第5节临床常用免疫学检查

1、第5节临床常用免疫学检查临床常用免疫学检查 血清免疫球蛋白检测 血清补体检测 细胞免疫检测 肿瘤标志物检测 自身抗体检测 器官与骨髓移植的检测血清免疫球蛋白检测 免疫球蛋白（immnoglobulin,Ig）是B细胞在识别抗原后增殖、分化细胞所分泌的具有抗体活性和/或抗体样结构的球蛋白。存在于机体的血液、体液、外分泌液和淋巴细胞膜上。用免疫电泳可将其分为5类IgG、A、M、D、E。 免疫球蛋白有特异性识别抗原的功能，即一种抗体只能与相应的抗原决定簇反应。免疫球蛋白贯穿机体免疫应答的全过程，对免疫应答的产生、发展、调节均有重要的影响。一免疫球蛋白（IgG） IgG是血清中最主要的免疫球蛋白，约占

2、血清总量的75%，IgG是唯一可通过胎盘从母体转移到胎儿的免疫球蛋白。正常情况成人高于儿童，女性略高于男性。【临床意义】 IgG增高 多克隆性增高： IgG、A、M增高 。 单克隆性增高： 某一种Ig增高。主要见于 免疫增生性疾病，如（MM）。 IgG减低 先天性、获得性、联合免疫缺陷病，重链、 轻链病，肾病综合症、病毒感染 。二免疫球蛋白（IgA） 正常人血清中 IgA含量占血清总 Ig的10%15%，仅次于 IgG为（7103350mg/L）。 IgA分为血清型IgA与分泌型（SIgA）两种。分泌型（SIgA）的免疫功能更重要，具有保护黏膜的功能，与局部感染、炎症、肿瘤等病变密切相关。【临

3、床意义】 增高：IgA型MM、慢性炎症、类风关、肝硬化、肾病等。 降低：选择性IgA缺乏症、重链、轻链病、呼吸道感染、自身 免疫病、原发和继发性免疫缺陷病。三免疫球蛋白（IgM） IgM是分子量最大的Ig，为950000，约占血清总Ig的10%，以五聚体形式存在，它不能透过血管璧，主要分布在血管内，有防止败血症的发生的重要作用。 人体感染之后，IgM出现最早。【临床意义】 增高：初期病毒感染、自身免疫病，原发型巨球蛋白血症。 减低：IgG型或IgA型MM、先天性免疫缺陷病、淋巴系统肿 瘤 、肾病综合症、免疫抑制剂治疗后。四免疫球蛋白（IgE） IgE仅占血清总 Ig的0.002%。 是一种亲细

4、胞抗体，主要的生物学功能是参与I型变态反应。此外，还参与抗寄生虫感染等。【临床意义】 增高：IgE型MM、重链病、肝病、自身免疫病、各种 过敏性疾病、寄生虫感染、免疫复合物引起的 肾炎等， 减低：先天性和获得性丙种Ig缺陷病、恶性肿瘤、微 血管扩张共剂失调症、长期可的松治疗。五种免疫球蛋白的生物化学特性 免疫球蛋白 血清含量 /L 占血清Ig% 沉降系数 电泳位置 抗原结合价 产生顺序 IgG 816g/L 7080 7 ra-a1 2 2 血清型IgA 7103350mg 1015 6.614 ra-a 2 3 分泌型 IgA 不等 4 3 IgM 0.482.12g 510 1819 r1

5、-1 10 1 IgD 0.60.2mg 0.021 7 r1 2 4 IgE 0.10.9mg 0.002 8 r1 2 5五血清M蛋白 M蛋白或称单克隆免疫球蛋白，由浆细胞异常增殖所产生的，具有相同分子结构和电泳迁移率免疫球蛋白，但不具有抗体活性。 参考值 蛋白(免疫)电泳、免疫比浊：正常人为阴性【临床意义】 多发性骨髓瘤：IgG型IgA型，IgD和IgE罕见 巨球蛋白血症：大量的单克隆IgM 重轻链病：Ig重链（、）；单克隆游离轻链 半分子病：由一条重链和一条轻链组成的单克隆Ig片段异常增生 7SIgG病：恶性M蛋白病 血清补体检测 补体(complement ,C) 是一组具有酶原活性

6、的糖蛋白,是抗体发挥溶细胞作用的必要条件。 按先后顺序分别称为C1(C1q、C1r、C1s)C9。参与旁路途径中的成分则以因子命名，如B、D、P、H、I等。 在炎症组织内的补体有90%是血清中扩散而来，补体+体液因子+免疫细胞共同参与机体的抗感染免疫反应。具有介导细胞溶解、调理吞噬、免疫黏附以及参与炎症反应引起的机体免疫损伤等作用。 免疫复合物既能启动补体系统活化途径，也能启动补体替代途径。 补体系统的基本特征：补体作用无特异性，与反应体系中的抗原抗体复合物结合。补体系统有两个放大系统，一是由少量C1q引起酶级联反应，使许多C3分子被分解；另一个是C3转化酶的正调节作用。不稳定性，一些补体成分

