分光光度法的具体步骤

1、 HYPERLINK /view/168b8186bceb19e8b8f6ba5b.html /view/168b8186bceb19e8b8f6ba5b.html HYPERLINK /view/923046.htm /view/923046.htm一、开机开机前将样品室内的干燥剂取出，确认电源是否连接。打开仪器电源开关，等待仪器自检通过，自检过程中禁止打 开样品室。二、使用仪器自检结束后（7个自检项目均出现OK字样），按MAIN MENU键（主菜单），屏幕显示如下5个功能项：1. Phtometry（定量运算）；2.Wavelength Scan （波长扫描模式）；3.Time Scan（

2、时间曲线扫描）；4.System（系统校正）； 5.Data display（光度直接测量模式）。按相应选项前的数字键，即可进入该选项的下一级子菜单。目的规范Cary100紫外可见分光光度计的使用和维护。适用范围本规程适用于Cary100紫外可见分光光度计的使用和维护。职责研发实验室负责人负责本文件的起草，实验室仪器管理员负责Cary100紫外可见分光光度计的日常使用和维护。系统组成本系统由Cary100紫外可见分光光度计主机、Cary Winuv软件、Dell计算机等组成。程序5.1接通电源，打开机算计、主机电源开关，仪器进行自检。5.2自检结束后，双击“Cary winUV”图标。主机同时

3、会发出吱吱的声响（表示脉冲电源正常工作）。5.3单波长扫描在 Cary winUV 文件夹下双击 Simple Reads” 快捷键，进入“Simple ReadsOnline”状态。在该程序下点击“Setup”，对所需的波长、信号平均时间（Ave time （s）、狭缝宽度（SBW（nm）、Y 一轴参数设置 等参数进行设置，设好后，按“OK”返回。5.3.2在参比池、样品池中放空白液，关上盖板，单击“Zero”图标，完成较零。5.3.3取出样品池，用待测溶液冲洗数次后，倒入待测溶液，单击“READ”读数；继续放入样品按“READ”读数， 直到全部样品读完。5.3.4用编辑菜单完成数据整理。5

4、.3.5按Print打印报告，完成测试。5.4全波长扫描5.4.1在Cary winUV文件夹下双击“Scan”快捷键，进入“Scan Online”状态。在该程序下点击“Setup”，进入参数设置页面。分别对“Cary”、“Options”、“Baseline”、“Reports”、Auto Store” 项下参数进行设置。设好后，按“OK”返回。5.4.2在参比池、样品池中放空白液，关上盖板，单击“Baseline”图标，仪器开始对设定的波长范围进行扫描。5.4.3扫描结束后，将样品池中空白溶液更换为待测样品溶液，单击START”，输入所要保存的文件名，按“ OK 后 开始扫描；继续放入样

5、品按“ START ”扫描，直到全部样品扫描结束。5.4.4如果需要可以用编辑菜单对数据进行整理。5.4.5按Print打印报告，完成测试。5.5标准曲线在 Cary winUV 文件夹下双击Concentration”快捷键，进入“ConcentrationOnline”状态。在该程序下点击 “Setup”，进入参数设置页面。分别对 “Cary”、“Standards”、“Samples”、“Reports”、Auto Store” 项下参数进行设置。设好后，按“OK”返回。5.5.2在参比池、样品池中放空白液，关上盖板，单击“Zero”图标，完成较零。5.5.3按所设定的标准样品顺序，单击

6、“READ”依次对标准样品进行测定。5.5.4标样测试完毕后，更换待测样品，单击“READ”进行待测样品测试。5.5.5读数完毕后，如果需要可以用编辑菜单对数据进行整理。5.5.6按Print打印报告，完成测试。5.6编辑、调用方法5.6.1新编一个方法步骤，以Concentration为例。单击Setup功能键，进入参数设置页面。 按 Cary ControlStandardsOptionsSamplesReportsAuto store 顺序，设置好每页的参数。然后按 OK 回 到浓度主菜单。单击View莱单，选择好需要显示的内容。基本选顷 Toolber； buttons； Graphi

7、cs； Report。单击Zero放空白到样品室内，按OK。提示：Load blank press ok to read （放空白按 ok 读）。单击Start.出现 标准/样品 选择页。Solutions Available （溶液有效）。此左框中的标准或样品为不需要重新测量的内容。Selected for Analysis （选择分析的标准和样品）。此右框的内容为准备分析的标准和样品。按ok进入分析测试。Present std1 （1.0 g/l） 提示：放标准1然后按OK键进行读数。Press OK to read.放标准2按OK进行读数。直到全部标准读完。 Present Sample

8、1 press OK to read.放样品1按OK开始读样品，直到样品测完。为了存标准曲线在方法中，可在测完标准后，不选择样品而由File文件菜单中存此编好的方法。以后调用此 方法，标准曲线一起调出。5.6.2运行一个已存的方法（方法中包含标准曲线）。单击Filef 单击Open Method选调用方法名f 单击Open.单击Start开始运行调用的方法。如用己存的标准曲线，在右框中将全部标准移到左框。按OKf进入样品测试。按提示完成全部样品的测试。按Print键打印报告和标准曲线。如要存数据和结果，单击File文件。选Save Data As.在下面File name中输入数据文件名，单击

