[医药卫生]版无菌、微生物限度检查法课件

1、2010年版药典附录无菌检查和微生 物限度检查方法增修定内容 泰州药品检验所 季大伟 起草的指导思想一、以科学发展观为统领，服务于资源节约型社会、环境友好型社会的要求；落实科学监管理念，着力解决发展中的问题。二、与时俱进，广泛吸纳先进技术与成果；坚持自主与创新；积极推进药品标准化战略，提高我国药品标准总体水平，着力提升中国药典在国际社会中的地位和作用，提高综合竞争力，促进医药产业的健康发展，为构建社会主义和谐社会作出贡献。2010版药典无菌检查法主要增修订内容国内外药典微生物学检验 发展的宗旨： 提高方法捡出率、保证检验结果的准确性、可靠性。 1、 实验环境、设施的发展； 2、 培养基的品种和

2、适用性要求； 3、 检验数量、检验量符合统计学要求； 4、 检验方法和仪器的改进 （薄膜过滤法、全封闭过滤培养器） 5、 验证试验；（ICH、USP、EP、BP、JP均有规定） 6、 培养时间； 7、 结果 的分析和判断等。 回顾国际无菌检查法发展历史 1925年 直接接种法首先使用在英国1932年 英国药典推荐使用无菌测试1936年 美国药典第十一章首先引用单个培养基的直接接种法1950年 美国药典第十六章推荐使用FTG和SB两种培养基分别 培养需、厌气 菌和真菌1957年 美国FDA和MILLIPORE公司介绍膜过滤法用于抗生素无菌测试1963年 英国药典63版收载薄膜过滤法无菌测试196

3、5年 美国药典引用薄膜过滤法用于非抑菌性药品的无菌测试1971年 欧洲药典第二版公布参照薄膜过滤法无菌测试1978年 欧洲药典修订版发行公布推荐使用薄膜过滤法无菌测试1988年 美国FDA规定：假如第一次无菌检查不符合规定的样品不再复试，这 一批次的药品应报废。实际上排除了药品无菌阳性后再测试的机会1998年 英国药典1998无菌测试以一次检出为准，取消复试。2000年 美国药典24版无菌测试以一次检出为准，取消复试。 检视我国历版药典无菌检查法发展历史 1953版 实验环境仅要求为半无菌操作箱；仅收载一种直接接种法； 用一种培养基检查1963版 仅一种直接接种法；用三种培养基分别培养细菌和霉

4、菌1977版 开始收载薄膜过滤法（简单装置），用二种培养基分别培 养细菌和霉菌1985版 收载薄膜过滤法限于抗生素样品；用需、厌气菌培养基及 霉菌培养基；要求实验环境为紫外线灭菌的无菌室。1990版 与85年版相同1995版 开始要求对培养基进行灵敏度检查。2000版 规定实验环境为100级洁净度；检验数量从2支/瓶增加为 611支/瓶；明确薄膜过滤法为首选方法包括大容量液体样品 首次引用、收载全封闭过滤技术。 对比国际无菌检查发展历史 ， 我国2000版以前药典无菌检查法因技术和认识的不足，对提高方法捡出率、保证检验结果的准确性、可靠性方面的规定与先进国家药典中的要求严重脱节。2005版无菌

5、检查法取得长足发展 实验环境要求 、验证试验、 延长培养时间至少为14天、以一次检出为准，取消复试等亮点。 是2005年版药典无菌检查法的大步发展，从而使2005年版无菌检查法比历版无菌检查法有了突破性的提高。基本与国际先进药典无菌检查法接轨。 2010年版药典无菌检查法的发展，主要是在总结和巩固实施验证试验以来所取得经验及认识的基础上，作两方面的发展： 一、附录无菌检查法（一部附录 B） （二部附录 H） （三部附录 A） 围绕着保证实验结果的准确性、可靠性作进一步的增、修订。 二、品种各论中【无菌】各论化的发展一、附录无菌检查法中的增、修订 （一）总则部分 （二）培养基部分 （三）灵敏度检

