参照CLSI EP方案评价直接胆红素试剂分析性能(共6页)

1、PAGE PAGE 6参照(cnzho)CLSI EP方案(fng n)评价直接(zhji)胆红素试剂分析性能摘要目的 通过应用CLSI EP方案分别对国产和进口直接胆红素（DBil）试剂分析性能进行评价，了解国产直接胆红素试剂分析性能能否满足临床需要。方法 在同一台全自动生化分析仪上，同时测定试剂准确度、精密度、最低检测限、线性范围、干扰试验、方法比对实验、稳定性观察等7项技术指标。结果 两种试剂准确度测定，其相对偏差10%；批间变异系数小于4.0%；国产DBil试剂线性范围0.2-595.0mol/L，进口试剂线性范围-0.4-595.7mol/L；国产DBil试剂的最低检测限为0.4mo

2、l/L，进口试剂的最低检测限为0.9mol/L；方法比对实验结果Y0.997X+5.2467，R20.9996（浓度范围0.2-595.0mol/L）；抗干扰能力无明显差异；试剂稳定性相近。结论：国产直接胆红素试剂与进口试剂的分析性能无显著性差异，能满足临床实验室的需要。关键词CLSI EP方案；钒酸盐氧化法； 直接胆红素；分析性能评价Evaluation of the analytical performance of Direct Bilirubin (DBil) reagents with CLSI EP document Xie Wen Hui.( PingChang District

3、 Chinese Medicine Hospital, Ba Zhong 636400,China)【Abstract】 Objective Through evaluate the analytical performance of domestic Direct Bilirubin (DBil) reagents and imported WAKO Direct Bilirubin (DBil) reagents with CLSI document, understanding performance differences of domestic and imported WAKO D

4、irect Bilirubin. Methods On the same automatic biochemical analyzer, determinate the reagents analytical performance at the same time, such as accuracy, precision, minimum detection limit, linear range, anti-interference ability, stability, method comparison. Results Determinate accurate of the two

5、reagents, the relative deviation 10%; the within run coefficient of variation 4.0%; The linear range of self-made DBil reagent is 0.2-595.0mol/L, and the linear range of imported reagent is-0.4-595.7mol/L) ; The minimum detection limit of domestic DBil reagents was 0.4mol/L, of the import reagents w

6、as 0.9mol/L; the result of the method comparation was Y0.997X+5.2467，R20.9996; there was no significant difference with anti-interference ability; the two reagents had similar stability. Conclusions There was no significant difference of analytical performance with self-made Direct Bilirubin (DBil)

7、reagents and imported WAKO Direct Bilirubin (DBil) reagents.【key words】CLSI document；Vanadate Oxidizing Method ; Direct Bilirubin (DBil); performance evaluation 胆红素是红细胞正常或非正常降解(jin ji)后在内皮系统形成的有机复合物，在临床(ln chun)实验室测定直接胆红素（DBil）主要(zhyo)用于肝细胞损害、胆道阻塞、Dubin-Johnson综合征和Rotor综合征等疾病的辅助诊断。直接胆红素与总胆红素结合用于鉴别黄疸

8、类型。所谓直接胆红素，即结合胆红素，能溶于水，能直接与重氮试剂起反应产生重氮色素。DBil测定方法主要有重氮测定法和钒酸氧化法，重氮测定方法主要应用是改良J-G法。1993年日本学者Tokuda发表了血清胆红素的钒酸盐氧化测定法，与传统方法重氮测定法具有良好的相关性。此前国内生化试剂厂家，也对钒酸氧化法直接胆红素测定试剂进行研究开发，但与进口试剂相比较，在试剂性能指标上仍存在较大差异。近来，四川新成生物经过长达7年的自主创新，推出了钒酸氧化法直接胆红素测定试剂盒。我们依照临床和实验室标准协会（Clinical and Laboratory Standards Institute, CLSI）制

9、订的一套评价方案(Evaluation Protocols)，包括EP5-A(临床化学设备精密度性能的评价)，EP6-P （定量分析方法线性的评价），EP9-A（用患者样本的方法比较和偏差的估计），EP10-A（定量临床检验方法的初步评价），现将国产与进口试剂在分析性能方面进行评价。1 材料与方法 1.1 材料1.1.1国产试剂及配套校准品四川新成生物科技有限责任公司直接胆红素测定试剂（规格R1 60ml3, R2 45ml1；批号是0609091；效期是一年）。1.1.2 进口试剂及配套校准品日本和光（WAKO）直接胆红素测定试剂（批号AM672 AJ192 效期2010年7月）。1.1.3

10、 仪器 奥林巴斯AU400全自动生化分析仪1.1.4质控品：宝灵曼质控品(批号PU181949、PU181528)；朗道（RANDOX）质控品（批号578UN）。 1.2 方法1.2.1 测定试剂的试验参数设置 ：按照试剂说明书的要求设置。1.2.2 测定(cdng)方案 有关精密度、准确度、最低检测(jin c)限、线性范围、方法比对试验、干扰实验等评价指标参照相关EP文件及国内外惯用方法进行。 精密度按EP-5A文件(wnjin)评价1：取高值和低值的病人混合血清各1份，分批测定DBil 20次，计算批间精密度。取上述高、低值混合血清在暗室中各自分装成20份，并于-20避光冰冻保存。每天取

