五指毛桃组织培养

1、班级：09级生物教育姓名：李虎学号：09124097摘要：组织培养所用的材料非常广泛，可采取根、茎、叶、花、芽和种子的子叶， 有时也利用花粉粒和花药，我们以五指毛桃的茎为外植体，1/2MS培养基加不同 生长调节剂进行组培，如，不定芽诱导培养基为，1/2MS+BA1.0mg/L+NAA1.0mg/L 和 1/2MS+BA1.5mg/L+BAA0.5mg/L,增值培养基为；1/2MS+6-BA0.5mg/L，生根培 养基为；1/2MS+IBA1.0mg/L。关键词：五指毛桃组织培养五指毛桃原植物为桑科粗叶蓉，多为灌木，稀为小乔木，全株密被粗毛。以 根入药治疗肝炎健脾化湿，行气化痰，舒筋活络。用于肺

2、结核咳嗽，慢性支 气管炎，风湿性关节炎，腰腿疼，脾虚浮肿，病后盗汗，白带等症。五指毛 桃主要分布于我国的东南部及西南部各省，以野生为主，极少人工栽培，由于五 指毛桃多浆汁，体表多硬毛，组培过程中易褐化，不易诱导愈伤组织和不定芽， 很难获得组培苗。但这还是值得进行组培的。从外植体选择、植物生长调节剂使 用、组织培养条件和褐化控制等方面去了解五指毛桃组培技术。一、材料和方法，（1）初代培养，采集前得准备工作，用75%的酒精消毒剪 刀，准备装材料的保鲜膜、保温容器，保温材料和标签，外植体采集，采用发育 正常、无病虫害的，长势好的当年生枝条，切取含顶芽或腋芽的45cm的茎断 作为外植体，先用自来水反复

3、冲洗，先将材料用流水冲洗干净，最后一遍用蒸馏 水冲洗，再用无菌纱布或吸水纸将材料上的水分吸十，再经5度低温处理24小 时和VC等防褐化浸泡30分钟，在无菌坏境中将材料放入70%洒精中浸泡30- 60秒，再将材料移入漂白粉的饱和液或0.01%升汞水中消毒10分钟，取出后 用无菌水冲洗三、四次洗净晾干备用。之后在无菌条件下，将顶芽或腋芽茎节切 成0.51cm的茎段，用镊子夹起斜插入诱导培养基上，腋芽朝上，尽量让腋 芽与培养基的表面接触，培养基是以1/2MS为基本培养基，附加不同浓度生长调 节剂培养。（2）继代培养，选择经初代培养成功的芽从切割成单芽，并将单芽 丛中高2cm以上的单芽切割成含一个腋芽

4、的茎段，这就是外植体。在操作中严禁 用于触动材料。在无菌坏境下，将切好的外植体立即接在培养基上，每瓶接种 1030个以1/2MS为基本培养基，加入不同浓度的植物生长调节剂培养。接种 后，瓶、管用无菌药棉或盖封口，培养皿用无菌胶带封口。用1500lx和30001s 光照处理。（3 ）生根培养，当芽苗长高时，转移到1/2MS+NAA1.0mg/L或； 1/2MS+IBA1.0mg/L生根培养基上诱导生根，并选择23cm高芽苗，用500mg/LIBA 溶液速蘸处理，直接诱导生根，成苗后先敞口炼苗12天，然后取出幼苗，洗 净附在苗上的培养基，切去较大的叶片，移到珍珠岩：蛭石：腐殖土0.5:1:0.5

5、的基质中，基中腐殖土要充分灭菌，试管苗从无菌到光、温、湿稳定的环境进入 自然环境，必须进行炼苗。一般移植前，先将培养容器打开，于室内自然光照下 放3天，然后取出小苗，用自来水把根系上的营养基冲洗干净，再栽入已准备好 的基质中，基质使用前最好消毒。移栽前要适当遮荫，加强水分管理，保持较高 的空气湿度（相对湿度98%左右），但基质不宜过湿，以防烂苗。10天后，可以逐步降低湿度，使其能够适应自然条件生长。培养基所加蔗糖浓度均为2.5%, 琼脂0.8%，PH值为5.8，在1.2Kg/cm2压力下灭菌20分钟，接种后置于20C, 在1000lx和2000lx光照条件下，每天光照12小时培养。二、 培养中

6、的问题处理，（1）抗褐化处理，一些未经VC处理的材料，培养一 天后就会出现褐变，先是外植体周围变褐，培养基亦随之变褐，失去培养作用， 外植体会在一个星期内死亡，而VC浓度增高抗褐化的效果愈明显，以1000mg/L 效果最好。还要注意温度对褐化的影响。（2）植物生长调节剂组合对茎节诱导 的影响，外植体经VC处理后，将带有顶芽或者腋芽的茎节，接种到含不同配比 植物生长调节剂的培养基中培养，10天外植体的基部节间膨胀，25天后整个外 植体均膨胀，并从切面上长出许多小芽，以1/2MS培养基附加 1/2MS+BA1.0mg/L+NAA1.0mg/L 和 1/2MS+BA1.5mg/L+BAA0.5mg/

