第二章植物组织培养的一般技术ppt课件

1、第二章植物组织培育的普通技术植物组织培育的普通技术操作技术培育基的成分及作用 培育基的种类与选择 培育基的配制方法操作技术洗涤 灭菌无菌操作 培育容器封口物的种类及制造灭菌 有菌的范畴：凡是暴露在未经处置的空气中的物体，曾经接触过自然水源的物体，至少它的外表，毫无例外都是有菌的。它的内部在未经证明之前，也应该作为有菌物体来对待。无菌的范畴：经过高温灼烧或蒸煮过后的物体，经其他物理或者化学灭菌方法处置过后的物体，是无菌的。高层大气、岩石的内部，安康的动物和植物不与内外部外表接触的组织内部很能够是无菌的。强酸强碱、化学灭菌剂等外表和内部是无菌的。无菌的世界远远小于有菌的世界！灭菌培育基的灭菌不耐热

2、的物质将采用过滤灭菌玻璃器皿及耐热器具等可采用干热灭菌用于无菌操作的器械采用灼烧灭菌布制品采用高压灭菌其他植物资料的外表灭菌培育基的成分及作用在完善的培育基配方中至少应包括下述几个部分：大量元素 微量元素 铁盐 有机成分 琼脂 糖 植物激素 PH 其它成分 大量元素植物所需求的元素，其浓度大于0.5毫摩尔/升应该属于大量元素大量元素包括C、H、O、N、P、K、Ca、Mg、S等九种元素，他们占植物干重的百分之几十到万分之几生理作用：1参与肌体构造；2构成一些特殊的生理活性物质；3电化学方面的作用:维持离子浓度平衡，胶体稳定，电荷平衡；4发育方面起的作用：影响植物组织形状发生、器官构成。微量元素植

3、物所需求的元素，其浓度小于0.5毫摩尔/升应该属于微量元素。 微量元素包括Fe、Cu、Mo、Zn、Na、Mn、CoB和I等，通常培育基中添加10-710-5就可满足需求生理作用：酶的催化、细胞分化和维持细胞完好机能等方面 多年的研讨结果： Cu有促进离体根生长的作用； Mo是合成活泼硝酸复原酶所必不可少的元素，也是固氮酶的组成部分，还有防止叶绿素受破坏的作用； Mg、Zn、Na是酶的组成成份，也有防止叶绿素破坏的作用； Mn与植物的呼吸作用和光协作用有关； B与糖的运输、蛋白质的合成有关。 当缺乏某种元素时，往往会表现一些缺素症：缺N：某些组织呈现艳丽的花样素苷的颜色，导管不能构成；缺N、P、

4、K：细胞变得肥肿而构成层组织减少；缺S：产生非常明显的黄萎病；缺Fe：细胞分裂停顿；缺B：细胞分裂和细胞生长延缓；缺Mn或Mo：生长受影响。铁盐采用硫酸亚铁和乙二胺四乙酸二钠结合成螯合铁配置而成作用：促进细胞的分裂与生长；影响叶绿体的构造组成与叶绿素的构成。有机成分维生素类：植物组织培育中经常运用维C、维B1盐酸硫胺素、维B6盐酸吡哆素、维H生物素、叶酸和烟酸等，普通运用的浓度为0.110mg/l肌醇：本身没有促进生长的作用，但有助于活性物质的发扬，并参与糖代谢，能使培育组织快速生长，对胚状体和芽的构成有良好的影响氨基酸：甘氨酸、丝氨酸、酪氨酸、谷氨酰胺、天冬酰胺、水解酪蛋白、水解乳蛋白有机添

5、加物：椰乳、香蕉等 琼脂一种从海藻中提取出来的凝固剂，普通运用浓度为0.6%1%。以前运用琼脂条，如今运用琼脂粉，以色白、干净的为好。糖糖的作用：a.作为C源，为细胞提供合成新化合物的碳骨架；b.为细胞的呼吸代谢提供底物与能源；c.维持一定的浸透势。运用最广泛的是蔗糖和葡萄糖，普通的运用浓度为2%4%。普通来说，以蔗糖做糖原时，离体的双子叶植物的根生长得最好，而以葡萄糖为C源时，单子叶植物的根生长得最好。为了节省本钱，普通选用食用白糖。植物激素生长素类细胞分裂素类其它植物激素赤霉素GA3零落酸ABA多效唑PP333生长素类主要作用：诱导愈伤组织的构成、胚状体的产生以及试管苗的生根，更重要的是配

