DNA琼脂糖凝胶电泳ppt课件(PPT 26页)

1、DNA琼脂糖凝胶电泳 姓名：徐秀倩 学号：3160481 导师： 吴小芹.第1页，共26页。 实验原理琼脂糖为链状多糖 绳状琼脂糖束大网孔型 凝胶 分离、鉴定、纯化DNA影响DNA迁移率的因素：DNA分子的大小、构 象，凝胶浓度，电压，电泳缓冲液的组成缓冲液pHDNA Pi，DNA带负电荷，迁移率与 分子量对数成反比DNA分子构象影响迁移率：共价闭环DNA线 状DNA开环DNA.第2页，共26页。不同浓度琼脂糖分离DNA分子的范围琼脂糖浓度（%） 分离范围（kb） 0.3 5-60 0.6 1-20 0.7 0.8-10 0.9 0.5-7 1.2 0.4-6 1.5 0.2-4 2.0 0.

2、1-3.第3页，共26页。琼脂糖凝胶中DNA的观察溴化乙锭（EB）DNA：紫外光下 红色荧光.第4页，共26页。主要实验器材电泳仪电泳槽缓冲液琼脂糖凝胶槽梳子取液器溴酚蓝.第5页，共26页。电泳槽结构.第6页，共26页。操作步骤琼脂糖凝胶的制备：溶化，冷却，EB凝胶板的制备：加梳子，倒胶样品的制备：样品+1/5体积溴酚蓝加样：加样端为负极（黑）电泳：5V/cm观察：紫外灯下观察，照相.第7页，共26页。 溶 胶.第8页，共26页。准备胶槽.第9页，共26页。凝胶冷却至50C，加EB至终浓度0.5g/ml.第10页，共26页。铺 胶.第11页，共26页。凝胶凝固后取出梳子.第12页，共26页。加

3、缓冲液.第13页，共26页。 准备样品.第14页，共26页。点 样.第15页，共26页。电 泳.第16页，共26页。注意观察溴酚蓝染液的迁移.第17页，共26页。紫外灯下观察电泳结果.第18页，共26页。 照 相.第19页，共26页。相关实验 对琼脂糖凝胶电泳分离DNA 片段的有效性的再认识.第20页，共26页。琼脂糖凝胶电泳分离DNA 片段的基本原理 DNA 为多元酸，在中性或弱碱性缓冲液中带负电荷而向阳极泳动 由于不同DNA 分子在同一凝胶中迁移速率不一样， 电泳一段时间后可将其分开。.第21页，共26页。材料 铜绿假单胞菌噬菌体PaP1 基因组DNA ，按常规提取，置-20 保存备用。A

4、garose 、限制性内切酶EcoR为上海生工生物工程有限公司产品。从凝胶中小量回收DNA 片段的试剂盒为上海华舜生物工程有限公司产品，1 kb DNA Ladder为MBI 产品。.第22页，共26页。方法琼脂糖凝胶电泳 用1TAE 配制0.8 %琼脂糖凝胶， 电泳缓冲液为1 TAE，电压为5 V/ cm ，电泳1 h ，用溴化乙锭或LIGHTBLUE Dye 显色。.第23页，共26页。结果 电泳后在日光下(LIGHTBLUE Dye 染色)或在紫外灯下(溴化乙锭染色)切取含“ 单一” 目的DNA 分子的胶条并称重，用小量胶回收试剂盒回DNA。 .第24页，共26页。 在3 个大的目的DNA 片段1、2 和3(分别约为10 、7、4.5 kb)之后有很多的较小片段(从大约3.5 kb 到100 bp不等)。在日光下(用LIGHTBLUE Dye 显色)分别切取含有单一目的片段1、2、3 的