7、L ， 1/2MS+BA1.0mg/L+BAA1.0mg/L 等培养配料，以 1/2MS+BA1.0mg/L+BAA1.0mg/L 对 顶芽的诱导率最高，芽长势较好，而附加其他生长调节剂的诱导率较低，芽较小， 长势不好或者生长较慢，1/2MS+BA1.5mg/L+BAA0.5mg/L培养基对腋芽茎节诱导 效果最佳，长势也较好。（3）植物生长调节剂组合对不定芽增殖的影响，将诱 导出的小芽分别置于不同的培养基上诱导，45天后形成芽从，将丛生芽切除， 继续放在培养瓶中培养，加入1/2MS+6-BA0.5mg/L的组合培养基中继续培养，会 得到更多的芽丛。将芽从分别接种于上述培养基上，接种后在条件为光

8、照强度： 200030001x；光照时间：14h/d；培养温度：23C2C的光照培养室中恒温 培养26d（4）生根培养，加入1/2MS+IBA1.0mg/L的组合培养基中培养，可以 加快芽丛生根，加快植物的生长。三、培养条件的影响，培养条件是组培试验成败的关键因素，外植体生长要求温 暖气候，2528C为生长最适宜温度，所以培养室温度一般为25C，模拟其生长 的最适温度，结果表明在该温度下组培苗生长良好。光照的影响，强光可以是外 植体发生褐化，黑暗条件下的诱导率高于光照条件下的诱导率。同时，研究中还 发现黑暗条件下外植体褐化较轻，这可能是因为在组织培养中光能促进外植体中 酚的氧化，产生更多的酚类

9、物质，从而使褐化更加严重。这充说明光暗条件不但 影响了培养物的生长速度，而且影响了其形态建成。一般来说，光照强度较强， 幼苗生长粗壮，而光照强度较弱幼苗容易徒长，一般光照强度为10001X和20001X。 还有琼脂浓度对五指毛桃培养苗的影响，琼脂浓度、大量元素、蔗糖浓度、光照、 还有不同封口纸可以是组培瓶出现玻璃化，即是试管苗叶、嫩梢呈水品透明或半 透明、水浸状，植株矮小肿胀、失绿、叶片卷曲、畸形脆弱易碎，在培养过程中 预防玻璃化可以增加琼脂浓度，降低6-BA浓度、避免过高的培养温度，增加自然 光照。还有一些条件，例如，通气状况，渗透压等。四、移植培养，当五指毛桃组织分化成根和芽，逐渐长大之后

10、，成为一幼小 植株，培养瓶的容积有限，需要将幼苗移植出来，移植到土壤或基质中。试管苗 从琼脂培养基中移出时要用长镊子小心取出，彻底清洗干净根部（因为残留的蔗 糖和营养会成为潜在的致病微生物的生长培养基，洗不净容易引起移栽苗烂根死 亡），并且避免损坏根系。之后直接移栽或使用0.1%0.3%的高锰酸钾或多菌灵 等杀菌剂溶液中清洗，然后用清水清洗后移入苗床或盆钵，也可用水清洗后用多 菌灵溶液浸泡1030分钟后移栽，栽后淋足定根水。炼苗在塑料薄膜（或玻璃） 温室内或遮阴网室内进行，使用温室或温棚时应注意设置通风口，防止浇水后高 温引起萎蔫及高湿引起烂苗。生长基质应当具有适合的pH值、多空隙、良好的 排

11、水和通气性能，如一般用珍珠岩、蛭石、草炭土或腐殖土比例为1： 1： 0.5。 也可用砂子：草炭土或腐殖土为1： 1。这些基质在使用前应高压灭菌，或用全 少小时烘烤来消灭其中的微生物。由于移出的试管小植株极容易感染病，所以生 长环境的卫生状况和病害防治对移栽能否成功十分关键。通常对生长基质、培养 容器和苗床进行消毒处理，采用新的培养容器或聚乙烯薄膜效果都很好，必要时 可喷施稀的杀菌剂。移栽后的管理。移出的试管苗一般在炼苗前4周遮阴要达到 50%90%，并采用喷雾洒水保持一定的湿度（85%左右），之后逐渐降低湿度和 增强光照。湿度降低幅度及光照增加量依不同植物而定，总体上应促使老叶缓慢 衰退并同时产生新叶。如果降低或增加过快，会使叶片褪绿和灼伤，缓苗期延长， 甚至导致移栽苗死亡。但是，只要小植株能够忍受，尽可能高的光照水平是有利 的。温度不应低于20C，最好达到