动物细胞培养和核移植技术教案

1、2.2动物细胞工程2.2.1动物细胞培养和核移植技术学习目标1.归纳动物细胞培养的过程、条件及应用。2.归纳通过动物体细胞核移植技术克隆动物的过程及应用前景。核心素养1.科学思维：能用文字和图示表述克隆动物的培育过程。2.社会责任：了解克隆动物的新进展和尚未解决的问题，理性地看待克隆技术的社会影响。一、动物细胞工程和动物细胞培养1.动物细胞工程基础技术手段应用动物细胞培养技术动物细胞培养、动物体细胞核移植、动物细胞融合、生产单克隆抗体等(1)深入探索并改造生物的遗传特性；(2)大量培养细胞；(3)单克隆抗体的制备等2.动物细胞培养(1)概念：从动物机体中取出相关的组织，将它分散成单个细胞，然后

2、，放在适宜的培养基中，让这些细胞生长和增殖。(2)过程(3)相关概念细胞贴壁：悬液中分散的细胞贴附在瓶壁上。接触抑制：当贴壁细胞分裂生长到表面相互接触时，细胞停止分裂增殖的现象。原代培养：指动物组织消化后的初次培养。传代培养：贴壁的细胞，出现接触抑制后，需要重新用胰蛋白酶来处理，然后分瓶继续培养，让细胞继续增殖的培养过程。(4)培养条件无菌、无毒的环境：培养液和培养用具进行无菌处理，培养液中添加一定量的抗生素，并定期更换培养液，以便清除代谢产物，防止对细胞自身造成危害。营养温度和pH气体环境(5)应用生产生物制品：如病毒疫苗、干扰素、单克隆抗体等。应用于基因工程：动物细胞是基因工程技术中常用的

3、受体细胞。应用于检测有毒物质，判断某种物质的毒性。用于生理、病理、药理等方面的研究，如用于筛选抗癌药物等。归纳总结动物细胞培养过程中的几个要点(1)选取幼龄动物的组织、器官作为材料的原因动物细胞培养的原理是细胞增殖。动物细胞培养时，一般选取幼龄动物的组织、器官，其细胞的分化程度较低，增殖能力强，有丝分裂旺盛，容易培养。(2)将动物细胞分散成单个细胞培养的原因分散成单个细胞后容易培养，细胞所需的营养容易供应，其代谢废物容易排出。同时，分散成单个细胞培养，可使得在细胞水平操作的其他技术得以实现。(3)细胞株和细胞系的区别细胞株：传代培养的细胞能传到1050代，这样的传代细胞称为细胞株。细胞系：传代

4、培养的细胞在传到50代后，有部分细胞的遗传物质发生了改变，获得不死性，这种具有癌变特点的细胞称为细胞系。1.如图为动物细胞培养过程中细胞增殖情况的变化曲线，图中B、E两点表示经筛选、分装后继续培养。下列判断错误的是()A.B点之前的培养称为原代培养，之后的培养称为传代培养B.接触抑制现象主要发生在AB段和DE段C.分瓶后的每个培养瓶中的细胞群称为一个克隆D.E点后的细胞大多数具有异倍体核型，可连续传代答案C解析人们通常将动物组织消化后的初次培养称为原代培养，贴满瓶壁的细胞用胰蛋白酶处理，分瓶继续培养，让细胞继续增殖的培养过程称为传代培养，B点之后细胞继续生长，可见B点之后进行了传代培养，A正确

5、；当贴壁细胞分裂生长到表面相互接触时，细胞就会停止分裂增殖，即会发生接触抑制现象，在AB段和DE段细胞几乎生长停滞，可能发生了接触抑制，B正确；细胞克隆的最基本要求是必须保证分离出来的是一个细胞而不是多个细胞，C错误；已获无限增殖能力能持续生存的细胞系，称为连续细胞系或无限细胞系，无限细胞系大多已发生异倍化，具异倍体核型，D正确。2.下列属于动物细胞培养与植物组织培养区别的是()A.动物细胞培养基与植物细胞培养基的成分有所不同B.动物细胞培养不需要在无菌条件下进行C.动物细胞培养可发生遗传物质改变，而植物组织培养不能D.植物组织培养和动物细胞培养都体现了细胞的全能性答案A解析动物细胞培养所用的

