第三章__组织培养ppt课件

1、第三章 园林植物苗木培育技术3.4组织培育育苗植物组织培育：根据植物细胞的全能性原理，将植物的器官、组织、细胞，接种到人工配制的培育基上，在人工控制的条件下，进展离体培育，使其产生完好植株的过程。试管苗3.4.1植物组织培育技术的适用性特点1植株组培快繁、周期短、节省资料2运用广泛3.4.2植物组织培育的育苗技术 1根本条件1实验室洗涤室称量室3.4.2植物组织培育的育苗技术 1根本条件1实验室培育基制备室灭菌室3.4.2植物组织培育的育苗技术 1根本条件1实验室接种室缓冲室3.4.2植物组织培育的育苗技术 1根本条件1实验室培育室3.4.2植物组织培育的育苗技术 1根本条件1实验室培 养 室

2、准 备 室灭菌室贮藏室接种室缓冲室植物组织培育实验室规划表示图为了减少污染，实验室最好设一走廊且走廊上方最好安装紫外灯；培育室最好设在南面，设大玻璃窗，以双层玻璃窗为最好。假设培育室是设在房屋的边侧，其东边或西边的墙上也可设置大玻璃窗；培育室房间及门要小，而且密闭性要好，最好装移门；无菌操作室要小，要设缓冲间，也最好装移门，且门要稍大一些。3.4.2植物组织培育的育苗技术 1根本条件2仪器设备和器具酸度计细菌过滤器超净任务台3.4.2植物组织培育的育苗技术 1根本条件2仪器设备和器具高压蒸汽灭菌锅3.4.2植物组织培育的育苗技术 1根本条件2仪器设备和器具3.4.2植物组织培育的育苗技术 1根

3、本条件2仪器设备和器具3.4.2植物组织培育的育苗技术 1根本条件3培育容器3.4.2植物组织培育的育苗技术 2操作技术1玻璃器皿洗涤3.4.2植物组织培育的育苗技术 2操作技术2培育基配制培育基的重要性根本培育基：指只含有维持离体植物细胞根本生命活动所需的营养成分的培育基。通常包括水分、无机营养成分和有机营养成分，不包括激素和天然有机附加物。完全培育基：指在根本培育基的根底上另外附加激素或天然有机附加物所组成的培育基。培育基的构成培育基水无机盐类有机营养大量元素化合物微量元素化合物氨基酸类糖类维生素类植物生长调理剂生长素类细胞分裂素类凝固剂组织培育时，植物激素的运用规律 在生长素存在的条件下

4、，细胞分裂素的作用有加强的趋势，但二者在运用上有一定的顺序关系，处置顺序不同，培育物的分化形状也不同。规律如下：先用生长素处置，后用细胞分裂素处置，有利于细胞分裂，但细胞不容易分化，容易产生多倍体细胞。先用细胞分裂素处置，后用生长素处置，细胞分裂也分化。用生长素和细胞分裂素同时处置，细胞脱分化后分化频率提高。但二者的运用浓度比值可以决议器官分化方向：生长素/细胞分裂素比值高时，有利于根分化，抑制芽构成。反之，有利于芽分化，抑制根构成。比值适中时，促进愈伤组织的构成和生长。高无机盐含量的培育基 代表类型：MS，LS，BL，ER硝酸钾含量较高的培育基 代表类型：B5，N6，SH中等无机盐含量的培育

5、基 代表类型：Nitsch，Miller低无机盐含量的培育基 代表类型：White，WS，HE培育基的配方成 分使用浓度(mg/L)成 分使用浓度(mg/L)硝酸钾（KNO3）1900碘化钾（KI）0.83硝酸铵（NH4NO3）1650硼酸（H3BO3）6.2磷酸二氢钾（KH2PO4）170硫酸锌（ZnSO47 H2O）8.6硫酸镁（MgSO47H2O）370钼酸钠（Na2MoO42 H2O）0.25氯化钙（CaCl22H2O）440硫酸铜（CuSO45 H2O）0.025硫酸亚铁（FeSO47H2O）27.8氯化钴（CoCl26 H2O） 0.025硫酸锰（MnSO44H2O）22.3甘氨酸

6、2乙二胺四乙酸二钠（Na2EDTA）37.3盐酸硫胺素（VB1）0.1肌醇100盐酸吡哆醇（VB6）0.5蔗糖30000烟酸（VB5或VPP）0.5琼脂7000MS培育基配方 成 分使用浓度(mg/L)成 分使用浓度(mg/L)硝酸钾（KNO3）2500碘化钾（KI）0.75硫酸铵（NH4）2SO4）134硼酸（H3BO3）3.0磷酸二氢钾（KH2PO4）150硫酸锌（ZnSO47 H2O）2.0硫酸镁（MgSO47H2O）250钼酸钠（Na2MoO42 H2O）0.25氯化钙（CaCl22H2O）150硫酸铜（CuSO45 H2O）0.025硫酸亚铁（FeSO47H2O）27.8氯化钴（Co

