纯化水微生物方法学验证方案(09年03月)(共11页)

1、纯化水微生物限度检查方法验证方案编码：VP/QMV-T009-00页码： PAGE III /IIPAGE 头孢呋辛钠无菌检查方法验证方案编码：VP/QMV-T001-00页码： PAGE 3/8该方案制定(zhdng)参与人：项目人员部门/岗位Dept./Position签名Signature日期Date方案起草Prepared byQC/微生物检测员 年 月 日 (Y) (M) (D)QA/验证QA 年 月 日 (Y) (M) (D)方案审核Reviewed byQC/经理 年 月 日 (Y) (M) (D)QA/经理 年 月 日 (Y) (M) (D)方案批准Approved by受权人

2、 年 月 日 (Y) (M) (D)颁发部门Issued byQC生效日期Effective Date 年 月 日 (Y) (M) (D)分发部门Distributed to QC、QA制作备份：2份Copies prepared: 2 pcs目 录1. 引言(ynyn).012. 验证小组及各部门(bmn)职责.013. 检验(jinyn)依据.014. 验证准备.015. 操作方法.026. 结果判断.047. 结果统计.048. 结果评定与结论.04附表1：设备确认记录05附表2：试验器材确认记录05附表3：试验用菌种确认记录06附表4：培养基确认记录06附表5：试剂确认记录07附表6：

3、器皿确认记录07附表7：细菌数、霉菌数、酵母菌数计数验证结果原始记录.08纯化水微生物限度检查方法验证方案编码：VP/QMV-T009-00页码： PAGE 5/8纯化水微生物限度检查方法验证方案编码：VP/QMV-T009-00页码： PAGE 1/81.1概述(i sh)不同检品、不同的仪器或材料等均可能对检验结果产生影响(yngxing)，当检品有抑菌性时，会掩盖检品已受污染的事实(shsh)或造成低于实际污染水平的检测结果；选用不适当的培养基，其促生长能力不符合要求，也会造成类似的后果。为了使微生物限度检验方法的结果准确可靠，需要对检品的具体检验方法进行验证，以证明其对检品的适用性。1

4、.1OverviewDifferent samples, equipments and different materials ，as well as inappropriate media that the Growth-promoting capacity does not meet the requirements may have an impact on the test results, when the samples have antimicrobial activity,it will cover up the fact that inspected products hav

5、e been contaminated or cause the pollution levels lower than the actual; To make the results of bioburden testing accurate and reliable，the methods need to be validated ，ensuring its applicability 1.2 目的建立纯化水微生物限度检查方法。1.2Objecive Establish the bioburden testing method for purified water.2. 验证小组及各部门职

6、责2. Verification team & Responsibilities of various departments2.1验证小组1.负责验证方案的审核；2.负责验证的协调工作，以保证本验证方案规定项目的顺利实施。2.1 Responsibilities of Verification team1. Review the verification program.2. Coordination of the validation work, to ensure the smooth implementation of projects2.2质检部1.负责验证所需的标准品、样品、试剂、

7、试液等的准备；2.负责取样及对样品的验证；3.负责验证方案的起草；4.参与验证过程中OOS的调查。2.2QC 1.Prepare the samples, reagents, test solution, Standards etc. required for the verification word, 2.3 设备动力部1.对仪器、仪表、量具等进行(jnxng)校正。2.4质保部1.负责验证(ynzhng)过程监控管理工作；2.参与验证(ynzhng)过程中OOS的调查。2.5 受权人1.批准验证方案；2.负责批准放行验证过程中出现的OOS。2.6验证小组成员组 长：曹成龙组 员：郑定、马

8、立如、周超、彭中华、彭艳妃、张淑珍、郭清2.7验证时间安排时 间工作内容2009.03.012009.03.03方案起草、审批2009.03.042009.03.09标准确认、检验方法确认2009.03.14完成报告3、检验依据中国药典2005年版 “微生物限度检查法”4、验证准备4.1样品名称：纯化水4.2实验用培养基：营养琼脂培养基、玫瑰红钠琼脂培养基（均由中国药品生物制品检定所提供）。4.3稀释液、冲洗液：0.9%无菌氯化钠溶液；pH7.0氯化钠-蛋白胨溶液。4.4检查所涉及的设备是否符合实验要求，确认结果填写在附表1仪器确认记录中。设备应经验证,在校准有效期内。4.5检查所涉用试验器材