6、培养基与植物组织培养所用的培养基的成分不同，如培养动物细胞的培养基需加入血清，而植物组织培养所用的培养基则不需要加入血清；动物细胞培养与植物组织培养都需要在无菌、人工控制的条件下进行；动物细胞培养与植物组织培养过程中都可发生遗传物质的改变；植物组织培养最终能够形成完整的植物体，能体现植物细胞的全能性，动物细胞最终不能被培养成新的个体，不能体现动物细胞的全能性。前挂后连植物组织培养与动物细胞培养的比较比较项目植物组织培养动物细胞培养生物学原理植物细胞的全能性细胞增殖培养基性质固体液体培养基成分蔗糖、氨基酸、水、矿物质、生长素、细胞分裂素、琼脂等葡萄糖、氨基酸、促生长因子、无机盐、微量元素、水、血

7、清、血浆等培养结果新的植株或组织大量新细胞或细胞产物应用快速繁殖；培育无病毒植株；细胞产物的工厂化生产；制作人工种子生产病毒疫苗、干扰素、单克隆抗体等；检测有毒物质；生理、病理、药理研究培养条件无菌、适宜的温度和pH取材植物器官、组织或细胞动物早期胚胎、幼龄动物的器官或组织培养对象植物器官、组织或细胞分散的单个细胞过程脱分化、再分化原代培养、传代培养细胞分裂、生长、分化的特点分裂：形成愈伤组织；分化：形成根、芽只分裂不分化；贴壁生长；接触抑制二、动物体细胞核移植技术和克隆动物1.概念将动物的一个细胞的细胞核，移入一个已经去掉细胞核的卵母细胞中，使其重组并发育成一个新的胚胎，最终发育为动物个体。

8、2.分类包括胚胎细胞核移植和体细胞核移植，其中胚胎细胞核移植较易成功。3.过程4.体细胞核移植技术的应用前景(1)加速家畜遗传改良进程，促进优良畜群繁育。(2)增加濒危动物的存活数量。(3)生产珍贵的医用蛋白。(4)用于组织器官的移植。(5)用于科学研究。5.体细胞核移植技术存在的问题(1)成功率非常低。(2)克隆动物存在健康问题。(3)克隆动物食品的安全性存在争议等。归纳总结1.细胞核移植的原理动物体细胞核移植的原理是细胞核的全能性，而不是动物细胞的全能性。因为动物体细胞的全能性受到限制，不能经培养直接发育成完整个体，所以用体细胞核移植技术能够得到克隆动物，说明动物体细胞的细胞核具有全能性。

9、2.供体和受体的选择(1)供体：一般选用传代10代以内的细胞，因为10代以内的细胞一般能保持正常的二倍体核型，保证了供体细胞正常的遗传基础。(2)受体：选择M期的卵母细胞，其原因是：卵母细胞的细胞质内存在激发细胞核全能性表达的物质。卵母细胞体积大，便于操作。卵母细胞内卵黄多，营养物质丰富。3.克隆动物的遗传特点克隆动物的亲本有三个，即体细胞核供体、卵母细胞细胞质供体和代孕母体。(1)克隆动物细胞核基因来自体细胞核供体，因此，克隆动物的性状与体细胞核供体基本相同。(2)克隆动物的细胞质基因来自卵母细胞，因此，克隆动物的性状与卵母细胞供体部分相同。(3)代孕母体没有为克隆动物提供遗传物质，因此，克

10、隆动物的性状与代孕母体没有直接关系。3.如图为某哺乳动物的生殖过程图，下列叙述正确的是()A.动物个体2为克隆动物，c为高度分化的体细胞B.动物个体2的遗传性状与提供b细胞的母体完全不同C.产生动物个体2的生殖方式为有性生殖D.e细胞为完成减数分裂的卵细胞答案A解析通过克隆技术培育的动物称为克隆动物，提供细胞核的是高度分化的体细胞，A项正确；克隆动物绝大部分性状与供体动物相同，少数性状(由线粒体DNA控制的性状)与提供卵母细胞的动物相同，B项错误；动物的克隆实际上是无性生殖过程，C项错误；e细胞是处于减数第二次分裂中期的卵母细胞，并没有完全完成减数分裂，D项错误。拓展提升判断有性生殖与无性生殖

