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文档简介

1、2011年9月10日2009级生物技术专业任课教师：殷建华课程微生物学实验技术题目大肠杆菌生长曲线的制作学 时讲授实验3练习行课 时间2011年12月22日第68节课 次第6次教材微生物学实验，赵斌，何绍江主编，科学出版社教具教学 目的 要求掌握用比浊法测定细菌的生长曲线；熟悉细菌生长曲线的特点及测定原理；了解微生物的计数方法。教学 重点 难点 及其 解决 方案教学重点：光电比浊法测量细菌数量的方法教学难点：细菌生长曲线的测定和绘制解决方案：通过实验加深学生理解原理；训练良好的实验操作习惯。分析实验结果，及时 纠正学生的错误。参考 资料1钱存柔，黄仪秀.微生物学实验教程.北京：北京大学出版社，

2、1999. 沈萍编.微生物学实验.北京：高等教育出版社，2002.实施 情况 小结教研室主任签名:教学过程、内容及时间分配教学方法与手段实验六大肠杆菌生长曲线的测定一、实验原理（20分钟）将少量细菌接种到一定体积的、适合的新鲜培养基中，在适宜的条件下 进行培养，定时测定培养液中的菌量，以菌量的对数作纵坐标，生长时间作 横坐标，绘制的曲线叫生长曲线。它反映了单细胞微生物在一定环境条件下 于液体培养时所表现出的群体生长规律。依据其生长速率的不同，一般可把 生长曲线分为延缓期、对数期、稳定期和衰亡期。测定微生物的数量有多种不同的方法。本实验采用比浊法测定，由于细 菌悬液的浓度与光密度（OD值）成正比

3、，因此可利用分光光度计测定菌悬液 的光密度来推知菌液的浓度，并将所测的OD值与其对应的培养时间作图， 即可绘出该菌在一定条件下的生长曲线。二、实验材料及方法（100分钟）实验材料菌种：大肠杆菌培养基：牛肉膏蛋白胨培养基仪器和器具：721分光光度计，比色皿，摇床。实验方法步骤：菌液f标记f接种f培养f测定1、制备菌液：取大肠杆菌斜面菌种1支，接入牛肉膏蛋白胨培养液中 （250ml/500ml），静置培养 18h。2、标记编号：取试管11个，分别编号为：空白、0、1、3、5、7、9、 11、 24、 48、 72h。3、接种培养：用2ml无菌吸管分别准确吸取2ml菌液加入三角瓶中，于 37C下振荡培养。然后分别按对应时间从三角瓶中取出10ml菌液注入试管 中，立即放冰箱中贮存，待培养结束时一同测定OD值。4、生长量测定：将未接种的牛肉膏蛋白胨培养基（空白）倾倒入比色皿 中，选用600nm波长分光光度计上调节零点，作为空白对照，并对不同时间 培养液从0 h起依次进行测定，对浓度大的菌悬液用未接种的牛肉膏蛋白胨 液体培养基适当稀释后测定，使其OD值在0.20.8以内，经稀释后测得的 OD值要乘以稀释倍数，才是培养液实际的OD值。5、绘制生长曲线：以培养时间为横坐标，以OD值为纵坐标绘制生长曲 线。讲授法重点讲解光电比浊法 的原理，生长曲线的 原理。讲授法教学

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