9、，确认结果填写在附表2试验器材确认记录中，试验器材应完整，洁净，无破损，配件齐全。 4.6检查所涉及的试验用菌种是否符合实验要求，确认结果填写在附表3试验用菌种确认记录中。菌种形态特征应良好、菌种代数不得超过第五代。4.7检查所涉及的培养基是否符合实验要求，确认结果填写在附表4培养基确认记录。培养基应在有效期内。4.8检查(jinch)所涉用试剂是否(sh fu)符合(fh)实验要求，确认结果填写在附表5试剂确认记录中。试剂级别为AR级，并应在有效期内。4.9检查所涉用器皿是否符合实验要求。确认结果填写在附表6器皿确认记录中。一般玻璃器皿要求洁净，无破损，量器要进行校正。4.10验证用培养基、

10、缓冲液、过滤器、剪刀、镊子应至121湿热灭菌30分钟，验证用平皿、刻度吸管应至200干热2小时。5、操作方法5.1 菌液制备：取金黄色葡萄球菌、枯草芽孢杆菌、大肠埃希菌经32.52.5培养1824小时的新鲜营养琼脂培养基培养物、白色念珠菌经25.52.5培养2448小时新鲜改良马丁琼脂培养基培养物，分别加入0.9%无菌氯化钠溶液10ml洗下菌苔转移至空试管中作为菌悬液原液，与细菌浊度标准管进行比较，得原液估计浓度，再按比浊结果，用0.9%无菌氯化钠溶液进行10倍梯度稀释至浓度小于100cfu/ml。取黑曲霉菌经25.52.5培养57天新鲜改良马丁琼脂培养基斜面培养物，加入0.9%无菌氯化钠溶液

11、10ml洗下孢子吸出，转移至空试管中作为菌悬液原液，用0.9%无菌氯化钠溶液进行10倍梯度稀释至浓度小于100cfu/ml。5.2菌液计数：分别取上述3种细菌菌液1ml加入培养皿，每种菌液作平行2皿。注入约45营养琼脂培养基约18ml，于3035培养。分别取上述2种真菌菌液1ml加入培养皿，每种菌液做平行2皿。注入约45oC玫瑰红钠琼脂培养基约18ml，于2328培养。5.3取样方法：按取水标准取原料厂区纯化水站、制剂厂区纯化水站、107车间纯化各一个纯化水点为代表做方法学验证，连续做三天，具体取水方法如下表：取样位置 原料厂区纯化水站制剂厂区纯化水站107车间纯化水取样点PWA-02总回水P

12、WB-02总回水PWA-14总回水取样时间2009年03月04日2009年03月06日取样量 每个点每天取1瓶，100ml/瓶。5.4薄膜过滤：5.4.1试验(shyn)组：取2ml供试液(sh y)和1ml验证(ynzhng)用菌液（含50100CFU试验菌）置50ml pH7.0氯化钠-蛋白胨缓冲液中，用封闭式薄膜过滤器滤干，平行制备2张膜，将滤膜菌面朝上贴于营养琼脂培养基或玫瑰红琼脂培养基平板上培养，置规定温度培养2472小时，测定菌数。5.4.2供试品组：取2ml供试液置50ml pH7.0氯化钠-蛋白胨缓冲液中，用封闭式薄膜过滤器滤干，平行制备2张膜，将滤膜菌面朝上分别贴于营养琼脂培

13、养基和玫瑰红琼脂培养基平板上培养，置规定温度培养2472小时，测定菌数。 5.4.3菌液组：测定所加的试验菌数。 5.4.4稀释剂对照组：用相应的稀释液替代供试品，按试验组的制备方法和菌落计数法测定菌数。6、结果判断：稀释剂对照组的菌回收率均应不低于70%。若试验组的菌回收率均不低于70%，则可按该菌落计数法测定供试品的细菌、霉菌或酵母菌数；若任一次试验中试验组的菌回收率低于70%，应建立新的方法，消除供试品的抑菌活性，并重新验证。注：试验组回收率（%）=（试验组平均菌落数供试品对照组平均菌落数）菌液组平均菌落数100%稀释剂对照组回收率（%）=稀释剂对照组平均菌落数菌液组平均菌落数100%7