11、高、低值混合血清各1份，待其在避光状态下完全溶解后测定DBil，计算批间精密度。线性评价按EP-6A文件评价2：取病人黄疸血清和健康人正常血清标本各1份，分别编为号、 号。将 号高值和号低值分别按3：1、2：2、1：3的比例混合作为 、 、 号。将5个不同浓度的标本随机排列，测定每份标本中的DBil，重复测定4次，取其均值为测定值，与设定值做线性对比。干扰实验按照CLSI EP-7A文件评价3：分别对高、低值混合血清加入干扰物做该实验。方法比对试验按CLSI EP-9A 文件评价4：对40例以上临床样品分别用两种试剂测定，将结果进行数据统计分析，计算其相关系数和回归方程。1.3 统计学处理：数

12、据统计用Excel统计软件进行数据统计。2 结果2.1准确度：分别用国产试剂和进口试剂测定宝灵曼和朗道质控品，通过对测定结果比较（参见表1），相对偏差满足临床的要求（误差10%）。表1：准确度试验结果宝灵曼PU181528 宝灵曼PU181949 朗道578UE均值(mol/L) 靶值(mol/L) 偏差(%) 均值(mol/L) 靶值(mol/L) 偏差(%) 均值(mol/L) 靶值(mol/L) 偏差(%)国产试剂 10.9 10.4 4.81 27.8 27.5 1.09 13.5 13.1 3.10进口试剂 10.8 10.4 3.85 27.9 27.5 1.45 13.4 13.

13、1 2.292.2 精密度：国产试剂和进口试剂分批测定高值混合血清各20次（参见表2），批间变异系数（CV%）分别为3.53%、3.82%；测定低值混合血清时，批间变异系数（CV%）分别为3.75%、4.00%（参见表2），符合临床要求。表2：精密度试验(shyn)结果高值混合血清 低值混合血清国产(guchn)试剂 进口(jn ku)试剂 国产试剂 进口试剂均值(mol/L) 65.2 64.2 2.4 2.5SD 2.30 2.45 0.09 0.01 CV% 3.53 3.82 3.75 4.002.3最低检测限：以蒸馏水为样本，分别用国产试剂和进口试剂重复测定20次，结果为国产DBil

14、试剂的最低检测限为0.4mol/L，进口试剂的最低检测限为0.9mol/L（参见表3）。表3：最低检测限实验结果国产试剂 和光试剂均值(mol/L) 0.25 0.63SD 0.06 0.10CV% 24.00 15.872.4 线性范围测定：国产试剂线性范围评估时相关方程及相关系数分别为Y0.997X+5.2467，R20.9996（浓度范围0.2-595.0mol/L）；进口试剂和线性范围评估时相关方程及相关系数分别为Y0.9984X+9.5042，R20.9986（浓度范围-0.4-595.7mol/L）。2.5 干扰试验：将混合血清分成若干份，加入不同浓度的干扰物质，测定加入干扰物前后

15、TBil的浓度，以相对偏差10%作为有明显干扰的评判指标（参见表4）。表4：最低检测限试验结果乳糜（相当TG浓度mmol/L） VitC（g/L） Hb（g/L）国产试剂 35mmol/L 0.5g/L 5.0g/L进口试剂 35mmol/L 0.5g/L 5.0g/L2.6 方法比对实验：国产试剂与进口试剂同时测定临床标本52例，将测定结果进行相关回归分析，计算出相关方程和相关系数为Y1.0014X-2.0832，R20.9946。2.7 稳定性观察(gunch)：国产试剂经14天热破坏（37）和试剂(shj)仓开瓶（4-10）35天后，测定质控结果和线性实验结果相比热破坏前无显著偏差(pi

16、nch)，反应曲线也没有明显的变化，均能达到反应终点，与进口试剂相近。3 讨论血清直接胆红素测定是肝、胆功能检查中的一项重要检测项目，是对黄疸性疾病进行诊断和鉴别诊断的重要指标，对病程观察有一定意义5。重氮法中的改良JG法有较高的灵敏度、精密度和较宽的线性，但试剂无法长期稳定，溶血可使胆红素测定值偏低，以叠氮钠作为防腐剂时能破坏偶氮试剂，终止偶氮反应，使重氮反应不完全，甚至不呈色。钒酸盐氧化法都是采用无机氧化剂氧化胆红素，引起450 nm波长吸光度的下降，检测结果与传统的重氮法有较好的相关性。胆红素氧化酶法试剂可以长期稳定，特异性好，干扰少，但因为酶的来源、纯度、稳定性及一个波长测定不同胆红素

17、成分等问题，应用具有局限性6，7。参考临床和实验室标准协会（CLSI）标准化文件中的EP系列文件，对国产钒酸盐氧化法测定直接胆红素试剂进行分析性能的系统评价，为临床实验室工作者提供了对方法学评价的标准化途径，为临床实验室出据可靠、准确的结果奠定了基础，对提高临床检验质量起到了积极的推动作用。实验结果表明：钒酸氧化法测定总胆红素的准确度测定，其相对偏差10%；批内变异系数小于4.0%；具有较好的线性范围0.2-595.7mol/L；与进口试剂比对相关方程和相关系数为Y1.0014X-2.0832，R20.9946；对抗脂肪、VitC和Hb干扰的能力较强；试剂开瓶稳定性可达35天。现市面上公认最好

18、的钒酸盐氧化法胆红素测定试剂是进口的和光试剂,但因其价格高,购买周期长,使用效期短等因素限制其应用。实验证实，国产钒酸盐氧化法胆红素测定试剂不仅与WAKO（日本和光）试剂在分析性能上无显著差异，而且价格低于进口试剂。 参考文献1 NCCLS.Evaluation of Precision Performance of Clinical Chemistry Devices;Approved GuidelineS. EP5-A2,1999,19(2):1-49.2 NCCLS.Evaluation of the Linearity of Quantitative Analytical Methods:A Statistical Approach; Approved GuidelineS. EP6-