 + + +/- + + + + +植生克雷伯菌 -/+ + + + + - + +土生克雷伯菌 - d + d + -/+ - + 第35页，共57页。4种肠杆菌种间生化反应鉴别 菌种 山梨醇 脲酶 赖氨酸 精氨酸阴沟肠杆菌 + +/- - +产气肠杆菌 + - + -格高菲肠杆菌 - + + -坂崎肠杆菌 - - - +第36页，共57页。3种沙雷菌的生化鉴别 试验 粘质沙雷菌 液化沙雷菌 深红色沙雷菌阿拉伯糖 - + +棉子糖 - + +木糖 - + +乳糖 - - +山梨醇 + + -丙二酸盐 -

17、 - +鸟氨酸 + + - 第37页，共57页。3种变形杆菌的鉴别 菌种 吲哚 麦芽糖 鸟氨酸脱羧酶 普通变形杆菌 + + -奇异变形杆菌 - - +潘氏变形杆菌 - + - 第38页，共57页。3种普罗威登斯菌的生化鉴别 菌种 脲酶 甘露醇 侧金盏花醇 鼠李糖雷极普罗威登斯菌 + + + +/-斯图普罗威登斯菌 -/+ - - -产碱普罗威登斯菌 - - + - 第39页，共57页。摩根菌属 摩根菌属只有一个菌种，即摩根摩根菌，生化反应不活泼，发酵葡萄糖产酸，脲酶阳性，IMViC+-，苯丙、鸟氨酸+，赖氨酸、精氨酸-。 第40页，共57页。非发酵菌的初步鉴定1、氧化酶试验2、葡萄糖发酵试验3

18、、动力及鞭毛4、色素5、还原硝酸盐及产N2第41页，共57页。几种非发酵菌与弧菌科菌的鉴别 血平板 氧化酶 克氏 葡糖 甘 动力 靛 枸 硝 七 乙 明胶铜绿 灰绿，溶血 + -/- （O） - + - + + - + +嗜麦芽 灰黄色 - -/- （O） - + - + +/- + - + 腐败 红棕色 + -/-H2S （O） - + - - +/- - - +恶臭 灰白色 + -/- （O） - + - +/- - - - -荧光 灰色 + -/- （O） - + - + -/+ - - +洋葱 黄色（多B R）（+)/- -/- （O） - + - +/- -/+ +/- +/- +/

19、-产碱 灰色，溶血 + -/- （O)/- - + - + -/+ - -/+ -不动 灰白色 - -/- （O)/- - - - +/- - - - -/+莫拉 灰色 + -/- - - - - - +/- ND ND -/+黄杆菌 黄色 + -/- （F)/- - - (+)/- + -/+ +/- +/-黄单胞 黄色 + -/- （O)/- - + - (+)/- - +/- +/-气单胞 暗灰绿，溶血 + -/+ F + + + -/+ + +/- ND +邻单胞 灰白或灰色 + -/+ F - + + - + - ND -注：（O）：弱阳性； O：氧化型； F：发酵型； ND：无资料

20、第42页，共57页。非发酵菌之不动杆菌属不动杆菌属菌为革兰阴性球杆菌，氧化酶-，触酶+，靛基质-，甘露醇- ，动力- ，硝还- 。不动杆菌属6个种的生化特性 醋酸钙 鲍曼 溶血 琼氏 约翰逊洛菲生长于:44 - + - - - - 41 - + - + - - 37 + + + + - +明胶 - - + - - -溶血 - - + - - -枸橼酸盐 + + + +/- + -丙二酸盐 + + - - -/+ -葡萄糖 + + +/- - - -木糖 - + +/- - - -乳糖 + + - + + -第43页，共57页。非发酵菌之黄杆菌属 黄杆菌属为革兰阴性杆菌，氧化酶+，触酶+，动力-

21、 ，菌落产黄色素。 临床常见黄杆菌的生化反应 脑膜败血 芳香 短小吲哚 +* - +*硝酸盐还原 - - -ONPG + - -DNA水解 + + +七叶苷水解 + - -明胶酶 + + + 尿素酶 - + -/+枸橼酸盐 - - - *:量很少，要用二甲苯提取后才能测出 第44页，共57页。弧菌科 氧化酶+，发酵葡萄糖。 弧菌科3个菌属的鉴别 气单胞菌属 邻单胞菌属 弧菌属甘露醇 + - +/-鸟氨酸 - + +/-精氨酸 +/- + +/-嗜盐性 - - +/-第45页，共57页。致病弧菌的生化特性 试验 霍乱 拟态 副溶血 创伤 溶藻 河流靛基质 + + + + +/- -V-P +/-

22、 - - - + - 西蒙枸橼酸盐 +/- +/- + + +/- + 葡萄糖产气 - - - - - - 蔗糖 + - - - + +甘露醇 + + + +/- + +阿拉伯糖 - - + - - +水杨苷 - - - + - -硝酸盐还原 + + + + + +赖氨酸脱羧酶 + + + + + - 鸟氨酸脱羧酶 + + + + +/- -精氨酸双水解酶 - - - - - +0g/L NaCl + + - - - -30.0g/L NaCl + + + + + +60.0g/L NaCl - - + +/- + +100.0g/L NaCl - - - - + -第46页，共57页。7种嗜

23、温气单胞菌生化特性 亲水 豚鼠温和维隆舒伯特简达易损葡萄糖产气 + - + + - + +V-P(25) + - + + V + -七叶苷/水杨素 + + - + - - -甘露醇/靛基质 + + + + - - +蔗糖 + + + + - - -纤维二糖 - +/- +/- + - - +精氨酸双水解酶 + + + - + + +赖氨酸脱羧酶 + - + + + + +鸟氨酸脱羧酶 - - - + - - -第47页，共57页。 G+b(动力、触酶、O/F)动力、触酶、O/F动力 、溶血、菌落丹毒死丝菌属乳杆菌属棒状杆菌属李斯特菌属库特菌属罗氏菌属奴卡菌属芽孢-+炭疽芽孢杆菌第48页，共57页。第49页，共57页。革兰阳性杆菌之奴卡菌属奴卡氏菌:革兰阳性杆状、球杆状，不同种类可产生不同的色素，如橙红、粉红、黄、黄绿、紫及其他颜色，有皱褶，颗粒状。抗酸染色呈弱阳性，主要是星形奴卡菌和巴西奴卡菌。第50页，共57页。奴卡菌的生化特性 星形 巴西 豚鼠明胶 - + -50 8h + - +七叶苷 - + +枸橼酸 V + -尿素 + +