6、查部分 （四）稀释液、冲洗液部分 （五）方法验证部分 （六）薄膜过滤法部分 （七）培养及观察部分 （八） 结果判断部分 （九） 表1、表2和表3 （一）总则部分 新增规定1、“ 防止污染的措施不得影响供试品中微生物的检出。”2、“ 日常检验还需要对环境进行监控。”3、“ 无菌检查人员必须具备微生物专业知识，并经过无菌技术的培训。 （二）培养基部分1、删除： 硫乙醇酸盐流体培养基 后括号（用于培养好氧菌、厌氧菌）的说明2、删除： 改良马丁培养基 后括号（用于培养真菌）的说明3、删除： 选择性培养基项下加入适量中和剂或表面活性剂 “ 如对氨基苯甲酸（用于磺胺类供试品）、聚山梨酯80（用于非水溶性供

7、试品）或-内酰胺酶（用于-内酰胺类供试品）”等说明。 修订为： 在培养基灭菌或使用前加入适宜的中和剂、灭活剂或表面活性剂，其用量同验证试验。 增订：表1 常见干扰物的中和剂或灭活方法 (见微生物限度检查法中）干扰物可选用的中和剂或灭活方法 戊二醛酚类、乙醇、吸附物醛类季铵类化合物（QACs）、对羟基苯甲酸酯汞类制剂双胍类化合物碘酒、洗必泰类卤化物乙二胺四乙酸（EDTA）磺胺类-内酰胺类抗生素亚硫酸氢纳稀释法稀释法、甘氨酸、硫代硫酸盐卵磷脂、聚山梨酯亚硫酸氢纳、巯基乙酸盐、硫代硫酸盐卵磷脂聚山梨酯硫代硫酸盐镁或钙离子对氨基苯甲酸-内酰胺酶表1 常见干扰物的中和剂或灭活方法 4、将原排列第 6.的

8、 0.5%葡萄糖肉汤培养基（用于硫酸链霉素等抗生素的无菌检查） 修订排列为第 4. 按顺序归类培养基1.4. 均为直接用于无菌检查的液体培养基。 （三）培养基灵敏度检查部分1、在菌液制备中，修订黑曲霉的孢子悬液制备方法：规定应使用含0.05（v/v）聚山梨酯80的0.9无菌氯化钠溶液，洗脱孢子及稀释孢子液，制成每1ml中含孢子数小于100 cfu的孢子悬液。 删除了：（用管口带有薄的无菌棉花或纱布能过滤菌丝的无菌毛细吸管） 吸出孢子悬液的操作方法2、新增加稀释后的工作用菌液的保存条件和保存期限： 菌液制备后“若在室温下放置，应在2小时内使用，若保存在28，可在24小时内使用。黑曲霉孢子悬液可保

9、存在28，在验证过的贮存期内使用。” （四） 稀释液、冲洗液及其制备方法部分 原有 1. 0.1%蛋白胨水溶液 2. pH7.0氯化钠-蛋白胨缓冲液新增加： 可根据供试品的特性，选用其他经验证过的适宜的溶液作为稀释液、冲洗液。（五）方法验证试验部分1、验证试验用菌种及菌液制备在培养基灵敏度所用菌种的基础上，删除铜绿假单胞菌，增订大肠埃希菌。 是因在验证试验的实践中，发现作为革兰氏阴性杆菌代表的铜绿假单胞菌在验证试验中对大部分抗生素不敏感，而大肠埃希菌对抗革兰氏阴性杆菌为主的抗生素敏感性较好。2、验证试验中样品用量的规定：删除了原：“ 将规定量供试品按 ”修订为 薄膜过滤法： “ 取每种培养基规

10、定接种的供试品总量按 薄膜过滤法过滤” 直接接种法： “接入每支培养基规定的供试品接种量” 明确了验证试验所需样品量是供试品的检验量而不是供试品的检验数量。（六）供试品的无菌检查部分1、阳性对照用量的修订： 原：“若采用直接接种法，应增加供试品1支（或瓶）作阳性对照用。”修订为 ：若采用直接接种法，应增加供试品无菌检查时每个培养基容器接种的样品量作阳性对照用。因若是液体制剂，应该采用薄膜过滤法，若是固体制剂每管接种量可能不止1支（或瓶），应按验证的方法确定。2、薄膜过滤法中的增、修订：2.1 新增规定：抗生素供试品应选择低吸附的滤器及滤膜2.2 新增规定：对每片滤膜的总冲洗量不得过1000ml

