【检验-基础-课件-PPT】病原微生物实验室风险评估及风险控制

1、病原微生物实验室风险评估及风险控制复旦大学基础医学院医学分子病毒学教育部/卫生部重点实验室2Outline我国关于生物安全相关法律法规（简）病原微生物实验活动的风险评估和风险控制病原微生物危害等级的分类开展实验活动需要的生物安全实验室条件（BSL-2实验室）实验活动中产生气溶胶的评估实验室设立单位管理体系的评估实验室感染事件的分析3Outline我国关于生物安全相关法律法规（简）病原微生物实验活动的风险评估和风险控制病原微生物危害等级的分类开展实验活动需要的生物安全实验室条件（BSL-2实验室）实验活动中产生气溶胶的评估实验室设立单位管理体系的评估实验室感染事件的分析实验室的生物安全条件和状态

2、不低于容许水平，可避免实验室人员、来访人员、社区及环境受到不可接受的损害，符合相关法规、标准等对实验室生物安全责任的要求。-GB19489-2008实验室生物安全通用要求实验室生物安全：为防止意外曝露于生物制剂和毒素，以及防止生物制剂和毒素的意外释放而实施的防护原则、技术和做法。-CWA15793：2008（E）Laboratorybioriskmanagementstandard实验室生物安全定义生物危害标识生物安全实验室 病原微生物操作人员的“福利”&“劳保” 对环境的保护 -“环保” -不是“魔鬼”实验室“无知者无畏”或 “步步惊心” 需要科学认识实验室的生物安全 实验室生物安全管理至关

3、重要科学管理发挥专家委员会的作用许多科研人员无医学背景也对病原微生物缺乏认识生物安全涉及的不仅仅是个人健康问题科学农业健康安保政治经济涉及国家和社会：生物安全是国家安全重要组成部分中华人民共和国的法律法规中华人民共和国主席令第十七号中华人民共和国传染病防治法已由中华人民共和国第十届全国人民代表大会常务委员会第十一次会议于2004年8月28日修订通过，现将修订后的中华人民共和国传染病防治法公布，自2004年12月1日起施行。中华人民共和国主席 胡锦涛2004年8月28日目录第一章 总则第二章 传染病预防第三章 疫情报告、通报和公布第四章 疫情控制第五章 医疗救治第六章 监督管理第七章 保障措施第

4、八章 法律责任第九章 附则8第二编 分则第一章 危害国家安全罪 第二章 危害公共安全罪第六章妨害社会管理秩序罪第五节危害公共卫生罪全国人民代表大会常务委员会会议通过1999年12月25日中华人民共和国刑法修正案2001年8月31日中华人民共和国刑法修正案(二)2001年12月29日中华人民共和国刑法修正案(三)2002年12月28日中华人民共和国刑法修正案(四)2005年2月28日中华人民共和国刑法修正案(五)2006年6月29日中华人民共和国刑法修正案(六)2009年2月28日中华人民共和国刑法修正案(七)2011年2月25日中华人民共和国刑法修正案(八)根据2015年8月29日中华人民共和

5、国刑法修正案刑法修正案(九)。生物安全是国家安全的一部分依据法律法规管理实验室生物安全：法律：中华人民共和国传染病防治法中华人民共和国刑法法规：国务院424号令病原微生物实验室生物安全管理条例菌毒种运输、医疗废弃物处置地方法规：（以上海市为例）上海市二级生物安全防护实验室管理规范 （2012.9.3）上海市病原微生物菌(毒)种或样本运输及保存规范（2012.8.27） 监督检查-市/区卫生监督所 （属地化）9中华人民共和国国务院令 第424号 病原微生物实验室生物安全管理条例【2018修订版】病原微生物实验室生物安全管理条例，中华人民共和国卫生部第45号令可感染人类的高致病性病原微生物菌(毒)

6、种或样本运输管理规定自2006年2月1日起施行 卫生部科技教育司 为加强病原微生物实验室生物安全管理，规范病原微生物实验活动，根据病原微生物实验室生物安全管理条例的规定，我部组织制订了人间传染的病原微生物名录。经部务会讨论通过，现印发给你们，请遵照执行。附件：1名录封面 2人间传染的病原微生物名录 2006年1月11处置医疗废物的法规和政策国务院第380号令20030616 医疗废物管理条例根据中华人民共和国传染病防治法和中华人民共和国固体废物污染环境防治法，制定本条例。二三年六月十六日卫生部第36号令医疗卫生机构医疗废物管理办法二三年十月十五日卫生部国家环保总局第21号令医疗废物管理行政处罚

