科学博览会项目ppt课件

1、BSA毛细管电色谱柱的制备及手性分别运用02化工专业： 伍品端指点教师 ： 马志玲 副教授目录.研讨意义和研讨现状.实验部分.结果与讨论.实验创新点.研讨意义和研讨现状手性分别的重要性 生物大分子几乎都具有“手性特征。手性药物各对映体的药效学等能够存在很大的差别 。 因此评价手性药物各对映体的生物学活性,建立快速、准确、灵敏的对映体拆分方法具有非常重要的意义。 拆分对映体的色谱技术：高效液相色谱高效毛细管电泳超临界流体色谱 毛细管区带电泳胶束电动色谱毛细管电色谱CEC(以电渗流为驱动力的微柱液相色谱技术)对映体分别机理： 手性选择剂与对映体主要为疏水和静电作用 ，只需具备特定空间构形和化学官能

2、团的分子才干与这一区域结合 。.研讨意义和研讨现状CEC的优点：CELCCEC高效性高选择性多功能性高效性、高选择性、多功能性.研讨意义和研讨现状常用CEC手性选择剂人血洁白蛋白、牛血洁白蛋白(BSA)、抗生素蛋白、卵类粘蛋白、-酸性糖蛋白 等。手性引入方法柱前手性衍生化法手性流动相添加剂法 手性固定相法 .研讨意义和研讨现状 总之，CEC以样品与固定相之间的相互作用为分别机理，以电渗流为流动相驱动力。不仅具有CE程度的高柱效，而且具有HPLC程度的高选择性。 而且，CEC整体柱在手性分别中也显示出一定优势。.研讨意义和研讨现状前往.实验部分毛细管处置在毛细管内聚合整体柱基质用动态法在聚合整体

3、柱基质上键合BSA蛋白运用选择性键合蛋白质对手性物质进展分别1.仪器和试剂略2.实验方法二、在毛细管内合成整体柱前往单体交联剂三、键合BSA蛋白Epoxy method 前往四、运用选择性键合蛋白质对手性物质进展分别。前往分别对象：D,L组氨酸分别条件： 运转缓冲溶液：2mM磷酸盐缓冲液 分别电压：6kV检测方法： 电导检测.实验结果与讨论一、整体柱基质聚合条件的优化二、整体柱分别D,L-组氨酸对映体活性基团IR浸透性背压孔构造SEM、氮吸附法整体柱基质聚合条件的优化表1 整体柱各性能的影响要素最正确聚合条件 单体含量 交联剂含量 致孔剂含量活性基团 渗透性 孔结构 环氧活性基团IR 环氧基和

4、酯基分别在约910cm-1和1730cm-1处有吸收。图1 整体柱基质的红外光谱图单体含量对整体柱活性基团含量的影响 固定致孔剂和溶剂的含量，改动单体 和交联剂 相对含量，用红外光谱法比较环氧基吸收峰约910cm-1和酯基吸收峰约1729cm-1峰面积。前往 样品号 单体/交联剂 环氧基峰面积 酯基峰面积 环氧基与酯基峰面积之比 1 3：2 33.4055 59.3904 0.5625 2 1：1 26.8072 49.1596 0.5453 3 2：3 26.3245 53.5184 0.4919表2 环氧基与酯基峰面积比较1.交联剂含量对整体柱背压的影响缘由：随着交联剂用量的减少，相分别提

5、早，使孔径 增大。样品号 单体/交联剂（v/v) 流速（mL/min) 背压（MPa） C3# 3:2 0.005 3.4 C6# 1:1 0.005 4.7 C7# 2:3 0.005 5.2表3 不同交联剂含量的整体柱基质背压2.致孔剂含量对整体柱背压的影响随着致孔剂非良性溶剂用量增大，相分别提早，孔径增大。前往图2 不同致孔剂含量整体柱基质背压孔构造SEM图3 K1#50%致孔剂SEM图图4 K5#10%致孔剂SEM图样品号 单体 交联剂 溶剂 致孔剂 K1 24 16 10 50 K5 24 16 50 10表4 整体柱基质组成 孔构造氮吸附法 该整体柱基质的孔都是中孔和大孔，孔径分布

6、在50nm-90nm范围内最多。图5 K1#50致孔剂孔径分布图前往单体:24%交联剂:16%致孔剂:50%溶剂:10 %整体柱基质聚合条件前往CEC分别组氨酸对映体结果 在6.0kV的分别电压下，以2mmolL1， pH5.5磷酸盐缓冲溶液作运转液 ，分别D,L-组氨酸，所得CEC图。图6 D,L-组氨酸CEC图 表5 缓冲液的pH值对分别效果的影响结论 缓冲液作运转液的pH值越高 ，BSA pI=4.7离解的负电荷越多，使正的电渗流越强，使保管时间越早。 较高pH值的缓冲液作运转液时分别度下降是由于，正的电渗流较强，待分别对映体与手性选择剂的作用来不及很好地进展，就被带出毛细管。前往缓冲液

7、pH L-组氨酸tR（min） D-组氨酸tR（min） 分离度R5.0 5.5 6.23 6.68 1.06.0 5.02 5.56 0.4实验创新点 经过条件实验，用IR、测定背压、SEM和氮吸附法等方法，确定出最正确聚合条件，胜利制备出毛细管电色谱柱。 用手性毛细管电色谱柱分别组氨酸对映体，并调查了运转缓冲液pH值对柱效及分别度的影响,并从原理上作出解释。 最简便的方法环氧基法，用BSA蛋白对毛细管整体柱进展修饰，制成手性毛细管电色谱柱。 初次建立了采用IR法定性和定量分析整体柱基质外表的活性基团。 前景展望 目前，CEC在药物分析方面已有广泛的研讨，集中在与药物相关的杂质分别和手性药物的分别等。 随着毛细管电色谱技术的不断完善和提高，将在生物技术、环境维护、农业化学、精细化工产品、食品工业等多个领域的分析中得到运用。 在可