11、2.3 新增规定：所用冲洗量、冲洗方法同验证试验 2.4 修订：无菌气（喷）雾剂供试品的检验方法： 规定置至少-20冰室冷冻1小时。并新增开启容器后 “将供试品转移至无菌容器中”的操作步骤。2.5 修订：装有药物的注射器供试品的检验方法：删除 原 “装上无菌针头（非包装中所配带的）” 修订为 “取规定量，排出注射器中的内容物，若需要可吸入稀释液或标签所示的溶剂溶解，直接过滤，” 没有必要将原装配好的针头取下来 3、 直接接种法中的增、修订：删除了原直接接种法中-内酰胺类或黄胺类供试品项 。因该两类供试品的无菌检查以采用薄膜过滤法加中和剂更好。4、 培养及观察中的增、修订： 对于培养14天后，不

12、能从外观上判断有无微生物生长时，删除了：“或划线接种于斜面培养基上” 的规定。必然删除：可根据斜面是否有菌生长而判断的规定。（七）结果判断部分新增订：阳性对照管应生长良好，阴性对照管不得有菌生长。否则，试验无效。强调阳性对照、阴性对照在无菌检查实验成立与否中的作用。 （八） 表1、表2和表3部分 表1将表1第3列的表题原 “每种培养基最少检验数量” 修订为：“接种每种培养基所需的最少检验数量” 更明确指出接种到培养基中去的检验量。修订了表1下的 注: 对供试品容器装量不够接种两种培养基的情况，明确规定最少检验数量应加倍。 表2将表2原名称：“上市抽验样品（液体制剂）的最少检验数量” 修订为：“

13、 液体制剂最少检验量及上市抽验样品的最少检验数量”明确液体制剂最少检验量见表2的第2列，供试品最少检验数量见表2的第3列。 修订了表2下的 注: 对供试品容器装量不够接种两种培养基的情况，明确规定最少检验数量应加倍。表3 将表3原名称：“上市抽验样品（固体制剂）的最少检验量” 修订为：“ 固体制剂最少检验量及上市抽验样品的最少检验数量” 明确固体制剂最少检验量见表3第2列；供试品最少检验数量见表3的第3列。修订了表3下的 注: 对供试品容器装量不够接种两种培养基的情况，明确规定最少检验数量应加倍。二、各论中【无菌】各论化的发展 举例如下：乙酰谷酰胺注射液、丁溴东莨菪碱注射液 无菌：取本品，经薄

14、膜过滤法处理，用0.1无菌蛋白胨水溶液分次冲洗（每膜不少于100ml），以金黄色葡萄球菌为阳性对照菌，依法检查（附录H），应符合规定。举例如下：头孢曲松钠、头孢拉定、头孢哌酮钠、头孢硫脒、注射用阿莫西林钠克拉维酸钾、盐酸林可霉素注射液 无菌：取本品，用适宜溶剂溶解后转移至不少于500ml的0.9%无菌氯化钠溶液中，用薄膜过滤法处理后，依法检查（附录H），应符合规定。氧氟沙星氯化钠注射液 无菌：取本品，经薄膜过滤法处理，用0.1无菌蛋白胨水溶液分次冲洗（每膜不少于500ml）每管培养基中加入0.1mol/L硫酸锰溶液1ml,以大肠埃希菌为阳性对照菌，依法检查（附录H），应符合规定。 微生物限度检

15、查增修定内容 修改内容 1、培养条件 控制菌培养温度3537修改为3035(细菌、控制菌培养温度相同)。 修改理由 此温度适于所有中温菌生长，一些高温菌在该温度下也可以生长。 增修订内容 2、结果报告 特殊品种可以最小包装单位报告 特殊品种包括 药典规定微量包装药品的检验量可以酌减。 还有一些贵重药品也应考虑检验量。3、检验量增修订内容 中药膜剂检验量50 cm2 修改为100cm2 。 沙门菌检验量修改为检验量为20 g或20ml并注明（其中10 g用于阳性对照）。 4、供试液的制备增修订内容 供试品检查时使用表面活性剂应证明其对微生物生长和存活无影响修改为无毒性。供试液的制备若需（水浴）（