7、办法根据中华人民共和国传染病防治法、中华人民共和国固体废物污染环境防治法和医疗废物管理条例,特制定医疗废物管理行政处罚办法。二四年六月二日国家质量监督检验检疫总局（总局令第160号）出入境特殊物品卫生检疫管理规定 经2014年12月4日国家质量监督检验检疫总局局务会议审议通过，现予公布，自2015年3月1日起施行。2015年1月21日申请办理生物制品、血液制品的卫生检疫审批手续 应注意生物安全的有关问题材料的描述：所含内容（如质控血清？，含有？）安全性的问题（级别）需要的操作的条件申请单位所具备的条件：硬件（二级生物安全防护？-备案 三级生物安全防护？） 管理体系/规则 实验室生物安全操作（S

8、OP）国务院修改病原微生物实验室生物安全管理条例病原微生物实验室生物安全管理条例2004年11月12日中华人民共和国国务院令第424号公布2016年2月6日国务院关于修改部分行政法规的决定修订2018年04月04日国务院关于修改和废止部分行政法规的决定修订国务院关于修改和废止部分行政法规的决定中华人民共和国国务院令第698号【2018修订版】病原微生物实验室生物安全管理条例，修订内容十一、删去病原微生物实验室生物安全管理条例第二十一条第二款。第二十二条第一款中的“取得从事高致病性病原微生物实验活动资格证书的实验室，”修改为“三级、四级实验室”。第二十三条第一款中的“取得相应资格证书的实验室”修

9、改为“具备相应条件的实验室”。第二十六条修改为：“国务院卫生主管部门和兽医主管部门应当定期汇总并互相通报实验室数量和实验室设立、分布情况，以及三级、四级实验室从事高致病性病原微生物实验活动的情况。”第五十六条修改为：“三级、四级实验室未经批准从事某种高致病性病原微生物或者疑似高致病性病原微生物实验活动的，由县级以上地方人民政府卫生主管部门、兽医主管部门依照各自职责，责令停止有关活动，监督其将用于实验活动的病原微生物销毁或者送交保藏机构，并给予警告；造成传染病传播、流行或者其他严重后果的，由实验室的设立单位对主要负责人、直接负责的主管人员和其他直接责任人员，依法给予撤职、开除的处分；构成犯罪的，

10、依法追究刑事责任。”第五十八条中的“卫生主管部门或者兽医主管部门对符合法定条件的实验室不颁发从事高致病性病原微生物实验活动的资格证书，或者对出入境检验检疫机构为了检验检疫工作的紧急需要”修改为“卫生主管部门或者兽医主管部门对出入境检验检疫机构为了检验检疫工作的紧急需要”。第六十一条中的“由原发证部门吊销该实验室从事高致病性病原微生物相关实验活动的资格证书”修改为“责令停止该项实验活动，该实验室2年内不得申请从事高致病性病原微生物实验活动”。/InsidePage/1000/1167/7862.html/fzs/s7852d/201708/fe13dab151cd42f18ee546c380fe

11、7292.shtml标准号 WS 2332017 病原微生物实验室生物安全通用准则 发布时间 2017-07-24 实施时间： 2018-02-01 /zhuz/s9491/201707/6d35d266c0be40f2886fcdb97c25bf68.shtml点击可下载/zhuz/s9491/201803/173ced820c12404c817eac8a122143ee.shtml点击可下载/mostinfo/xinxifenlei/fgzc/gfxwj/gfxwj2017/201707/t20170725_134231.htm19Outline我国关于生物安全相关法律法规（简）病原微生物

12、实验活动的风险评估和风险控制病原微生物危害等级的分类开展实验活动需要的生物安全实验室条件（BSL-2实验室）实验活动中产生气溶胶的评估实验室设立单位管理体系的评估实验室感染事件的分析SARS（严重急性呼吸道综合征）禽流感： H5N1， H7N9MERS:中东呼吸道综合征埃博拉病毒病：疯牛病：20病原微生物危害等级分类？开展实验活动有何生物安全风险？如何风险控制和管理？21病原微生物实验活动风险评估没有那么“高、大、上”其实我们经常在做“风险评估”样的事风险评估报告“风险评估报告”必须认真，形成文字 必须有点高大上，有点困难风险评估的组织： 操作人员、专家、领导风险控制风险管理22风险评估的主要