11、的两种方法(1)从概念上判断：有性生殖是指经两性生殖细胞结合而成的合子或有性配子直接发育成个体的生殖方式；无性生殖是指不经过生殖细胞的结合而由亲本直接产生子代的生殖方式。(2)从培养细胞的种类上判断：组织培养中培养的不是体细胞而是有性配子或合子时，才属于有性生殖；植物组织培养、植物体细胞杂交和动物细胞核移植都属于无性生殖。4.(2018全国，38)2018年细胞期刊报道，中国科学家率先成功地应用体细胞对非人灵长类动物进行克隆，获得两只克隆猴“中中”和“华华”。回答下列问题：(1)“中中”和“华华”的获得涉及核移植过程，核移植是指。通过核移植方法获得的克隆猴，与核供体相比，克隆猴体细胞的染色体数

12、目(填“减半”“加倍”或“不变”)。(2)哺乳动物的核移植可以分为胚胎细胞核移植和体细胞核移植，胚胎细胞核移植获得克隆动物的难度(填“大于”或“小于”)体细胞核移植，其原因是。(3)在哺乳动物核移植的过程中，若分别以雌性个体和雄性个体的体细胞作为核供体，通常，所得到的两个克隆动物体细胞的常染色体数目(填“相同”或“不同”)，性染色体组合(填“相同”或“不同”)。答案(1)将动物的一个细胞的细胞核，移入一个已经去掉细胞核的卵母细胞中不变(2)小于胚胎细胞分化程度低，恢复全能性相对容易(3)相同不同解析(1)核移植是指将动物的一个细胞的细胞核，移入一个已经去掉细胞核的卵母细胞中，形成重组细胞。重组

13、细胞形成的早期胚胎可移植到受体子宫内进一步发育，最终分娩得到克隆动物。因为染色体在细胞核中，所以克隆动物体细胞的染色体数目与提供细胞核的个体的体细胞相同。(2)由于动物的胚胎细胞分化程度低，恢复全能性相对容易，而动物的体细胞分化程度高，恢复全能性十分困难，因此，动物体细胞核移植的难度明显高于胚胎细胞核移植。(3)哺乳动物雌雄个体的体细胞中，细胞核内常染色体的数目是相同的，性染色体组合是不同的。若分别以雌性个体和雄性个体的体细胞作为核供体，则得到的克隆动物的体细胞中常染色体的数目相同，性染色体组合不同。1.判断正误：(1)动物细胞培养体现了动物细胞的全能性()(2)从动物机体取出相关组织，可以用

14、胃蛋白酶将它分散成单个细胞()(3)动物细胞在培养的过程中一些细胞会发生遗传物质的变化()(4)在动物细胞的培养过程中，使用的合成培养基中可以不加入血清和血浆等物质()(5)体细胞核移植技术产生的个体组织与供体的性状完全相同()答案(1)(2)(3)(4)(5)2.下列关于动物细胞培养的叙述中，不正确的是()A.传代培养时需要用胰蛋白酶处理贴壁生长的细胞B.细胞的癌变发生于原代培养向传代培养的过渡过程中C.癌细胞在培养瓶中不会出现接触抑制现象D.动物细胞培养一般需要使用CO2培养箱答案B解析由原代培养分瓶进行传代培养时，需要用胰蛋白酶或胶原蛋白酶处理贴壁生长的细胞，A项正确；细胞的癌变一般发生

15、于50代后的细胞培养过程中，B项错误；癌细胞膜上糖蛋白减少，细胞间的黏着性降低，失去了接触抑制，容易分散和转移，C项正确；动物细胞培养的场所是CO2培养箱，培养箱内含有95%的空气加5%的CO2的混合气体，为动物细胞提供适宜的气体环境，D项正确。3.生物技术的发展速度很快，已灭绝生物的“复生”将不再是神话。如果世界上最后一头野驴刚死亡，以下提供的“复生”野驴个体的方法中能够成功的是()A.将野驴的体细胞取出，利用细胞培养技术，可培育成新个体B.将野驴的体细胞两两融合，再经组织培养培育成新个体C.取出野驴的体细胞核移植到母家驴的去核卵母细胞中，经孕育培养成新个体D.将野驴的一个基因导入家驴的受精

16、卵中，培育成新个体答案C解析由于动物细胞的全能性受到限制，目前动物细胞通过细胞培养或通过动物细胞融合技术还不能培养成动物个体；将野驴的一个基因导入家驴的受精卵中，培育成的是带有野驴基因的家驴；野驴的体细胞核中具有发育成野驴的全部基因，因此通过动物体细胞核移植技术，可使野驴“复生”。4.下列对动物核移植技术的描述不正确的是()A.体细胞核移植过程中通常采用M期卵母细胞作为受体细胞B.体细胞核移植的过程中可通过显微操作去除卵母细胞中的细胞核C.哺乳动物核移植包括胚胎细胞核移植和体细胞核移植，动物体细胞核移植的难度明显低于胚胎细胞核移植D.通过体细胞核移植方法生产的克隆动物不是对体细胞动物进行了10