16、删除水浴两字）加温时，可采用其他经验证的方法，但应均匀加热，且温度不应超过45。 新增贴剂供试液制备 取规定量供试品，去掉贴剂的保护层，放置在无菌玻璃或塑料片上，粘贴面朝上。用适宜的无菌多孔材料（如无菌纱布）覆盖贴剂的粘贴面以避免贴剂粘贴在一起。然后将其置于适宜体积并含有灭活剂（如聚山梨酯80或卵磷脂）的稀释剂中，用力振荡至少30分钟，或以其他方法制备成供试液。 具抑菌活性的供试品增修订内容 删除应消除供试液的抑菌活性修改为当供试品具有抑菌活性时，应尽量选择操作简便、快速的方法，应避免损伤供试品中污染的微生物。在供试品溶液性状允许的情况下，应尽量选用薄膜过滤法。 离心沉淀集菌法 两次离心修改为

17、一次离心； 500转/分离心，不超过3分钟，取全部上清液用于检查。 影响因素 供试品 污染菌特性 适用范围 仅使用于微生物限度检查供试液的制备。 尽量避免使用，不可使用快速离心。 细菌、霉菌及酵母菌计数增修订内容新增计数培养基的适用性检查 菌种 大肠埃希菌（Escherichia coli）CMCC（B） 44102 金黄色葡萄球菌（Staphylococcus aureus）CMCC（ B） 26 003 枯草芽孢杆菌（Bacillus subtilis）CMCC（B） 63 501 白色念珠菌（Candida albicans）CMCC（F） 98 001 黑曲霉（Aspergillus

18、niger）CMCC（F） 98 003 增加了菌悬液的制备及保存条件。 菌悬液制备后在室温下放置应在2小时内使用，若保存在28可以在24小时内使用。黑曲霉孢子悬液可保存在 28，在验证过的贮存期内使用，每株试验菌平行制备2个平皿，混匀，凝固，按规定条件培养计数，同时用相应的对照培养基替代被检培养基进行上述试验。 增加了对照培养。 2.新增常见干扰物的中和剂和灭活方法 参见 表1常见干扰物的中和剂或灭活方法干扰物可选用的中和剂或灭活方法 戊二醛酚类、乙醇、吸附物醛类季铵类化合物（QACs）、对羟基苯甲酸酯汞类制剂双胍类化合物碘酒、洗必泰类卤化物乙二胺四乙酸（EDTA）磺胺类-内酰胺类抗生素亚硫

19、酸氢纳稀释法稀释法、甘氨酸、硫代硫酸盐卵磷脂、聚山梨酯亚硫酸氢纳、巯基乙酸盐、硫代硫酸盐卵磷脂聚山梨酯硫代硫酸盐镁或钙离子对氨基苯甲酸-内酰胺酶表1 常见干扰物的中和剂或灭活方法 6、供试品检查增修订内容 平皿法 删去采用平皿法进行菌数测定时，连续23个稀释级的供试液。修改为按计数方法的验证试验确认的程序进行供试液制备。 培养时间修改内容 除另有规定外，细菌培养48小时改为3天，霉菌、酵母菌培养72小时改为 5天，必要时，可适当延长培养时间至7天进行菌落计数并报告。菌数报告规则增修订内容 若同稀释级两个平板的菌落平均数不小于15，则两个平板的菌落数不能相差1倍或以上。 细菌、酵母菌和霉菌平均菌

20、落数在30300 、30100之间的稀释级修改为选取菌落数小于300cfu（细菌）和100cfu（霉菌）的稀释级作为菌数报告的依据。薄膜过滤法增修订内容 新增内容 采用其它直径的滤膜，冲洗量应相应的进行调整（如使用膜直径增大冲洗液量也应相应增加，可保证冲洗液覆盖整个滤膜）。 删去每片滤膜的总过滤量不宜过大，修改为总冲洗量不得超过1000ml。 7、控制菌检查增修订增加控制菌检查用培养基的适用性检查； 检查项目包括促生长、抑制及指示能力检查，参照表2 新增培养基适用性检查方法液体培养基促生长能力检查。固体培养基促生长能力检查。培养基抑制能力检查。液体培养基指示能力检查。固体培养基指示能力检查。

