组织捣碎及细胞破碎ppt课件

1、1.2.2 组织捣碎及细胞破碎一细胞壁的构造和特点 二细胞破碎机理三细胞破碎方法 教育技术中心 1.植物细胞 2.微生物细胞 G+细菌和G 酵母细胞 真菌菌丝细胞壁 一细胞壁的构造和特点 成 分 G+ G -肽聚糖磷壁酸类脂质蛋白质 含量很高（3095）含量较高（50）一般无（2）0 含量很低（520） 0含量较高（020）含量较高 革兰氏阳性细菌的和革兰氏阴性细菌细胞壁构造 革兰氏阳性细菌与阴性细菌的细胞壁成分(占细胞壁干重的%) 二细胞破碎的机理紧缩力和剪切力 改动细胞壁或细胞膜的构造，增大目的产物的溶出率 完全溶解细胞的维护屏障细胞壁三 细胞破碎的方法1.物理破碎1高压匀浆器 1高压匀浆

2、法任务原理：剪切，碰撞 影响高压匀浆器破碎效果的要素 压力：通常采用的压力为5570Mpa 温度： 经过匀浆器的次数：12 阀与阀座间距高压匀浆器原理利用高压迫使细胞悬浮液经过针形阀，由于忽然减压和高速冲击撞击环呵斥细胞破裂,从低压环境释放出来。 1高压匀浆法留意： 易呵斥堵塞的团状或丝状真菌； 较小的革兰氏阳性菌； 含有包含体的基因工程菌 。珠磨机任务筒2珠磨法搅拌器 原理：在膜腔中装入小玻璃球或小钢球，在搅拌浆的作用下，它将使细胞悬浮液与细胞悬浮液，细胞悬浮液与玻璃小珠、石英砂或氧化铝一同发生碰撞、剪切，使细胞在某种程度上破碎，再由液珠分别器分开、排出。这些安装的主要缺陷是在破碎期间样品温

3、度迅速升高，经过用二氧化碳来冷却容器可得到部分处理。构件：微珠、冷却安装、搅拌浆、液珠分别器、物料进出口。见图高速珠磨机任务原理：剪切，碰撞2珠磨法影响要素珠磨效率的要素 珠体的大小：实验室规模，珠径为0.2mm较好，工业规模，不得0.4mm 珠体在磨室中的装量：控制在80%90%； 搅拌速度： 操作温度：操作温度在540范围内 被处置细胞的特性： 3超声波破碎法任务原理 空穴景象引起任务液部分区域压力差 ，从而产生一个极为剧烈的冲击波压力，由它引起的粘滞性旋涡在介质中的悬浮细胞上呵斥了剪切应力，促使细胞内液体发生流动，从而使细胞破碎。影响要素 仪器的功率 介质的离子强度 pH值 菌体的种类和

4、浓度 电声超声波发生器4浸透压冲击法细胞 高渗溶液 脱水 低渗溶液 吸水破裂 反复冻融法 枯燥法 X-press法冻结-撞击法 2.化学法1酶法 原理： 外加酶法 细菌类：溶菌酶 ， G+需配合EDTA 放线菌：溶菌酶 外加酶法酵母和真菌：蜗牛酶、纤维素酶、多糖酶等 植物细胞壁：纤维素酶，果胶酶； 外加酶法本卷须知 需求选择适宜的酶、酶系统和特定的反响条件； 在选择酶系统时，须根据细胞的构造和化学组成来选择； 常结合其他方法预先处置； 外加酶法外加酶法的特点 优点：选择性释放产物；条件温暖；核酸泄出量少；细胞外形完好。 缺乏 溶酶价钱高 通用性差 产物抑制的存在；如甘露糖对蛋白酶有抑制造用，葡

5、聚糖抑制葡聚糖酶。 酶自溶法2酶自溶法 常采用加热法或枯燥法 比如谷氨酸产生菌，参与0.028mol/L Na2CO3和0.018mol/L NaHCO3配成pH10.0的缓冲液，使成3%的悬浮液加热至70，保温搅拌20min，菌体即自溶。又如：酵母自溶需在4550下保温1224h。 化学试剂法3化学试剂破碎法 外表活性物质 EDTA螯合剂 有机溶剂 变性剂 五、选择破碎方法的根据 1处置量的大小； 2细胞壁的强度和构造； 3目的产物对破碎条件的敏感性； 4破碎后固液分别的难易程度； 5.选择性地释放目的产物。 选择性地释放目的产物仅破坏或破碎存在目的产物的位置周围 细胞膜附近，采用温暖的破碎方法如酶溶法、浸透压冲击法、冻融法； 细胞质内，机械破碎 选择性溶解目的产物 当目的产物与膜或壁结合时，调整溶液pH值、离子强度、添加与目的产物具有亲和性的试剂如螯合剂、外表活性剂等，使目的产物容易释