17、0%的复制答案C解析体细胞核移植过程中通常采用M期卵母细胞作为受体细胞，A正确；体细胞核移植的过程中可通过显微操作去除卵母细胞中的细胞核，B正确；哺乳动物核移植包括胚胎细胞核移植和体细胞核移植，动物体细胞核移植的难度明显高于胚胎细胞核移植，C错误；通过体细胞核移植方法生产的克隆动物不是对体细胞动物进行了100%的复制，因为还有细胞质基因，D正确。5.科学家通过转基因技术获得了含有人生长激素基因的奶牛，如果要加速转基因奶牛的繁育，可以对此转基因奶牛进行克隆(如图所示)。请结合图示回答下列相关问题：(1)在进行细胞培养之前，要对取自转基因奶牛的组织细胞进行分离，形成单个细胞，这个过程中需要利用酶处

18、理。(2)用于核移植的供体细胞，一般选用传代10代以内的细胞，原因是。(3)在进行原代培养时，细胞增殖的方式是，此外，细胞增殖还表现出_和接触抑制等特点。(4)将进行培养的供体细胞注入去核的卵母细胞中，去除卵母细胞的细胞核的目的是。(5)将重组细胞在培养液中培养成的重组胚胎移入受体母牛后，该母牛就会生出与供体奶牛遗传物质相同的犊牛，但也不是100%的复制，原因最可能是。答案(1)胰蛋白(或胶原蛋白)(2)该种细胞代谢旺盛、分裂能力强，且遗传物质没有发生改变(3)有丝分裂贴壁生长(4)使克隆出的动物个体的遗传物质几乎全部来自供体细胞(5)生物的性状受细胞核基因和细胞质基因共同控制；生物的性状还受

19、环境因素的影响解析(1)在进行动物细胞培养前常用胰蛋白酶或胶原蛋白酶处理动物组织细胞使其分散开来。(2)传代10代以内的细胞代谢旺盛、分裂能力强，遗传物质没有发生改变，适于作动物体细胞核移植的供体细胞。(3)在进行原代培养时，细胞以有丝分裂的方式进行增殖，同时表现出贴壁生长和接触抑制的现象。(4)去除卵母细胞的细胞核的目的是使克隆出的动物个体的遗传物质几乎全部来自供体细胞。(5)生物的性状是细胞核基因和细胞质基因共同作用的结果，同时，生物的性状还受环境的影响，因此，克隆动物不可能是供体奶牛100%的复制品。题组一动物细胞工程和动物细胞的培养1.CCTV4“国际频道”曾报道，广东出入境检疫部门连

20、续两次从美国进口冻猪肾和加拿大进口冻猪肉中检测出兽药残留物莱克多巴胺。这种兽药对人体细胞的毒性大小可以采用的检测技术是()A.组织培养技术B.细胞融合技术C.动物细胞培养D.基因拼接技术答案C解析动物细胞培养可以应用于检测有毒物质，判断某种物质的毒性。2.一般来说，动物细胞体外培养需要满足的条件有()无毒的环境无菌的环境培养液中需加血浆温度与动物体温相近需要O2加CO2维持培养液的pHA.B.C.D.答案A解析动物细胞体外培养要求环境无菌、无毒，在细胞培养液中需添加血清、血浆等一些天然成分，培养温度一般与动物体温相近。动物细胞培养还需要O2和CO2，O2是细胞代谢所必需的，CO2可维持培养液的

21、pH。3.实验小鼠皮肤细胞培养(非克隆培养)的基本过程如图所示。下列叙述错误的是()A.甲过程需要对实验小鼠进行消毒B.乙过程对皮肤组织可用胰蛋白酶消化C.丙过程得到的细胞大多具有异倍体核型D.丁过程得到的细胞可能具有异质性答案C解析进行细胞培养前需要对提供实验材料的动物进行消毒，A正确；进行培养的组织需先用胰蛋白酶或胶原蛋白酶处理，使其消化分散成单个细胞，B正确；丙过程属于原代培养，细胞的核型稳定，C错误；丁过程属于传代培养，期间部分细胞会出现异质性，D正确。4.下列关于动物细胞培养技术应用的叙述，错误的是()A.可用于检测某种物质的毒性B.可通过培养各种病变细胞，用于药理等方面的研究C.可