21、试验结果与对照培养基比较控制菌检查用培养基的适用性检查控制菌检查用培养基的促生长、抑制及指示能力检查控制菌检查 培养基 特性 试验菌株大肠埃希菌 胆盐乳糖 促生长能力 大肠埃希菌 抑制能力 金黄色葡萄球菌 MUG 促生长能力+指示能力 大肠埃希菌 曙红亚甲蓝 或麦康凯 促生长能力+指示能力 大肠埃希菌大肠菌群 乳糖胆盐 促生长能力 大肠埃希菌 抑制能力 金黄色葡萄球菌 乳糖发酵 促生长能力+指示能力 大肠埃希菌 曙红亚甲蓝 或麦康凯 促生长能力+指示能力 大肠埃希菌 沙门菌 营养肉汤 促生长能力 乙型付伤寒沙门菌 四硫磺酸钠亮绿 促生长能力 乙型付伤寒沙门菌 抑制能力 金黄色葡萄球菌 胆盐硫乳

22、琼脂或沙门、 志贺氏属琼脂培养基 促生长能力+指示能力 乙型付伤寒沙门菌 曙红亚甲蓝琼脂 或麦康凯琼脂 培养基 促生长能力+指示能力 乙型付伤寒沙门菌 三糖铁琼脂 培养基 指示能力 乙型付伤寒沙门菌铜绿假单 胆盐乳糖 促生长能力 铜绿假单胞菌胞菌 抑制能力 金黄色葡萄球菌 溴化十六烷基三 促生长能力 铜绿假单胞菌 甲铵琼脂 抑制能力 大肠埃希菌 绿脓菌素测定 用培养基 促生长能力+指示能力 铜绿假单胞菌金黄色葡 亚碲酸盐肉汤 促生长能力 金黄色葡萄球菌 萄球菌 抑制能力 大肠埃希菌 卵黄氯化钠琼脂促生长能力+指示能力 金黄色葡萄球菌 或甘露醇盐琼脂 抑制能力 大肠埃希菌梭菌 梭菌增菌培养基 促

23、生长能力 生孢梭菌 哥伦比亚琼脂 促生长能力 生孢梭菌 白色念 沙氏葡萄糖肉汤 促生长能力 白色念珠菌珠菌 沙氏葡萄糖琼脂 促生长能力+指示能力 白色念珠菌 念珠菌显色培养基 促生长能力+指示能力 白色念珠菌 吐温80玉米琼脂 促生长能力+指示能力 白色念珠菌控制菌检查法增修订内容疑似致病菌的确证微生物控制菌检查中没有规定进一步确证疑似致病菌的方法。选择已被认可的菌种鉴定方法。如伯杰氏细菌鉴定手。控制菌检查方法验证 删去阴性菌对照组。 大肠菌群检查用胆盐乳糖培养基改为乳糖胆盐。改梭菌检查用庖肉培养基为梭菌增菌培养基。 改梭菌培养时间7296小时为48小时。 增加了白色念珠菌检验方法 增菌培养

24、沙氏葡萄糖肉汤培养基。 分离培养 划线接种于沙氏葡萄糖琼脂培养基平板上。鉴定试验 典型菌落 沙氏葡萄糖琼脂培养基 菌落呈乳白色偶见淡黄色，表面光滑有浓 酵母气味，时间稍久则菌落增大，颜色变 深、质地变硬或有皱摺。 念珠菌显色培养基 菌落呈绿色或翠绿色菌落生长。 确认试验取1%吐温80-玉米琼脂 培养基培养物进行染色，镜检及芽管 试验。结果判断非革兰阳性菌，显微镜下未见厚膜孢子、假菌丝、芽管判未检出白色念珠菌。 新增微生物限度检查法指导原则一、抑菌剂效力检查法指导原则二、药品微生物检验替代方法验证指 导原则三、微生物限度检查法应用指导原则四、药品微生物实验室规范指导原则 一、抑菌剂效力检查法指导