6、合一定比例的细胞分裂素诱导腋芽和不定芽的产生。常用的生长素类物质：2，4D2，4二氯苯氧乙酸、NAA奈乙酸、IAA吲哚乙酸、IBA吲哚丁酸。它们作用强弱顺序：2，4D NAAIBAIAA细胞分裂素类主要作用：促进细胞的分裂和器官的分化、延缓组织的衰老、加强蛋白质的合成、抑制顶端优势、促进侧芽的生长及显著改动其它的激素作用。常用的细胞分裂素类有：KT(激动素)、6-BA(6-苄基腺嘌呤)、ZT玉米素、2iP2异戊烯腺嘌呤、4PU、CPPU吡效隆和TDZ噻重氮苯基脲。作用的强弱顺序：TDZ, 4PU ZT 2iP 6-BA KT。PH培育基的PH值，直接影响离子的吸收，过酸过碱对资料的生长都不利。

7、对大多数植物来说，灭菌之前培育基的PH调到5.66.0能到达要求。主要用KOH和HCl来调理。普通来说，当PH值高于6时，培育基会变硬，低于5时琼脂不能很好的凝固。 其它成分活性碳硝酸银香蕉泥、椰乳抗生素类物质培育基的种类与选择培育基的种类培育基的选择培育基选择常用的实验方法培育基的种类第一类为含盐量高的根本培育基，如MS、LS、BL、ER。第二类为硝酸钾含量高的根本培育基，如B5、N6、SH。第三类是无机盐中等含量培育基，如H根本培育基和Nitsch根本培育基。第四类为低盐含量根本培育基，如White、WS和HE根本培育基。 培育基选择1、根本培育基的选择1在选择一种新的植物资料进展组织培育

8、时，为了尽快建立起再生体系，最好选择常用的一些培育基 ，如MS培育基；2假设MS培育基不理想，可首先降低它的浓度；3其次再选择在配料成分上与MS有显著不同的其它培育基加以试用对比 。培育基的选择2、激素浓度和相对比例确实定 在实验中，首先应参考已有的报道，看能否有用一样的植物、一样的组织或相近者做过胜利或失败的实验，假设有那么可直接作参考；假设没有，那么在建立激素配比中，将每一种拟运用的激素选择35个程度，再按随机组合的方式建立起如下的实验方案。16种激素配比实验方案常用的实验方法1、预备实验2、单因子实验3、多因子实验及正交设计4、广谱实验法5、逐渐添加和逐渐排除的实验方法 培育基的配制方法

9、培育基成分的浓度换算体积百分比浓度分量百分比浓度摩尔浓度培育基母液的配制大量元素母液的配制微量元素母液的配制 铁盐母液配制植物生长调理物质及其他有机物质母液的配制 培育基配制程序过滤灭菌安装总结经过本章内容的学习掌握组织培育的普通操作技术了解培育基的成分及作用了解培育基的种类与选择无菌操作大量元素母液的配制大量元素母液浓度普通为原培育基浓度的10、20或50倍，有时也可用l00倍，倍数不宜过高，也不宜过低。有时将CaCl2 2H2O单独配制保管，以免长期储存发生沉淀。将全部大量元素配在一同时，为防止在混合时发生沉淀，须在各药品充分溶解后，按表中顺序混合，氯化钙最后参与，以免与硫酸镁构成沉淀。称

10、量大量元素的化合物用感量为0.01克的扭力天平即可。微量元素母液的配制微量元素母液浓度宜为原培育基配方中用量的100倍。普通将微量元素分别称量溶解，储存在一个瓶个，但也有将KI分别配制，单独储存在棕色瓶中。称量微量元素化合物宜用感量为0.0001g的电子分析天平。铁盐母液配制培育基中的铁盐母液普通单独配制目前常用的铁盐为硫酸亚铁和乙二胺四乙酸二钠的螯合物配制时，用感量为0.01g的扭力天平称取植物生长调理物质母液的配制植物生长调理物质如生长素类(IAA，NAA)和细胞分裂素类(KT，BA)，可根据需求，灵敏设计其浓度，普通为0.01，0.1、0.2、0.5和2mg/L。普通用感量为0.0001g的电子分析天平称量。IAA要用棕色瓶，暗中储存，以免光照分解。其他有机物质母液的配制椰乳：采集到椰子时应检查其汁液(保证没蜕变)，首先将椰乳混合，用纱布或滤纸过滤去渣。将滤液放入80水浴中保温20