13、任务：识别评估对象可能造成各种潜在危害的风险评估风险概率、可能带来的负面影响评估组织/单位所能承受风险的能力确定风险控制/消减的可能性及优先等级风险控制措施的有效性风险控制措施的再评估（是否带来新的风险）推荐风险控制/消减的措施 执行力、监督进行实验室生物风险评估时，需要了解所操作病原微生物的特性病原微生物实验活动的风险评估基本步骤确定风险病原微生物实验活动（病原、实验内容、操作）-识别风险-风险是否可控？风险控制措施-决定是否开展相应工作“NO”修改计划-再评估“Yes”执行计划监控执行情况降低或消除生物危害“NO”不执行24病原微生物实验室的风险评估是动态、持续：实验室的立项和建设的风险评

14、估实验室管理体系的风险评估实验室运行过程中的管理体系风险再评估实验/科研项目的风险评估病原微生物实验活动（方法、技术）的风险评估病原微生物实验活动相关SOP的风险评估风险控制措施的有效性及风险评估（是否带来新的风险）实验活动的监督及发现问题后的风险评估科研/项目进入流程风险评估是必要的环节项目组需填写实验活动申请书、备案填写项目申请书签订实验室使用意向书或协议提交项目计划书（含风险评估）实验人员实验方案实验材料详单外单位人员信息表单位介绍信体检/培训/考核/上岗项目安全实施计划(SOP)实验环节风险评估实验室（生物安全委员会）审查知情同意书实验室审核讨论实验方案可行性及其生物安全的考虑实验室主

15、任审核批准及时讨论存在问题定期生物安全监督开展实验活动反馈、纠正双方项目负责人保卫处备案-安保风险评估生物安全风险评估中关注的关键问题 （Biosafety risks）感染的潜在可能性 暴露的潜在可能性生物安全管理生物安全风险管理风险评估风险控制措施的制定措施的“落地”实验室工作人员感染的风险实验室以外人员（社区）/环境感染的风险实验室以外动物（社区）/环境感染的风险第二次接触可能导致人或动物感染的风险实验人员是否会感染环境是否会被污染生物安全风险 Biosafety risks生物风险 biorisk 可能性（不一定会发生）感染暴露（可能感染的途径）感染后可能的后果生物危害风险评估感染和暴

16、露可能性感染后疾病后果的预测感染的可能性基于生物因子的生物学特性暴露的可能性基于实验室的操作程序 管理控制措施降低或消除生物危害实验室生物风险评估时，必须了解所操作病原微生物的特性28Outline风险评估风险评估的基本步骤病原微生物实验活动的风险评估主要内容病原微生物危害等级的分类开展实验活动需要的生物安全实验室条件（BSL-2实验室）实验活动中产生气溶胶的评估实验室设立单位管理体系的评估实验室感染事件的分析病原微生物实验室生物安全管理条例第七条 国家根据病原微生物的传染性、感染后对个体或者群体的危害程度，将病原微生物分为四类： 第一类病原微生物，是指能够引起人类或者动物非常严重疾病的微生物

17、，以及我国尚未发现或者已经宣布消灭的微生物。 第二类病原微生物，是指能够引起人类或者动物严重疾病，比较容易直接或者间接在人与人、动物与人、动物与动物间传播的微生物。 第三类病原微生物，是指能够引起人类或者动物疾病，但一般情况下对人、动物或者环境不构成严重危害，传播风险有限，实验室感染后很少引起严重疾病，并且具备有效治疗和预防措施的微生物。 第四类病原微生物，是指在通常情况下不会引起人类或者动物疾病的微生物。 第一类、第二类病原微生物统称为高致病性病原微生物世界卫生组织的病原微生物分类：4级病原微生物3级病原微生物 不等同于实验室 的安全等级，与2级病原微生物 实验活动有关1级病原微生物29卫健