25、原则 指导原则的目的 是为测定灭菌、非灭菌制剂中抑菌剂的活性，以评价最终产品的抑菌效力及生产企业在制剂研发阶段抑菌剂的确定提供指导。 为防止药品由于微生物污染而引起变质，对服用者造成不良反应，在药品生产过程中加入一定剂量的抑菌剂。抑菌剂不能用于替代药品生产的GMP管理，不能作为非灭菌制剂降低微生物污染的唯一途径，也不能作为控制多剂量包装制剂灭菌前的生物负载的手段。使用范围及原则 使用范围 如果药物本身不具有充分的抗菌活性，应根据制剂特性添加适宜的抑菌剂，以防止制剂在正常贮藏和使用过程中可能发生的微生物污染和繁殖，对患者造成伤害。 使用原则 所有抑菌剂都具有一定的毒性，添加抑菌剂时应注意以下原则

26、: 抑菌剂的用量应为最低有效量。 具有抗菌活性的制剂应确认其抗菌效力。 应验证最终容器中的抑菌剂效力在效期内不因贮藏条件而降低。 本试验方法和抑菌剂抑菌效力判断标准用于包装未启开的成品制剂。 抑菌剂抑菌效力的测定 供试品的分类 分为四类，但对于一些抗酸性制剂和含活生物制剂应考虑会降低有益菌的生物活性。见表1 表1 产品分类 类别 药品 1 类 注射剂、 其他非肠道制剂， 包括 乳剂、耳用制剂、无菌鼻用制剂及眼 用制剂 2 类 局部给药制剂、非灭菌鼻用制剂及用于 黏膜的乳剂 3 类 口服非固体制剂（非抗酸制剂） 4 类 非固体抗酸制剂 培养基 培养基的制备 胰酪胨大豆肉汤琼脂培养基 胰酪胨大豆肉

27、汤培养基 沙氏葡萄糖肉汤培养基 培养基的适用性检查 同控制菌培养基 的适用性检查抑菌剂效力测定方法 菌种 菌液制备 菌种 同培养基适用性检查，制剂中常见的污 染微生物也可作为试验菌。 菌液制备 制成每1ml含菌数约为108cfu的菌悬液。 供试品接种影响因素给予指导 容器的材质、形状、体积、封口方式及容器的PH等分别给予了指导。 接种菌量 接种菌液的体积不得超过供试品体积的0.5%1%。 放置 2025，避光贮存，贮存温度的变化应尽可能控制在最小范围，并防止被污染。 存活菌数测定 采用经验证的方法进行试验，计算1ml(g)供试品各试验菌所得的菌数及各间隔时间的菌数，并换算成lg值。 结果判断

28、结果符合表3要求，可判断该产品抑菌效力符合规定。 表3 抑菌剂抑菌效力判断标准 1 类 供 试 品 细菌 7天菌数下降不少于1.0 lg，14天菌数下降不少于 3.0lg,14天到28天菌数不增加。 真菌 与初始值比，7、14、28天菌数均不增加。 2 类 供 试 品 细菌 14天菌数下降不少于2.0 lg，14天到28天菌数不增加。 真菌与初始值比，14、28天菌数均不增加。 3 类 供 试 品 细菌 14天菌数下降不少于1.0 lg，14天到28天菌数不增加。 真菌 与初始值比，14、28天菌数均不增加。 4 类 供 试 品 细菌，真菌 与初始值比，14、28天菌数均不增加。 注：1、表中

29、“不增加”是指对前一个测定时间，试验菌增加的数量 不超过0.5 lg。 2、0时菌数(初试值) 供试品加入试验菌，摇匀，立即取样检 查，培养，计数，为0时菌数。 二、药品微生物检验替代方法验证指导原则 目的 是为所采用的试验方法能否替代药典规定的 方法用于药品微生物的检验提供指导。 在控制药品微生物质量中，需要采用替代方 法 时，应进行方法的验证，确认其应用效果优于或等同于药典的方法。 微生物检验的类型及验证参数 药品微生物检验方法主要分两种类型 定性试验 定量试验 生物试验的特殊性 抽样误差 操作误差 稀释误差 培养误差 计量误差 计数误差 药品质量标准分析方法验证指导原则不完全 宜于微生物