7、（如C1、C2、C5、C8）性质不稳定，经56oC30min处理就丧失活性。即使在10oC下，其活性不能保持34d，故需放置-20oC以下保存。 连锁反应，补体成分以非活性蛋白前体存在于血浆中，当补体第1个成分被激活后，依次地活化直至最后一个补体成分。被激活的成分具有酶或其它生物学活性。作用的两面性，激活的补体有生理和病理方面作用，前者表现为抗感染防御，溶解病原体，清除免疫复合物和调节免疫功能等作用；后者表现为引起组织损伤，参与免疫病理过程。一. 总补体溶血活性（CH50）测定原理： 补体（C1C9）能使溶血素（抗体）致敏的绵羊红细胞溶解。既抗原抗体复合物激活待测血清中的C1，从而引起补体传统

8、活化途径的连锁反应，最终导致羊红细胞溶解。 补体溶血程度与活性相关，呈一特殊的S曲线。一般以50%溶血作为检测终点（即CH50）。【临床意义】 活性增高：急性炎症、感染、 组织损伤、恶性肿瘤等 活性减低：各种免疫性复合物 性疾病，合成不足见于急 慢性病毒性肝炎和遗传性 补体成分缺 陷症等。二. 补体C3检测 补体C3是一种由肝脏合成的2-球蛋白，在补体系统中含量最高，是传统和旁路途径被激活的关键物质。【临床意义】 1. 增高：急性炎症、传染病早期、肿瘤、排异反应等。 2. 减低：急性肾小球肾炎、部分自身免疫病患者。 3. 血清补体C3活性的检测对疾病的进程和疗效判断提 供了重要的依据。三. 补

9、体旁路B因子检测 补体旁路B因子是一种不耐热的-球蛋白。 B因子是补体旁路活化途径中的一个重要成分，又称C3激活剂前体。 【临床意义】 1. 增高：某些自身免疫性疾病、肿瘤、肾病综合症等 2. 减低：肝病、急性肾小球肾炎、自身免疫性溶血性 贫血等 肿瘤标志物检测 恶性肿瘤是给人类带来深重苦难的疾病，严重威胁着人类健康。据统计，我国每年约有160万人患肿瘤，100万人以上死于肿瘤。 肿瘤的及时发现与诊断，对于肿瘤患者提高治愈率及延长生命是至关重要的。肿瘤的诊断除了临床、影象学、病理外，临床实验室辅助检测手段，主要是测定肿瘤患者血液和体液中的肿瘤标志物。一肿瘤的概念 肿瘤（tumor）是细胞呈现不

10、能控制和进行性生长为特征的一类异常肿块。肿瘤的细胞生物学行为： 生长缓慢、有完整包膜、与周围组织 良性肿瘤 分界清楚和不发生转移肿瘤 恶性肿瘤 生长快、无完整包膜、向邻近组织侵润 生长和向远处转移，严重危害人的生命 肿瘤标志物（tumor marker,TM）是指在肿瘤的发生和增殖过程中，由肿瘤细胞本身所产生的或者是由机体肿瘤细胞反应而产生的，反映肿瘤存在和生长的一类物质，包括蛋白质、激素酶（同工酶）、多胺及癌基因产物等。可用生物化学、免疫学及分子生物学等方法进行测定。对肿瘤的辅助诊断、鉴别诊断、疗效观察、病情监测以及预后的评价具有一定的价值。肿瘤标志物定义：二. 蛋白质肿瘤标志物的检测 （1

11、）甲胎蛋白（alpha-fetoprotein，AFP） 参考值 RIA 和ELISA法；成人25g/L 是胎儿早期由肝脏合成的血清中主要的蛋白质。胎儿在1216周时血浆中含量可达到3000g/L，随后逐渐降低，出生后AFP合成很快受抑制，周岁婴儿的浓度接近成人水平。 一般健康成人血浆AFP浓度20g/L。当肝细胞或生殖腺胚胎组织发生恶性病变时，有关基因重新激活，原来已丧失合成aFP能力的细胞重新开始合成，血中aFP含量升高。 临床意义 成人血清AFP升高见于：（1）原发性肝癌(70-90%)可在症状出现前6-12个月作出诊断，大于300g/L，是原发性肝癌重要的指标。但约有18%的病人AFP

12、不升高。（2）病毒性肝炎，肝硬化患者AFP浓度有不同程度升高，但其水平通常低于300g /L。（3）生殖腺胚胎癌（睾丸癌、卵巢癌、畸胎瘤 等），胃癌或胰腺癌时AFP升高。（4）孕妇血清AFP增高，中期达高峰，多 15 g /L。临床意义（1）消化道恶性肿瘤：整个胃肠道恶性肿瘤均可增高。非消化道恶性肿瘤：如卵巢癌、乳腺癌、肺癌等也有不同程度升高。（2）CEA连续随访监测，可用于恶性肿瘤手术后或化疗患者的疗效观察及预后判断。一般情况下，病情好转时血清ECA浓度下降，病情恶化时升高。（3）CEA与其它肿瘤标志物结合测定可提高癌肿的检出率。检测胸、腹水或胃液的CEA含量对鉴别诊断有意义。 （4）非肿瘤