18、委-人类健康农业部-畜牧动物疾病关注：对人的致病性病原对人不致病或低致病-实验室控制较松关注：对动物的致病性病原对动物不致病或低致病-实验室控制较松高致病性禽流感动物样本的采集动物CDC人样本的采集 CDC30国家林业局-野生动物One world One health人高致病性禽流感菜场：人、动物混杂，环境卫生恶劣：鼠、蝙蝠、昆虫等杂生工商行政管理局迁徙鸟类卫生部科技教育司 为加强病原微生物实验室生物安全管理，规范病原微生物实验活动，根据病原微生物实验室生物安全管理条例的规定，我部组织制订了人间传染的病原微生物名录。经部务会讨论通过，现印发给你们，请遵照执行。附件：1名录封面 2人间传染的病

19、原微生物名录 2006年1月11正在修订中，新版即将出台实验室生物安全管理者应该了解病原微生物的基本知识有点勉为其难充分利用人间传染的病原微生物名录 第四条 国家对病原微生物实行分类管理，对实验室实行分级管理。 第八条 人间传染的病原微生物名录由国务院卫生主管部门商国务院有关部门后制定、调整并予以公布；动物间传染的病原微生物名录由国务院兽医主管部门商国务院有关部门制定、调整并予以公布。 病原微生物实验室生物安全管理条例3233人间传染的病原微生物名录-2006, 卫生部卫科教发200615号/n272442/n272530/n3479265/n3479284/20774.html动物病原微生物

20、分类名录-2005,农业部第53号令/fwllm/zxbs/xzxk/spyj/201706/t20170606_5662411.htm人间传染的病原微生物名录 - 2006 卫生部印发(在修订中) 法定报告传染病病毒性传染病所涉及的病原微生物 法定报告传染病以外常见病毒性传染病病原微生物 国外新发现和已消灭病毒性传染病病原微生物 病毒 细菌 放线菌 衣原体 支原体 立克次体 螺旋体 真菌 病原微生物的致病风险与操作内容有关病原微生物级别的确定与各国国情有关不包括：-新发现传染病病原体，危害等级的确认？-重组病原体34名录列举了风险评估所需的重要信息中英文名称、危害等级实验活动所需生物安全级别

21、运输包装要求36人间传染的病原微生物名录高致病性禽流感病毒-卫计委注：农业部：病原微生物危害程度分类不同于卫计委37我国已消灭的传染病实验活动内容与风险评估 病毒培养：动物感染实验：指以活病原微生物感染动物的实验 未经培养的感染性材料的操作： 灭活材料的操作：无感染性材料的操作我国拟消灭的传染病病原：指导原则会随着全球消灭脊髓灰质炎病毒的进展状况而有所改变，新的指导原则按新规定执行。脊髓灰质炎病毒 (BSL-3实验室)，麻疹病毒等未知样本的操作 38见名录中病毒表格的表注未知样本的操作 在保证安全的前提下，对临床和现场的未知样本检测操作可在BSL-2或以上防护级别的实验室进行，涉及病毒分离培养

22、的操作，应加强个体防护和环境保护。要密切注意流行病学动态和临床表现，判断是否存在高致病性病原体，若判定为疑似高致病性病原体，应在相应生物安全级别的实验室开展工作。本表未列出的病原微生物和实验活动 由各单位的生物安全委员会负责危害程度评估，确定相应的生物安全防护级别。如涉及高致病性病毒及其相关实验的应经国家病原微生物实验室生物安全专家委员会论证。3940名录列举了风险评估所需的重要信息中英文名称、危害等级、实验活动所需生物安全级别、运输病原微生物实验活动风险评估时，还应考虑：病原微生物的特性（感染剂量、稳定性)传播途径（自然感染途径，实验活动感染途径）感染后果/治疗、预防措施等实验室感染事件的分

23、析与相关微生物感染有关的生物学特性微生物种类人-人间传播感染剂量潜伏期(days)疫苗稳定性炭疽芽胞杆菌No10,0001-6+Very stable天花病毒Yes1007-17+Very stable鼠疫耶尔森菌High5002-3-/+Stable土拉弗朗西斯菌No502-10+Stable病毒性出血热病毒Moderate104-21-Unstable肉毒毒素No0.001(g/kg)1-5+/-Stable41病原性细菌感染途经（含实验室感染）细菌 感染途径皮肤粘膜吸入食入 动物炭疽芽胞杆菌+百日咳鲍特菌+-布鲁菌+？+土拉弗朗西斯菌+结核分枝杆菌+？+类鼻疽伯克霍尔德菌？+-？伤寒沙门