9、Save即可保存。其它软件包如Scan软件操作步骤相同，具体内容有些差别，请按屏幕提示操作。5.7试验结束后，取出比色皿，洗净。关上主机盖板。关闭电脑，总电源。盖好仪器防尘罩。5.8清理仪器、实验台面，填写使用记录。 HYPERLINK /view/e405520316fc700abb68fc45.html /view/e405520316fc700abb68fc45.html722型分光光度计的使用方法操作方法（1）将灵敏度旋钮调整1档（放大倍率最小）。（2）开启电源，指示灯亮，仪器预热20分钟，选择开关置于T（3）打开试样室盖（光门自动关闭），调节0%T旋钮，使数字显示为00.0。（4）将

10、装有溶液的比色皿放置比色架中。（5）旋动仪器波长手轮，把测试所需的波长调节至刻度线处。（6）盖上样品室盖，将参比溶液比色皿置于光路，调节透过率100%T旋钮，使数字显示为100.0T（如果显示不到100%T，则可适当增加灵敏度的档数，同时应重复3，调整仪器的00.0”）（7）将被测溶液置于光路中，数字表上直接读出被测溶液的透过率（T）值。（8）吸光度A的测量，参照36调整仪器的00.0和100.0，将选择开关置于A旋动吸光度调零旋钮，使得数字 显示为.000，然后移入被测溶液，显示值即为试样的吸光度A值。（9）浓度C的测量，选择开关由A旋至C,将已标定浓度的溶液移入光路，调节浓度按钮，使得数字

11、显示为标定 值，将被测溶液移入光路，即可读出相应的浓度值。（10）仪器在使用时，应常参照本操作方法中36进行调00.0和100.0的工作。（11）每台仪器所配套的比色皿不能与其它仪器上的比色皿单个调换。（12）本仪器数字显示后背部，带有外接插座，可输出模拟信号，插座1脚为正，2脚为负接地线。（13）如果大幅度改变测试波长时，需等数分钟后才能正常工作。（因波长由长波向短波或短波向长波移动时，光 能量变化急剧，光电管受光后响应较慢，需一段光响应平衡时间。用来测量和记录待测物质对可见光的吸光度并进行定量分析的仪器，称为可见分光光度计。一、原理当一束单色光照射待测物质的溶液时，当某一定频率（或波长）的

12、可见光所具有的能量（hf）恰好与待测物质分子 中的价电子的能级差相适应（即AE=E2-E1=hf）时，待测物将对该频率（波长）的可见光产生选择性的吸收。用可 见分光光度计可以测量和记录其吸收程度（吸光度）。由于在一定条件下，吸光度A与待测物质的浓度C及吸收地 长度l的乘积成正比，即A= KCL所以，在测得吸光度A后，可采用标准曲线法、比较法以及标准加入法等方法进行定量分析。二、结构722型光栅分光光度计的结构722型光栅分光光度计，采用自准式色散系统和单光束结构，色散元件为衍射光栅，使用波长为330 800 nm数 字显示读数还可以直接测定溶液的浓度。其外形如图2 39。1数字显示器2吸光度调

13、零旋钮3选择开关4吸光度调斜滤按钮5浓度旋钮6光源室7电源开关8波长手轮9波长刻度板10试样架拉手11 100%T旋钮12干燥器图2 39 722型分光光度计三、使用方法722型光栅分光光度计的使用方法（1）操作步骤在接通电源前，应对仪器的安全性进行检查，电源线接线应牢固，接地线通地要良好，各个调节旋钮的起始位置 应该正确，然后再接通电源。将灵敏度派或调至“1”档（放六倍率最小）。调彼长调节器至所需波长。开启电源开关，指示灯亮，选择开关置于“T”，调节透光度“100% ”旋钮，使数字显示“100.0”左右，预热20 分钟。打开吸收地暗室盖（光门自动关闭），调节“0”旋钮，使数字显示为“00.0

14、”，盖上吸收地盖，将参比溶液置于光 路，使光电管受光，调节透光度“100% ”旋钮，使数字显示为“100.0”。如果显示不到“100”，则可适当增加电流放大器灵敏度档数，但应尽可能使用低档数，这样仪器将有更高的稳定 性。当改变灵敏度后必须按重新校正“0”和“ 100”。按连续几次调整“00.0”和“ 100”后，将选择开关置于A，调节吸光度调零旋钮，使数字显示“.000”。然后 将待测溶液推入光路，显示值即为待测样品的吸光度值A。浓度C的测量。选择开关由“A”旋至“C”，将标准溶液推入光路，调节浓度旋钮。使得数字显示值为已知标准 溶液浓度数值。将待测样品溶液推入光路，即可读出待测样品的浓度值。