13、性疾病：肠道憩室、直肠息肉、结肠炎、肝硬化、肝炎和肺部疾病ECA也有不同程度的升高，但阳性率较低。大量吸烟者、妊娠也可增高。二. 蛋白质肿瘤标志物的检测 （3）前列腺特异性抗原 (Prostate specific antigen，PSA) 血清PSA 分子形式： 复合型PSA (t-PSA) 参考值 4.0 g /L F/T比值0.25游离型PSA (f-PSA) 参考值 1 g /L （PSA）是一种仅由前列腺上皮细胞分泌的糖蛋白，当正常腺管结构遭到良性、恶性肿瘤或炎症的破坏时，其血浆中PSA水平升高。正常人血清中PSA4ug/L。注意：采集病人的血清标本前，若进行前列腺按摩，将导 致血清

14、PSA升高。临床意义（1）前列腺癌患者可见血清PSA浓度升高。t-PSA血清浓度和阳性率随着病程的进展而增高，因此，PSA可作为监测前列腺癌病情变化和疗效的重要指标。（2）前列腺肥大、前列腺炎，也可见t-PSA和f-PSA水平轻度升高，必须结合其它检查进行鉴别。（3）单独使用t-PSA和f-PSA升高来诊断前列腺癌时很难排除前列腺增生症，特别是当t-PSA在5 g /L-10 g /L时。此时应用t-PSA和f-PSA来判断。t-PSA/f-PSA25%时提示前列腺增生症。二. 糖脂类肿瘤标志物检测（1）CA19-9、CA50 CA19-9在消化道腺癌病人血清中的浓度可明显升高，是胰腺癌和胆管

15、癌的肿瘤标志物。（2）CA125 CA125是存在于卵巢肿瘤的上皮细胞内的糖蛋白类相关抗原，作为卵巢癌的辅助诊断是个重要的标志物。（3）CA15-3 CA15-3 是乳腺细胞上皮表面糖蛋白的变异体，因为对乳腺癌有一定的特异性，尤其晚期乳腺癌100%，故作为诊断乳腺癌的重要标志物。 部分肿瘤标志物选择范围：癌种 肿瘤标志物选择顺序 睾丸肿瘤 -HCG、AFP,、AKP、CEA 膀胱肿瘤 ABO(H)、CEA、TPA前列腺癌 PSA(包括T-PSA、F-PSA及f/t)、PAP乳腺癌、宫颈癌 CA153、CA125、CEA、72-4结直肠癌 CEA、CA19-9、CA50、CA125、CA242肝

16、癌、胰腺癌 AFP、CEA、CA50、CA19-9、APT肺癌 CA50、CEA/SCC、NSE、SYFRA-211卵巢癌 CA125、CA50、-HCG、CEA白血病、淋巴瘤 白细胞分化抗原机体感染HBV后产生3种不同的抗原抗体系统 乙型肝炎病毒表面抗原抗体 （HBsAg、HBsAb） 乙型肝炎病毒核心抗原抗体 （HBcAg、HBcAb） 乙型肝炎病毒e抗原抗体 （HBeAg、HBeAb）HBcAg存在于肝细胞核内，不游离于血清中，不作常规检查 病毒性肝炎标志物乙型病毒性肝炎标志物检验 参考值 均为阴性各标志物阳性的临床意义1.HBsAg 为HBV感染的指标 感染后12个月出现，持续数周、数

17、月、数年， 甚至终身 提示可能的感染，如阳性可作为传染性的标志 之一HBsAg+乙型肝炎潜伏期和急性期慢性迁延性肝炎、慢性活动性肝炎、肝硬化、肝癌慢性HbsAg携带者2.抗-HBs 为一种保护性抗体，对HBsAg有一定的中和作用 在HBsAg转阴后出现，可持续多年， 其滴度与保护作用相平行 阳 性曾感染过HBV，有一定的免疫力，现已恢复接种乙肝疫苗后被动性获得抗 HBs抗体3.HBeAg阳 性是病毒复制、传染性强的指标急性肝炎者，若持续阳性，易转变为慢性肝炎HBeAg和HBsAg阳性的孕妇可将乙肝病毒垂直传播给新生儿（70%90%）4.抗-HBe-出现于急性感染的恢复期，持续时间较长-是HBV复制减少的标志，传染性可能较前减弱 见于HBeAg转阴者，示病毒复制减少，传染性减低 部分慢性乙型肝炎、肝硬化和肝癌患者阳性5. 抗-HBc 不是中和抗体 是HBV对肝细胞损害程度的标志 主要检测抗-HBc IgM和抗- HBc 总抗体（1