24、菌+ ？+ ？梅毒螺旋体+-霍乱弧菌+-+-鼠疫耶尔森菌+42感染途径 -防护重点高致病性病毒感染途经（含实验室感染）病毒感染途径皮肤粘膜吸入食入 动物汉坦病毒+猴疱疹病毒+？+人类免疫缺损病毒+-？-拉沙热病毒+马堡病毒+-+埃博拉病毒+-+狂犬病病毒+-+委内瑞拉马脑炎病毒+-+43重组技术与生物安全重组表达载体由载体和宿主细胞组成质粒- 大肠杆菌为最常见的宿主菌为非致病性菌株 常规遗传工程-BSL-1实验室但根据插入外源DNA的表达产物的要求，使用不同级别的BSL实验室：-可能增加遗传改造微生物(genetically modified organism， GMO）毒性-插入的DNA序列

25、性质不确定-基因产物具有潜在的药理学活性-基因产物编码毒素 参考WHO生物安全手册，我国尚无相应的规定44风险评估生物安全委员会批准 在卫生部发布有关的管理规定之前，对于人类病毒的重组体（包括对病毒的基因缺失、插入、突变等修饰以及将病毒作为外源基因的表达载体）暂时遵循以下原则：（1）严禁两个不同病原体之间进行完整基因组的重组；（2）对于对人类致病的病毒，如存在疫苗株，只允许用疫苗株为外源基因表达载体，如脊髓灰质炎病毒、麻疹病毒、乙型脑炎病毒等；（3）对于一般情况下即具有复制能力的重组活病毒，其操作时的防护条件应不低于其母本病毒；对于条件复制型或复制缺陷型病毒可降低防护条件，但不得低于BSL-2

26、的防护条件，例如来源于HIV的慢病毒载体，为双基因缺失载体，可在BSL-2实验室操作；使用人类病原微生物的重组体45（4）对于病毒作为表达载体，其防护水平总体上应根据其母本病毒的危害等级及防护要求进行操作，但是将高致病性病毒的基因重组入具有复制能力的同科低致病性病毒载体时，原则上应根据高致病性病原体的危害等级和防护条件进行操作，在证明重组体无危害后，可视情降低防护等级；（5）对于复制型重组病毒的制作事先要进行危险性评估，并得到所在单位生物安全委员会批准。对于高致病性病原体重组体或有可能制造出高致病性病原体的操作应经国家病原微生物实验室生物安全专家委员会论证。46生物安全实验室的关键设备生物安全

27、柜高压蒸汽灭菌器生物安全实验室个人防护的关键生物安全实验室样品操作的关键防止气溶胶的产生污染废弃物的处置购置/硬件使用和维护/软件规范使用(SOP)正确维护手套、口罩、鞋套、防护服等规范/正确使用(SOP)关键环节：样品保护操作防护(皮肤、粘膜) 废弃物 消毒处置 环保风险评估病原种类(名录)操作-核酸检测 -免疫学检查 -微生物培养 -动物感染实验传播途径呼吸道肠道经血传播途径防护重点呼吸道口罩/眼罩/正压呼吸装置（粘膜）肠道不吃、不喝、不抽烟经血防锐器刺、扎伤-应急措施48动物感染模型，传播途径气溶胶还需要考虑动物操作危害的不可预见性：抓伤、咬伤、等应急措施/mostinfo/xinxif

28、enlei/fgzc/gfxwj/gfxwj2017/201707/t20170725_134231.htm依据名录IL-4的基因插入鼠痘病毒，导致实验感染鼠大量死亡-感染性增加-疫苗失保护J Virol. 2001 Feb;75(3):1205-10基因控制的生动证据2004年美国科学家在军方支持下，又成功合成了曾导致4000余万人死亡的1918年西班牙流感病毒。再造的1918流感病毒毒性极强 (BSL-4实验室)比由当代人类流感病毒复制出的病毒高出3.9万倍中国研究人员在美国科学杂志上报告：H5N1型禽流感病毒甲型H1N1流感病毒（2009）进行重组获得127株实验室重组病毒，其中某些病毒