30、替代方法的验证。 表1、 不同微生物检验类型验证参数表 参数 定性检验 定量检验 准确度 精密度 专属性 检测限 定量限 线性 范围 耐用性 重现性 注： 表示需要验证的参数 表示不需要验证的参数 逐项按替代方法验证的要求进行验证和评价以便操作者了解方法的关键操作点替代方法验证的一般要求 适用性验证前，对替代方法有一个全面的了解； 由替代方法的研发者提供，或由方法使用者完成。 验证应至少使用2 个批号的样品，每批样品应平行进行至少3 次独立实验。 在开展各参数验证时，除规定的菌株外，还应根据替代方法及样品的特点增加相应的菌株。 三、药品微生物限度检查法应用指导原则 目的 为更好的应用微生物限度

31、检查法及限度标准的合理执行提供指导。 用途 用于判断非规定灭菌制剂及原料、辅料是否符合药典的规定，也可用于指导制剂、原料、辅料的微生物质量标准的制定，及指导生产过程中间产品微生物质量的监控。 本指导原则将对标准和方法中的特定内容及标准的应用做进一步的说明。 1.微生物限度检查过程中，如需要使用表面活性剂、灭活剂及中和剂，应对其用量、有效性、无毒性进行确认，无毒性确认，试验的菌株应包括产品中可能污染的微生物。 2.检验方法的选择 供试液制备应尽量选择微生物限度检查法中操作简便、快速的方法，且应避免损伤供试品中污染的微生物。 对于抑菌作用较强的供试品，在供试品溶液性状允许的情况下，应尽量选用薄膜过

32、滤法进行试验。3. 供试液制备 本指导原则对离心沉淀法使用范围、方法及对检验结果影响的因素进行了分析和指导 4.验证试验存在的问题及处理方法 自药典收载方法验证以来在实施过程中存在一些具体问题，对这些存在问题进行了指导； 进行验证试验时，因没有适宜的方法消除供试品中的抑菌作用而导致微生物回收的失败。 处理方法 应采用能使微生物生长的更高稀释级供试液进行方法验证试验 。 若采用允许的最高稀释级供试液进行验证试验还存在一株或多株试验菌的回收率达不到要求。 处理方法 应选择回收情况最接近要求的方法进行供试品的检测。在以上情况下，生产单位或研制单位应进行全面的风险评估以保证检验方法的可靠性，从而保证产

33、品质量。 . 控制菌的确证 没有规定进一步确证疑似致病菌的方法。仅规定若供试品检出疑似致病菌，确证的方法应选择已被认可的菌种鉴定方法。微生物限度标准 该指导原则对标准执行中存在的问题进行了分析和指导； 明确了微生物限度标准使用范围 标准执行 必检项目原则性要求 （丸剂、口服片剂、胶囊剂、颗粒剂），应对其被微生物污染的风险进行评估。 用于手术、烧伤及严重创伤的局部给药制剂应符合无菌检查法要求。 用于创伤程度难以判断的局部给药制剂，若没有证据证明药品不存在安全性风险则应符合无菌检查法要求。 眼用制剂应符合无菌检查法要求。 含动物类原药材粉的口服中药制剂要求不得检出沙门菌。其中的动物类原药材粉是指除

34、蜂蜜、王浆、动物角、阿胶外的所有动物类原药材粉，如牡蛎、珍珠等贝类，海蜇、冬虫夏草、人工牛黄等。 制定合理、安全和严格的微生物限度标准 四、药品微生物实验室规范指导原则 目的 该指导原则用于指导药品微生物检验实验室的质量控制。 药品微生物的检验的对象具特殊性； 活的生物、 分布不均匀、重现性差 必须使用经验证的检测方法并严格按照药品微生物实验室规范要求进行试验。药品微生物实验室规范包括以下几个方面人员、培养基、菌种、实验室的布局和运行、设备、文件、实验记录、结果的判断等。人员从事药品微生物试验工作的人员应具备微生物学或相近专业知识的教育背景 检验人员和管理人员培训 进行岗前培训 检验人员技能培训熟悉相关检测 方法、程序、检测目的和结果评价。 管理人员 其专业技能和经验水平应与他们的职责范围相符。不断接受系统的教育与职责范围相关的培训。 客观评估检验人员的能力，必要时对其进行再培训并重新评估。 培养基培养基是微生物试验的基础，直接影 响微生物试验结果。适宜的培养基制备方法、贮藏条件和质量控制试验是提供优质培养基的保证。 该指导原则对培养基的制备