7、Cl26 H2O） 0.025硫酸锰（MnSO44H2O）10盐酸硫胺素（VB1）10乙二胺四乙酸二钠（Na2EDTA）37.3盐酸吡哆醇（VB6）1.0肌醇100烟酸（VB5或VPP）1.0蔗糖20000琼脂7000B5培育基配方 成 分使用浓度(mg/L)成 分使用浓度(mg/L)硝酸钾（KNO3）80硫酸锰（MnSO44H2O）7氯化钾（KCl）65硼酸（H3BO3）1.5硝酸钙（Ca (NO3) 24H2O300硫酸锌（ZnSO47 H2O）3硫酸镁（MgSO47H2O）720硫酸铁（Fe(SO4)3）2.5碘化钾（KI）0.75盐酸硫胺素（VB1）0.1硫酸钠（NaSO4）200盐酸

8、吡哆醇（VB6）0.1磷酸氢钠（NaH2PO4H2O）16.5烟酸（VB5或VPP）0.5甘氨酸3蔗糖20000White培育基配方 根本培育基母液的配制 单配法 混配法 按照防止难溶性沉淀构成的原那么和物质种类的不同，将根本培育基配方所包括的物质进展分组根本培育基配方中物质划分组数的多少，即配制母液数的多少可根据实践情况而定，如MS培育基可以配制三液式、四液式、五液式等例如：MS培育基五液式大量元素母液钙盐母液微量元素母液铁盐母液有机营养成分母液3.4.2植物组织培育的育苗技术 2操作技术3外植体消毒、接种接种：把处置好的资料经无菌操作程序放置到培育基上，这一过程外植体器皿和器具的洗涤洗涤剂

9、：无磷中性的肥皂粉、洗衣粉和洗洁精常用清洗方法：洗涤剂清洗法、超声波清洗法 消毒 器皿消毒器具的灭菌方法消毒 器皿消毒干热灭菌法高压蒸汽灭菌法湿热灭菌法火焰灼烧灭菌法高温蒸汽灭菌法消毒 培育基消毒培育基湿热灭菌最少时间液体容积（ml）121所需时间（min）20-50157520 250-50025 1000301500-200035-40培育基高压蒸汽灭菌湿热灭菌操作灭菌后培育基的存放：锅内加水放入消毒桶装入培育基盖好锅盖接通电源加热排尽锅内冷空气到达灭菌温度时开场计时并坚持足够长的时间继续加热切断电源压力表指针归零时翻开锅盖取出培育基并存放好高压蒸汽灭菌锅平安运用本卷须知：灭菌前外层锅内要

10、参与足够的水,灭菌完成后要将锅内的水排放干净。在灭菌过程中及灭菌后，压力表压力指针归零之前,不能翻开锅盖,以免发生危险。留意日常维护和检查,及时发现问题,及时修缮，保证运用平安可靠。运用高压蒸汽灭菌锅进展物品灭菌时的本卷须知：消毒锅内放置的物品要有一定的缝隙，便于高温蒸汽上下回流，到达良好灭菌效果。锅内冷空气必需完全排尽，否那么压力表的指针虽然到达了规定的压力，但由于锅内冷空气的存在，并不能到达相应的温度，因此影响灭菌效果。进展培育基灭菌时，锅内到达规定的灭菌温度后，在严厉坚持灭菌温度的同时，还要严厉坚持灭菌时间。时间过长会破坏培育基内一些化学成分的有效性，时间过短那么达不到灭菌效果。过滤除菌

11、法消毒 培育基消毒消毒 无菌操作室内的灭菌方法消毒 外植体的外表灭菌 化学消毒剂灭菌法70%酒精、HgCl2、次氯酸钠、过氧化氢、次氯酸钙等外植体外表灭菌操作前的预备任务： 无菌水、漂洗瓶、切割用器皿和金属器具均经过高温高压灭菌并整齐摆放在超净任务台上。 灭菌剂配制好并整齐摆放在超净任务台上。外植体外表灭菌的普经过程外植体取材备用无菌水充分漂洗35次无菌条件下，消毒剂处置无菌条件下，70%酒精外表消毒30S60S预处置影响外植体消毒效果的要素： 消毒剂种类 消毒剂运用浓度 消毒处置时间接种 全部应在无菌条件下进展外植体接种操作前的预备任务接种 全部应在无菌条件下进展外植体接种的详细步骤切割外植体培育瓶倾斜接近酒精灯火焰瓶盖外部在火焰上旋转灼烧数秒钟旋开瓶盖，扣放在酒精灯旁边瓶口在火焰上旋转灼烧数秒钟用无菌镊子将外植体均匀放置在培育基上瓶盖在火焰上灼烧两圈盖紧瓶盖接种 全部应在无菌条件下进展常用外植体的种类茎尖带节茎段节间部茎段叶片和叶柄