29、株具备在哺乳动物间传播的能力。May 2013 (Science)Experts warn of danger：the new viral strains created by mixing bird-flu virus with human influenza could escape from the laboratory to cause a global pandemic killing millions of people.Appalling irresponsibility-Lord Robbort May of Oxford University, a former govern

30、ment chief scientist and past president of the Royal Society技术不难!实验条件？实验室菌株的保存和流失？、实验活动的批准？ 结果：-农业部、卫计委、认可委、科技部、基金委基因重组IL-4的基因插入鼠痘病毒，导致实验感染鼠大量死亡-感染性增加-疫苗失保护J Virol. 2001 Feb;75(3):1205-1060Outline我国关于生物安全相关法律法规（简）病原微生物实验活动的风险评估和风险控制病原微生物危害等级的分类开展实验活动需要的生物安全实验室条件（BSL-2实验室）实验活动中产生气溶胶的评估实验室设立单位管理体系的评估实

31、验室感染事件的分析实验室生物安全防护水平分级BSL-1 实验室：适用于操作在通常情况下不会引起人类或动物疾病的微生物；BSL-2实验室：适用于操作能够引起人类或者动物疾病，但一般情况下对人、动物或者环境不构成严重危害，传播风险有限，实验室感染后很少引起严重疾病，并且具备有效治疗和预防措施的微生物；BSL-3实验室：适用于操作能够引起人类或者动物严重疾病，比较容易直接或者间接在人与人、动物与人、动物与动物间传播的微生物；BSL-4实验室：适用于操作能够引起人类或者动物非常严重疾病的微生物，以及我国尚未发现或者已经宣布消灭的微生物。61生物安全实验室主要设施的分险评估BSL-1BSL-2高压蒸汽灭

32、菌器生物安全柜如果硬件条件不够软件跟上：个人防护和管理62+人员健康监督 实验室生物安全管理体系BSL-2实验室BSL-3实验室双扉高压灭菌器负压,定向流高效过滤人员防护生物安全实验室防护水平不同的关键点高压蒸汽灭菌器生物安全柜+管理制度+健康监督应到当地卫生监督所备案+完善管理体系+健康监督-国家多部门的监督检查，发改委、科技部、环保局、认可委、卫计委生物安全实验室的关键设备生物安全柜高压蒸汽灭菌器生物安全实验室个人防护的关键生物安全实验室样品操作的关键防止气溶胶的产生污染废弃物的处置购置/硬件使用和维护/软件规范使用(SOP)正确维护手套、口罩、鞋套、防护服等规范/正确使用(SOP)关键环

33、节：样品保护操作防护(皮肤、粘膜) 废弃物 消毒处置 环保风险评估病原种类(名录)操作-核酸检测 -免疫学检查 -微生物培养 -动物感染实验传播途径呼吸道肠道经血生物安全柜高压蒸汽灭菌器规范使用(SOP)正确维护BSL-2实验室的关键设备生物安全柜-验证/年检-正确使用/人员培训高压蒸汽灭菌器- 上岗培训和上岗证/培训- 灭菌效果的验证第三方灭菌效果的检测压力容器检测考虑环保节能-二次高压蒸汽灭菌的问题-消毒剂高压灭菌？消毒剂高压蒸汽灭菌器生物安全柜风险评估正确使用生物安全实验室的关键设备生物安全柜高压蒸汽灭菌器生物安全实验室个人防护的关键生物安全实验室样品操作的关键防止气溶胶的产生污染废弃物

34、的处置关键环节：样品保护操作防护(皮肤、粘膜) 废弃物 消毒处置 环保购置/硬件使用和维护/软件规范使用(SOP)正确维护手套、口罩、鞋套、防护服等规范/正确使用(SOP)“人”是实验室生物安全管理的第一要素实验室主要个人防护要求：- 病原（风险评估）- 操作内容- 仪器/设备的使用手套、口罩、鞋套、防护服等规范/正确使用(SOP)人员培训如何使用个人防护装备病原微生物操作的SOP及防护仪器/设备使用的SOP及防护传播途径防护重点呼吸道口罩/眼睛（粘膜）肠道不吃、不喝、不抽烟经血防锐器刺、扎伤-应急措施动物实验感染动物的气溶胶、意外抓咬伤的应急措施人员依从性的评估如何正确使用生物安全柜Phot