22、通过动物细胞的大规模培养来生产病毒疫苗、干扰素等D.经过脱分化、再分化，可构建人造皮肤答案D解析动物细胞培养没有脱分化与再分化过程。5.在将动物组织块分散成单个细胞时，可以使用胰蛋白酶。由此判断以下推测不合理的是()A.动物细胞之间可能依靠蛋白质相互联系B.处理时一定要注意处理时间、加酶量C.胰蛋白酶一定不会对动物细胞造成损伤D.动物细胞培养液的pH应与胰蛋白酶作用的适宜pH基本一致答案C解析胰蛋白酶可使蛋白质分解，由胰蛋白酶可破坏动物细胞之间的联系，可推测动物细胞之间可能依靠蛋白质相互联系；细胞膜中含有蛋白质成分，所以一定要注意处理的时间和酶的用量，以防止对动物细胞造成损伤；酶促反应需要适宜

23、的pH，所以培养液的pH应与胰蛋白酶作用的适宜pH基本一致。6.对某种动物的肝肿瘤细胞进行细胞培养，下列说法错误的是()A.在利用肝组织块制备细胞悬液时，可用胰蛋白酶或胶原蛋白酶处理B.细胞培养应在含5%CO2的恒温培养箱中进行，CO2的作用是刺激细胞呼吸C.为了防止细胞培养过程中细菌的污染，可向培养液中加入适量的抗生素D.在合成培养基中，通常需加入血清、血浆等天然成分答案B解析在利用肝组织块制备细胞悬液时，可用胰蛋白酶或胶原蛋白酶处理，以分解细胞间的蛋白质，得到单个细胞；细胞培养应在含5%CO2的恒温培养箱中进行，CO2的作用是维持培养液的pH；为了防止细胞培养过程中细菌的污染，要求对培养液

24、进行消毒、灭菌，也可向培养液中加入适量的抗生素；合成培养基通常需加入血清、血浆等天然成分。7.动物细胞体外培养时，通常要在培养基中补充一定浓度的某些物质。如图是血清对正常细胞和癌细胞培养影响的实验结果，不能从该图获得的结论是()A.正常细胞与癌细胞的增殖速率相同B.有无血清对正常细胞培养的影响较大C.培养基中补充血清有助于正常细胞的培养D.培养基中是否补充血清对癌细胞的培养影响不大答案A解析分析图中曲线可知，对癌细胞来说，相同培养时间内，培养基中有无血清，其细胞数目相差不大，说明培养基中有无血清对癌细胞的培养影响不大；对正常细胞来说，在相同的培养时间内，有血清的培养基中培养的细胞数目远远多于没

25、有血清的培养基中培养的细胞数目，说明有无血清对正常细胞的培养影响较大；在相同条件和相同的培养时间内，癌细胞和正常细胞的数目差距较大，正常细胞达到一定的数目后不再增加，而癌细胞却能不断增加。题组二动物体细胞核移植技术和克隆动物8.下列关于哺乳动物体细胞核移植技术和克隆动物的叙述，正确的是()A.体细胞核移植过程中可以用任何细胞作为受体细胞B.目前科学家可以用类似植物组织培养的方法获得完整的动物个体C.利用动物体细胞核移植技术可有选择地繁殖某一性别的家畜D.用于核移植的供体细胞一般都选用传代50代以内的细胞答案C解析体细胞核移植过程中常用减数第二次分裂中期的卵母细胞作为受体细胞；动物体细胞的全能性

26、受到限制，不能通过类似植物组织培养的方法获得动物个体；用于核移植的供体细胞一般是10代以内的细胞；克隆动物细胞核内的遗传物质来自供体细胞，其性别与提供细胞核的动物一致，因此可有选择地克隆某一性别的家畜。9.科学家培育克隆羊时，使用了三种细胞核的供体细胞，分别将这些细胞核移入去核卵母细胞的细胞质中，形成重组细胞，发育成重组胚胎，这些重组胚胎的发育情况如下表所示。据此分析不正确的是()细胞核供体细胞的类型妊娠数/受体母羊数乳腺上皮细胞1/13胚胎成纤维细胞4/10早期胚胎细胞14/27A.早期胚胎细胞作为细胞核的供体细胞妊娠成功率最高B.克隆羊的遗传信息与细胞核的供体细胞完全相同C.体细胞核移植难

27、度高于胚胎细胞核移植D.重组细胞的发育与去核卵母细胞的细胞质有关答案B解析分析表格数据可知，早期胚胎细胞作为细胞核的供体细胞妊娠成功率最高，A正确；克隆羊的培育用到了核移植、胚胎移植技术，克隆羊细胞核的遗传信息来自细胞核的供体，细胞质的遗传信息来自去核卵母细胞，B错误；对比表格中的数据可知，体细胞核移植难度高于胚胎细胞核移植，C正确；核移植中作受体细胞的都是卵母细胞，可见重组细胞发育与去核卵母细胞的细胞质有关，D正确。10.核移植的受体细胞是M期卵母细胞，下列有关说法错误的是()A.M期卵母细胞的细胞质中含有促进细胞核全能性表达的物质B.M期卵母细胞体积比较大，操作起来相对容易C.可以把供体细

28、胞直接注入去核的卵母细胞中D.M期卵母细胞对克隆动物的遗传特性没有任何影响答案D解析直接把供体细胞注入去核的卵母细胞中也是可以的，并且这样可以减少对细胞核的损伤，更有利于重组细胞的分裂；M期卵母细胞的细胞质中含有少量的遗传物质，也会对克隆动物的遗传特性产生影响。11.下列有关体细胞核移植技术的说法，不正确的是()A.体细胞核移植技术在多种动物中获得了成功，成功率非常高B.克隆技术的各个环节有待于进一步改进C.大多数克隆动物还存在一些遗传和生理缺陷类的健康问题D.克隆动物食品的安全性问题仍然存在争议答案A解析尽管体细胞核移植技术已经在许多种动物中获得成功，但其成功率仍然非常低，产下的活克隆动物占

29、移植克隆胚胎的比率平均不到10%。12.下图是某克隆羊的培育过程模式图，与获得该克隆羊接近的生殖方式和其发育成熟时所分泌的主要性激素分别是()A.无性生殖；雄性激素B.无性生殖；雌性激素C.有性生殖；雄性激素D.有性生殖；雌性激素答案A解析克隆羊的产生属于无性生殖；由于此过程是雄性羊供核，故得到的克隆羊为雄性，其分泌的性激素主要是雄性激素。13.某生物兴趣小组对一种抗癌新药进行实验时，以动物肝癌细胞为材料，测定抗癌药物对体外培养细胞增殖的影响。请回答下列有关动物细胞培养的问题：(1)在动物细胞培养时，将细胞所需的营养物质按其种类和所需数量严格配制而成的培养基称为培养基。通常在培养基中还需要加入

30、适量等一些天然成分。细胞培养应在含5%CO2的恒温培养箱中进行，CO2的作用是。另外，还应该保证被培养的细胞处于、的环境。(2)在细胞生长过程中，当细胞贴壁生长到一定程度时，其生长会受到抑制，这种现象称为。(3)为了防止细胞培养过程中细菌的污染，可向培养液中加入适量的。(4)请你帮助兴趣小组的同学分析本实验，实验的自变量是，实验组和对照组除了自变量不同外，其他处理均应该相同，这是为了遵循实验设计的_原则。答案(1)合成血清、血浆维持培养液的pH无菌无毒(2)接触抑制(3)抗生素(4)是否加入抗癌药物单一变量解析(1)将动物细胞所需要的各种营养物质按其种类和所需数量严格配制而成的培养基，称为合成培养基。由于对细胞所需的营养物质还没有完全搞清楚，因此，在使用合成培养基时，还要加入一些动物血清、血浆等天然成分。细胞培养所需的气体中有CO2，作用是维持培养液的pH。被培养的细胞必须处于无菌、无毒的环境中，才能保证细胞正常地生长增殖。(2)动物细胞在分裂过程中有接触抑制的现象。(3)抗生素能杀死培养基中的微生物，保证无菌、无毒的环境。(4)实验的目的是要测定抗癌药物对体外培养细胞增殖的影响，故实验的自变量为抗癌药物的有无，其他无关变量应该相同，否则会干扰实验结果，这种设计遵循的是实验的单一变量原则。14.下图表示通过核移植等技术获得某种克隆哺乳动物(二倍体)的流程