色谱定性定量分析方法课件

1、China Pharmaceutical University 色谱定性定量分析方法12022/7/20色谱分析方法验证色谱定量分析方法联用技术定性方法色谱定性分析方法22022/7/20一、色谱定性分析方法 保留时间 tr相对保留时间 RRT，t/tr相对保留值 , (t-t0)/(tr -t0）保留指数 I 32022/7/20 色 谱 高分离能力，但鉴别结构的能力较弱。 光 谱 能提供丰富的结构信息，但是对分析物纯度较高。二、色谱-光谱联用技术定性广泛用于药物中的杂质、体内外代谢产物的结构鉴定42022/7/20气相色谱-质谱联用多用于分离易挥发、热稳定、极性小的化合物GC-MS：采用E

2、I离子源。EI：获得分子离子峰及丰富的分子结构信息；52022/7/20分离对象较广LC-MS：采用API 离子源;一级质谱获得分子量信息；高裂解电压（CID）或二级质谱（MS/MS）获得分子结构信息。液相色谱-质谱联用62022/7/20例：盐酸乙哌立松片主要降解产物的定性鉴别 72022/7/20鉴定要点：1、利用LC-UV选择最佳LC分离条件，并确定主峰与降解产物的峰位；供试品溶液的LC-UV图 82022/7/202、选择合适的离子源，利用LC-MS获得杂质的准分子离子峰。 LC-ESI-MS的 总离子流色谱图 LC-APCI-MS的 总离子流色谱图 92022/7/203. 获得降解

3、产物准分子离子峰的裂解信息。方式一：在APCI条件下采用较高的CID电压或二级质谱裂解m/z 175.3，获得碎片信息；方式二：在GC-MS(EI)质谱获得分子离子峰及其裂解途径；102022/7/204、利用原药的质谱裂解途径确定降解产物的可能结构；杂质YJ的结构112022/7/20APCIEI122022/7/20联用技术定性鉴定规律1、分析物质结构，确定色谱分离模式；2、以常用检测器（GC:FID/LC:UV）为手段，优化色谱分离条件，确定待鉴定组份峰位；132022/7/203、根据化合物结构，选用合适的光谱技术鉴定；4、依据光谱信息进行结构鉴定： 根据质谱提供的分子量和分子碎片信息

4、，结合原药的光谱信息初步推断未知物结构；142022/7/20三、色谱定量分析方法1、色谱信号的测量: 色谱峰峰高与峰面积反映检测器对样品的响应值，定量分析中峰面积更为常用；2、定量分析的方法 面积归一化法；外标法；内标法；标准曲线法 152022/7/20三、不同检测器的色谱信号与物质浓度关系 FID、ECD、UV检测器的响应（峰面积）与样品的浓度呈线性关系； ELSD响应的自然对数与样品的浓度或质量呈线性关系； 质谱（MS-ESI）检测器高浓度时的响应与样品的质量可能呈二次或更复杂的方式。162022/7/20四、色谱分析方法验证 目的： 证明所采用的色谱分析方法适合于相应的检验要求，判断

5、能否用于药品分析。 效能指标：评价分析方法的尺度效能指标包括: 精密度、准确度、专属性、检测限、定量限、线性与范围、耐用性、稳定性、系统适用性等172022/7/20 药品质量标准分析方法验证 药物制剂人体生物利用度和生物等效性试验指导原则 药物稳定性试验指导原则 缓释、控释制剂指导原则不同分析测定方法的要求182022/7/20 专属性（specificity）: 意义：指有其他成分可能存在情况下，采用的方法能准确测定出被测物的特性。 内容： 药物制剂含量测定时的专属性考察内容：A、杂质中间体与主成份的分离情况；B、破坏性试验产生的降解产物与主成份的分离情况：酸、碱、热、氧化、光破坏C、辅料

6、是否干扰测定。192022/7/20准确度（accuracy）： 意义：测量值与真实值接近的程度。 药物制剂的含量测定以回收率表示。 内容：即通过在空白基质中加入已知量不同浓度的对照品，比较测定值和加入值确定。 一般在期望浓度的80%、100%、120%三个水平量，各测定三次，回收率均值在98-102%。 202022/7/20线性范围（linearity range）： 意义： 待测物浓度与响应值成线性关系的浓度范围； 内容：用不同浓度对照品溶液分析测定（至少5种），以峰面积与浓度进行线性回归。 制剂分析时方法要求r不小于0.999；生物样品分析要求r不小于0.99，与准确度的要求有关系。

7、注意：与定量方法中标准曲线法的异同。212022/7/20精密度（precision）：意义：同一样品多次测量值之间相互接近的程度。内容：重复性: 同一实验室,同一人多次测定的精密度中间精密度: 同一实验室，不同人，不同仪器测定的精密度 重现性: 不同实验室，不同人测定的精密度 制剂分析时精密度RSD应不小于2%。222022/7/20检测限和定量限（LOD and LOQ）：意义： LOD是能检测到的最低量，S:N=3:1。 LOQ是能定量测定的最低量，S:N=10:1。内容： 生物样品分析时定量下限即为标准曲线最低浓度点，定量上限即位标准曲线最高浓度点。232022/7/20稳定性（stability）：意义： 考察分析样品与试剂在一定时间内稳定性。内容： 根据样品与试剂测定时实际可能所处的环境进行考察。 242022/7/20耐用性（ robustness ）：意义： 考察测定条件发生小变动时测定结果的变化。内容： 流动相的组成