35、o by Michael Pentella, PhD人员依从性的评估-实验活动的监督-警告、禁止开展实验活动生物安全实验室的关键设备生物安全柜高压蒸汽灭菌器生物安全实验室个人防护的关键生物安全实验室样品操作的关键防止气溶胶的产生污染废弃物的处置关键环节：样品保护操作防护(皮肤、粘膜) 废弃物 消毒处置（污染/感染性）购置/硬件使用和维护/软件规范使用(SOP)正确维护手套、口罩、鞋套、防护服等规范/正确使用(SOP)70Outline我国关于生物安全相关法律法规（简）病原微生物实验活动的风险评估和风险控制病原微生物危害等级的分类开展实验活动需要的生物安全实验室条件（BSL-2实验室）实验活动中

36、产生气溶胶的评估实验室设立单位管理体系的评估实验室感染事件的分析微生物气溶胶与实验室感染Pike (1965,1976,1978),对近4000例实验室相关感染统计分析显示： 实验室相关感染主要发生在研究实验室、临床诊断实验室、动物实验室 明确原因的实验室感染(针刺、鼠咬、食入)占18 不明原因的实验室感染高达82% 不明原因的实验室感染，大多数是由于操作病原微生物时形成了感染性气溶胶并在实验室中扩散，工作人员和有关人员暴露后发生了空气传播感染。71呼吸道打喷嚏、讲话、唱歌-气溶胶 5 mM（PM2.5）入肺颗粒呼吸道病原的传播途径 气管肺泡支气管微生物气溶胶-粒径大于100m 沉降很快；-粒

37、径小于 50m 在0.4s内就扩散开；-粒径10-50 m的粒子绝大部分沉着于鼻腔；-粒径 5-10 m可进入气管和支气管；-粒径1 小时7318-20m15-187-124-6(支气管)1-5 (肺泡)低高感染性颗粒直径74传播性气溶胶直径与传播性75飞沫 气溶胶 埃博拉 流感病毒、麻疹病毒等 77可能传播的病例数Transmitting disease of Ebola Nature 2014,514:284病种 可能传播病例数 最低最高埃博拉1 2SARS2 3腮腺炎3 4天花2 5百日咳5 12麻疹6 12实验操作可造成实验室感染的风险 可产生危害性气溶胶的操作7879Outline我

38、国关于生物安全相关法律法规（简）病原微生物实验活动的风险评估和风险控制病原微生物危害等级的分类开展实验活动需要的生物安全实验室条件（BSL-2实验室）实验活动中产生气溶胶的评估实验室设立单位管理体系的评估实验室感染事件的分析生物安全管理组织体系国家地区单位上级主管部门实验室设立单位实验室生物安全管理组织体系监督管理具体管理实施和执行事故频发背后的“海恩法则” Heinrichs Law 关于飞行安全的“海恩法则” ：一起重大的飞行安全事故背后有29起轻微事故每个征兆背后有 300 起事故未遂先兆每个苗头背后还有1000 起事故隐患 几乎所有的事故灾难均由多个漏洞叠加。 认真落实规章制度、规定，

39、很多事故完全可以避免。生物安全责任事故的发生，通常都是多种因素长期作用的结果 管理和监督的重要性 -杜绝重大事故的发生，从小事做起相关单位实验室生物安全管理的比较比较因素疾病控制中心医院检验科高校工作性质（大致分类）检验（科研：检测技术、耐药等）检测/监测(科研:检测技术、分子流行病学）科研/教学为主（致病机制）接触的病原微生物临床标本病原微生物种类多未知病原临床/人群标本种类多未知病原研究种类相对较少（根据科研内容）致病性较强工作人员固定固定流动大，PI“牛人”多，以学生为多培训和演练经常经常不够经常（除BSL-3实验室以外）监督检查经常被检查经常被检查？直属管理部门卫生部、卫生局卫生局等教