14、、结果统计 实验结果填写在附表7细菌数、霉菌数、酵母菌数计数验证结果原始记录。8、结果评定与结论综合评定内容包括以下方面：确认试验是否有遗漏；是否需要进一步补充试验；确认记录是否完整；样品预处理方式、检验用器具、材料和培养条件等是否合理；验证过程是否准确、有效、可靠并具有较好的重现性，验证过程中是否有OOS，OOS的处理是否按要求处理，试验结果是否符合要求。纯化水微生物限度检查方法验证编码：R/QMV-T009-00页码： PAGE 8/8附表1 设备确认(qurn)结果仪器名称型 号校准有效期至生产厂家及出厂编号验证编号霉菌培养箱MJ-250-I上海圣欣科学仪器有限公司（040342）生化培

15、养箱LRH-250上海圣欣科学仪器有限公司（ZB1007）生化培养箱LRH-250上海圣欣科学仪器有限公司（040873）电热恒温培养箱DHP-9162上海一恒科技有限公司（035184）脉动真空灭菌柜GX1.D山东新华医疗器械股份有限公司（0807002）非标干热灭菌箱GM100-I常州市震华干燥设备有限公司（0807001）立式压力蒸汽消毒器628D铁岭市医疗器械总厂（297）电子天平PB602-N梅特勒-托利多仪器有限公司（1201130089）检查人/日期(rq)： 复核人/日期：附表2 试验(shyn)器材名称型 号来 源检查项目及标准检查结果封闭式无菌检查薄膜过滤器STV2、STV

16、3型浙江宁海白石药检仪器厂完整，洁净，无破损微孔滤膜孔径0.45m，直径50mm上海亚东核级树脂有限公司完整，无破损光学显微镜YS100Nikon各配件应齐全，无损坏检查人/日期： 复核人/日期：附表3 试验(shyn)用菌种确认结果菌种名称来 源菌种代数（不得超过第五代）形态特征检查结果金黄色葡萄球菌CMCC（B）26003中国药品生物制品检定所枯草芽孢杆菌CMCC（B）63501中国药品生物制品检定所大肠埃希菌CMCC（B）44102中国药品生物制品检定所白色念珠菌CMCC（F）98001中国药品生物制品检定所黑曲霉CMCC（F）98003中国药品生物制品检定所检查(jinch)人/日期：

17、 复核人/日期：附表4 培养基确认(qurn)结果培养基名称批号有效期至来 源检查项目及标准检查结果营养琼脂培养基中国药品生物制品检定所应在有效期内玫瑰红钠琼脂培养基中国药品生物制品检定所应在有效期内检查人/日期： 复核人/日期：附表5 试剂确认结果试剂名称规格批 号有效期至来 源检查项目及标准检查结果氯化钠500g/瓶广州化学试剂厂1.应为AR级试剂2.应在有效期内磷酸二氢钾500g/瓶广州化学试剂厂1.应为AR级试剂2.应在有效期内磷酸氢二钠500g/瓶广州化学试剂厂1.应为AR级试剂2.应在有效期内蛋白胨250g/瓶广州化学试剂厂应在有效期内氢氧化钠500g/瓶广州化学试剂厂1.应为AR

18、级试剂2.应在有效期内新洁尔灭溶液500ml/瓶江门市恒健药业有限公司应在有效期内检查人/日期： 复核人/日期：附表6器皿确认(qurn)结果容器名称规格型号检查项目及标准检查结果培养皿9cm洁净，无破损锥形瓶500ml、250ml、100ml洁净，无破损烧杯5000ml、1000ml、100ml洁净，无破损试管18mm180mm、30 mm200mm洁净，无破损刻度吸管10 ml 、5 ml、2 ml洁净，无破损量杯、量筒1000ml 、100ml、50ml洁净，无破损，应校正检查(jinch)人/日期： 复核人/日期：纯化水微生物限度检查方法验证编码：R/QMV-T009-00页码： PAGE 11/8附表7细菌(xjn)数、霉菌数、酵母菌数计数验证结果原始记录检品名