动物性食品中克伦特罗残留量的测定实验报告

1、潍坊医学院实验报告科目：食品理化检验班级:2015级食品班组别:5姓名：李文远学号：20156340019试验项目：克伦特罗检测（ELISA检测法）日期：2018.4.23一、实验目的：1、掌握ELISA法检测瘦肉精的原理2、掌握快速检测的基本程序及操作，具有独立进行快速检测的基本技能。二、实验原理：间接竞争ELISA方法在酶标板孔条上预包被克伦特罗抗原，加入抗克伦特罗抗体，样本残留的克伦特罗和微孔条上预包被的抗原竞争抗克伦特罗抗体，加入酶标二抗后，用TMBK物（标记物为辣根过氧化物酶）显色。样本吸光值与其残留物克伦特罗呈负相关，与标准曲线比较再乘以其相对应的稀释倍数，即可得出样品中克伦特罗的

2、含量。三、实验主要仪器设备：克伦特罗ELISA检测试剂盒（深圳市绿诗源生物技术有限公司）微孔板酶标仪450/630nm电子称（0.01g）、漩涡混合振荡器、离心机（15ml管和1.5mlep管）、恒温培养箱四、实验步骤：（一）样品前处理1、组织用剪刀剪碎，研钵内研成匀浆，取2g肉/肝脏匀浆放入15ml离心管中2、加入6ml去离子水，充分震荡2min,室温4000r/min以上离心10分钟，（注若组织样本中油脂含量较高，可在振荡后放入85c水浴10min后再离心。）3、取20ul上层液进行分析，样本稀释4倍。（二）分析1、微孔板编号，如1-12号标准品，13/14号样品等（每样品或标准品均做平行

3、对照即各2孔）加标准品/样品：微孔中加入20ul样品或标准品+50ul克伦特罗酶标物+80ul克伦特罗抗试剂，轻轻振荡混匀，盖板膜盖板后，25c避光30min2、洗板：孔内液体甩干，用去离子水液300ul/孔，充分洗涤5次，每次间隔30s,用吸水纸拍干（若有未拍干的气泡用枪头戳破）3、显色：每孔加入50ul底物A+50ul底物B,轻轻振荡混匀，盖板膜盖板后，25c避光15-20min（蓝色）4、测定：加入50ul终止液(黄色)，轻轻振荡混匀。酶标仪450nm/630nm波长检测ODfi(可在加入终止液前目测含量)。五、实验结果及计算：表1OD值在舁厅P标准品1标准品2标准品3标准品4标准品5标

4、准品6猪肉猪肝吸光度值2.7901.2501.0370.6750.3540.1962.6921.489吸光度值2.5771.3561.1560.8740.3610.2092.2781.434吸光度值2.68351.30301.09650.77450.35750.20252.48501.4615平均值吸光度值100%48.56%40.86%28.86%13.32%7.55%92.60%54.46%百分比吸光度值百分比二吸光度值平均值/2.6835克伦特罗百分吸光度值60.00%0 00 %110,06250,1250.250.512-1816克伦轴罗标准品浓度的半时数内分吸光度俏因为相关系数越接

5、近于1说明结果越准确，所以经过多次作图得，把序号1和5的数据删掉，所得的相关系数最大，于是去掉序号1和5所得最后的标准曲线。根据公式y=-0.0951n(x)+0.2784可得所测猪肉样品中克洛特罗浓度的对数为0.0011,即所测瘦肉样品中克伦特罗的浓度为1.0011ppb,因为所测样品稀释了四倍，所以所测猪肉样品中克洛特罗浓度为4.0044ppb;根据公式y=-0.0951n(x)+0.2784可得所测肝脏样品中克伦特罗浓度的对数为0.0607，即所测肝脏样品中克伦特罗的浓度为1.0626ppb，又因为在操作步骤中样品稀释了四倍，所以原肝脏样品中克伦特罗的浓度为4.2503ppb。六、讨论1

6、、本组实验的检测结果为猪肉样品中克洛特罗浓度4.0044ppb,猪肝中克伦特罗浓度经过计算为4.2503ppb。猪肉中克伦特罗标准：加拿大和WHO140ppb,而联合国粮农组织则是10ppb。中国、日本和新西兰规定该国生产不许使用，但进口猪肉中则允许有小于10ppb的残留。根据我国的规定，猪肉和猪肝若为进口猪瘦肉则说明该猪肉克伦特罗含量符合标准，若为本国生产的猪瘦肉则该猪肉中克伦特罗含量超标。综上，本次实验所用猪肉和猪肝克伦特罗含量超标。2、本组实验存在以下问题：本次实验过程中，在等待反应时，将酶标板放在不透光的锡箔纸袋子中，就放在桌子上了，但是其他组的同学不知道袋子中有酶标板，所以就把袋子随手翻过来了，导致我们的实验试剂撒出来了，反应只进行了15分钟左右，没有进行完全，不过本组同学还是完成了随后的实验，得到了实验结果，实验结果和其他组同学比较时发现差距并不大，具有一定可信度，可以继续使用。七、注意事项试剂使用前要回复到室温否则影响结果（室温放置30min以上）洗版拍干后要立即进行下一步否则影响结果每加一种试剂前需轻轻摇匀