临床分子生物学检验技术教材大纲前六章

1、第一节临床标本的处理一. 临床标本处理的一般原则（一 ）标本采集的时间和注意事项（二 ）标本的类型和数量（三 ）标本采集部位的准备（四 ）标本的运送（五 ）标本的保存（六 ）标本处理中的生物安全问题二、常见临床标本的处理方法（一 ）血液标本. 全血标本.血清 （浆 ）标本.外周血单个核细胞（二 ）棉拭子（三 ）体液标本（四 ）痰液标本（五 ）组织标本（六 ）细胞标本第二节生物样本分离纯化与质量鉴定一、生物样本分离纯化策略、 DNA 的分离纯化（一 ）基因组DNA 的纯化（二 ）吸附柱法提取DNA（三 ）质粒DNA 的分离纯化（四 ）线粒体DNA 的分离纯化（五 ）血浆中游离DNA 的分离纯化.

2、 RNA 的分离纯化（一）总 RNA 的制备（二） mRNA 的制备（三 ）循环miRNA 的制备（四 ）长链非编码RNA 的制备四、自动化核酸提取系统五、蛋白质的分离纯化（一 ）蛋白质的性质与纯化原则（二 ）从细胞或组织中提取蛋白的常用方法. 根据蛋白分子大小不同分离纯化.根据蛋白分子溶解度不同分离纯化.根据蛋白表面电荷不同分离纯化.采用配体的特异性亲和力分离纯化（三 ）膜蛋白的分离与纯化六、核酸和蛋白的鉴定（一 ）核酸的鉴定. 核酸含量测定.核酸的纯度鉴定.核酸的完整性检测（二 ）蛋白质的鉴定第一节临床分子生物学检验技术的发展一.从分子生物学到临床分子生物学检验二. 临床分子生物学检验技术

3、的发展第二节临床分子生物学检验技术应用一.病原生物基因组.菌种鉴定.确定病毒感染和病毒载量.病毒分析.细菌耐药监测和分子流行病学调查二、基因变异.致病基因的分子缺陷.线粒体基因突变.肿瘤相关基因. DNA 重排形成融合基因三、基因多态性.基因定位和遗传病相关性分析.药物代谢酶与血药浓度.疾病诊断和遗传咨询.多基因病的研究.器官移植配型和个体识别四、循环游离核酸.循环游离核酸与肿瘤.游离核酸与产前诊断.循环 microRNA 与肿瘤诊断第三节临床分子生物学检验发展与应用. 临床分子生物学检验与感染性疾病诊断与治疗二、遗传性疾病的临床分子生物学检验三、肿瘤的临床分子生物学检验四、临床分子生物学检验

4、与个体化医学第一节分子生物标志物的概念与分类一、生物标志物的概念与分类.分子生物标志物的概念与分类（一 ） DNA 生物标志物（二 ） RNA 生物标志物（三 ）蛋白质生物标志物第二节核酸分子生 物标志物一、基因组和基因组特征（一 ）原核生物基因组. 原核生物基因组特征.质粒（二 ）病毒基因组. 基因组的碱基组成.基因组的核酸类型.基因组中有基因重叠现象.基因组中具有操纵子结构.病毒基因可连续也可间断.基因组中重复序列少.基因组中非编码区少.基因组是单倍体.相关基因丛集. 病毒基因组含有不规则结构基因（三 ）人类基因组. 单一序列.重复序列.多基因家族和假基因二、基于基因突变的分子生物标志物（

5、一 ）点突变错义突变无义突变RNA 加工突变（二 ）插入 / 缺失突变（三 ）动态突变三、基于基因多态性的分子生物标志物（一 ）限制性片段长度多态性（二 ）小卫星和微卫星多态性（三 ）单核苷酸多态性（四 ）拷贝数多态性四、基于 DNA 甲基化修饰的分子生物标志物五.基于转录产物的分子生物标志物mRNA 标志物miRNA 标志物（三）长链非编码RNA 标志物六、基于线粒体DNA 的分子生物标志物七、基于循环核酸的分子生物标志物（一 ）循环肿瘤细胞DNA（二 ）母体血清中的胎儿DNA（三 ）循环DNA 的其他应用（四 ）血浆RNA第三节分子生物标志物的发 现与评价一.高通量技术与分子生物标志物的发

6、现（一 ）基因组学（二 ）转录组学（三 ）蛋白质组学（四 ）代谢组学二、分子生物标志物的特征和评估（一 ）分子生物标志物的特征（二 ）分子生物标志物评估的基本统计学方法（三 ）生物标志物的评价阶段第一节核酸分子杂交的概念一.核酸探针（一 ）核酸探针的种类DNA 探针RNA 探针寡核苷酸探针（二 ）探针的长度.DNA 和 RNA 探针.寡核苷酸探针（三 ）核酸探针的标记. 探针标记物的选择.探针标记方法的选择二、分子杂交信号检测（一 ）放射性标记探针检测. 放射自显影.液体闪烁计数法.（二 ）非放射性标记探针的杂交检测. 酶促显色检测.荧光检测.化学发光检测.多探针检测第二节经典的核酸分子杂交技

7、术一、固相杂交（一 ）反向点杂交1. 反向点杂交的原理2.反向点杂交法的应用（二 ） Southern 印迹杂交1.Southerm 印迹杂交的原理2.Southern 印迹杂交的应用（三 ） Northem 印迹杂交.Northerm 印迹杂交的原理.Northem 印迹杂交的应用二、液相杂交三、原位杂交第三节 DNA 芯片技术. DNA 芯片的概念、 DNA 芯片原理三， DNA 芯片技术（一 ）芯片制备探针的设计载体选择与预处理DNA 芯片制备（二 ）样品的制备四、杂交与结果分析. 杂交反应.杂交信号的检测.数据分析五、 DNA 芯片在医学中的应用1. 基因表达分析.基因型、基因突变和多态性分析.疾病诊断.药物筛选.指导用药及治疗方案.预防医学第四节影响杂交信号检测的因素一.探针的选择二、探针的标记方法三.探针的浓度四、杂交率五、杂交温度六，杂交的严谨性七、杂交反应时间八、杂交促进剂第一节靶序列扩增一.PCR扩增技术（一）PCR技术原理及基本过程（二）PCR反应体系及扩增参数. 反应体系.扩增参数二、其他PCR技术，（一）多重 PCR（二）序列特异PCR（三）逆转录PCR（四 ）巢式 PCR（五）转录依赖扩增系统（六）随机引物PCR（七）全基因组扩增（八）微乳液扩增（九）锚定扩增（十）长片段PCR三、PCR产物分析（一）PCR-限制性片段长