40、育部、省属82关键环节：样品保护操作防护(皮肤、粘膜) 废弃物 消毒处置 环保生物安全实验室的关键设备生物安全柜高压蒸汽灭菌器生物安全实验室个人防护的关键生物安全实验室样品操作的关键防止气溶胶的产生污染废弃物的处置购置/硬件使用和维护/软件规范使用(SOP)正确维护手套、口罩、鞋套、防护服等规范/正确使用(SOP)“人”是实验室生物安全管理的第一要素83实验室废物生活垃圾污染废弃物液体废物固体废物化学消毒污水处理系统高压蒸汽灭菌集中焚烧锐器单放锐器盒（一次性）病原微生物实验室污染废弃物属于医疗废物污染废弃物的包装：分类、防漏、密闭、锐器生物安全实验室人员管理和培训生物安全实验室的构成：3个要素

41、1. 生物安全实验室的设施、设备和个人防护（硬件）2. 一定数量的经正规培训的技术工作人员（软件）3. 生物安全管理制度，及标准操作程序（软件）实验室人员的挑选、培训、淘汰对新进人员培训和指导；对有经验的人员更需开展周期性的再培训临时进入人员的培训针对不同对象、不同内容、不同背景可以采用多种形式不一定是上课形式！WHO Laboratory Biosafety Manual2004（很好的参考书-简明、通俗易懂）结合国家法规和要求-国家具体情况-实验室的具体情况/user1/biosafety/archives/2006/200642610584.html本土化87Outline我国关于生物安

42、全相关法律法规（简）病原微生物实验活动的风险评估和风险控制病原微生物危害等级的分类开展实验活动需要的生物安全实验室条件（BSL-2实验室）实验活动中产生气溶胶的评估实验室设立单位管理体系的评估实验室感染事件的分析科研实验中，研究者往往关注的是：样品不被污染-保护样品，出好的结果实验室生物安全考虑的是：样品不被污染-保护样品的同时样品不污染外界：-关注实验操作人员的防护-关注环境的保护大家+领导关心的是：- 课题、SCI收录文章、获奖科研中实验室生物安全管理面临的难题传染病重大专项评审 -生物安全1票否决制自然科学基金委项目已关注生物安全实验室以后其他科研项目可能会加强管理微生物实验室感染事件2

43、003年 新加坡、台湾SARS实验室感染事件2004年 北京SARS实验室感染事件2010年东北农业大学27名学生和1名教师因实验感染布鲁氏菌病事件美国生物安全实验室污染/感染事件（2004，2007，2014） -与实验室生物安全管理不善有关东北农业大学27名学生和1名教师因实验感染布鲁氏菌病事件2010年12月期间，东北农业大学动物医学学院由于相关教师在实验中使用了未经检疫的山羊，导致自2011年3月至5月，学校27名学生和1名教师陆续确诊感染布鲁氏菌病“羊活体解剖学实验”，上午是解剖，下午观察羊内脏布鲁氏菌主要通过眼睫膜、鼻腔黏膜和口腔感染，皮肤感染。该校的实验室生物安全管理体系存在问题

44、动物未检疫、实验活动中无防护，无消毒，未洗手912014炭疽芽胞没有充分灭活BSL-3 实验室BSL-2实验室The Bioterrorism Rapid Response and Technology (BRRAT) “Inactivated bacteria” for MALDI analysisInactivationBacteria grow2014Southeast Poultry Research Laboratory (SEPRL)U.S. Department of AgricultureH9N2BSL-2H9N2contaminatedwith H5N1BSL-3Confir

45、med H5N1ContaminationBSL-3低致病性H9N2被高致病性病毒H5N1污染H9N2- BSL-2实验室 vs H5N1 -BSL-3 实验室如何被污染的？Boston University (2004)Who: 3 researchers suspected with pneumonic tularemiaAgent: Live Vaccine Strain of Francisella tularensis (LVS stock contaminated with wild-type (Type A) virulent form of organism) 活疫苗污染了野生

46、毒力株Route of Exposure: InhalationSource: Undetermined; several procedures occurring during time period (i.e. centrifuging, vortexing, colony counts not in a BSC)OSHA fine: US$8100 (for improper use of PPE) 个人防护不当Other outcomes: City of Boston Public Health Department to survey lab; first ever City of Boston IBC (institutional biosafety committee ) review panel to review all biomedical research in city; construction of new BSL-4 labs highly controversial with publicTexas A&M University (2007)Who: