细菌的形态与染色.

1、实 验 一 细菌的形态与染色一. 录像：微生物学发展史二. 实验室规则介绍（生物安全）三. 细菌形态示教及示教操作四. 学生操作： 革兰染色法（Gram stain)五. 作业实验室规则介绍（生物安全）牢固树立“有菌观念” 严格执行“无菌操作” 严防“杂菌污染”实验室规则介绍（生物安全）一. 安全使用水、电、煤二. 保持实验室安静有序、爱护实验器材三. 培养良好习惯，树立自我保护意识 穿实验服 不在实验室内吃东西 不将任何实验材料（如细菌涂片、细菌培养物）携带出实验室 实验室规则介绍（生物安全） 若有传染性材料污染桌面、地面、书、衣物或人体，应立即报告教师，并在教师指导下进行消毒处理 实验用过

2、的物品归还原处，带有传染性的吸管、玻片等，必须放在指定地点 实验结束后，清洗消毒（0.1%新洁尔灭溶液中浸泡）双手后方可离开 四. 做好实验室清洁卫生工作细菌形态示教及示教操作细菌的形态结构 细菌的大小及排列 细菌的基本结构细菌的特殊结构 荚膜、鞭毛、菌毛、芽孢3.细菌的染色检查法细 菌 形 态 示 教 荚膜肺 炎 球 菌 荚 膜 （capsule）细菌形态示教 鞭毛、菌毛菌毛 pilus电镜下变形杆菌周身鞭毛flagellum 光学显微镜下细 菌 形 态 示 教 芽孢破伤风杆菌芽孢 endospore of C.tetani光学显微镜下形态电子显微镜下形态 G+菌 G-菌等电点 PI 23

3、PI 45 带负电荷多 带负电荷少通透性 低 高 肽聚糖多，脂质少 肽聚糖少，脂质多 酒精不易进入 酒精易进入Gram stain 原 理 Gram stain 意 义1.鉴别细菌：分成G+菌和G菌2. 选择药物： G+菌和G菌对抗菌药物 敏感性不一样3. 与致病性有关： G+ 菌产生外毒素 G菌产生内毒素革兰染色法 Gram stain 学生操作：两人一组材料：两人一组菌种： 表皮葡萄球菌及大肠杆菌斜面各一支 玻片每人1张 革兰染色液一套 接种环每人一支革兰染色法 Gram stain 基本过程： 涂片 干燥 固定4. 染色接种棒冷却事先加好NS量少革兰染色法 Gram stain1. 涂片

4、制备：按下图分别加生理盐水各一滴，再按下图分别加菌研匀 菌 1菌 1+ 菌 2菌 2革兰染色法 Gram stain制备一张好涂片的基本要素：1.玻片不含油脂(若有油脂可用卷筒纸蘸95%酒精擦干净)。2.生理盐水应尽量少加。3.取菌不宜过多。2.干燥： 自然干燥或烘干（标本面朝上）3.固定： 热固定（火焰上来回通过3次固定）目的： 1. 使细胞质凝固,以固定细胞形态,并使之牢固附着在载玻片上。2. 杀死细菌，操作更安全涂片结晶紫初染1min 碘液媒染1min95%酒精脱色30s复红复染30s水洗，干 革 兰 染 色 全 过 程 示 意 图（紫 碘 酒 红， 1 1 半半，每次水洗，阳紫阴红。）

5、水洗，干烘干,油镜检水洗，干水洗，干水洗，干实 验 报 告（格 式）一. 目的二. 材料与方法三. 结果（需用彩笔画示意图）四. 分析与讨论 作为平时成绩记入总成绩革兰染色影响因素分析 脱色是关键 菌液涂片不能太厚3. 细菌生长周期的影响细 菌 形 态 示 教（革兰染色）Streptococcus链球菌 streptococcus 链球菌Staphylococcus葡萄球菌E.Coli大肠杆菌细 菌 形 态 示 教美 蓝 染 色奈 瑟 染 色脑脊液标本涂片中的脑膜炎双球菌 1. 分成10组，每组23人，每组成员参与讨论1次，以小组计成绩，占总成绩的10%。2. 评价指标包括以下5个方面（每个指

6、标2分）： A. 主题明确，讲解思路清晰并能即兴回答提问 B. 口头表达能力强，语言生动流畅，能吸引学生的注意力 C. PPT制作精美，重点突出并与讲解内容协调 D. 资料准备翔实，数据可靠 E. 有良好的团队协作精神讨论课基本要求讨论课安排消毒与灭菌 （实验二）奈瑟菌（实验三）细菌感染的实验室诊断（实验四）微小杆菌等（实验七）梅毒螺旋体（实验八）钩端螺旋体（实验八）立克次体（实验八）支原体（实验八）衣原体（实验八）真菌（实验九）由专人负责安排讨论课讨论课提纲：消毒与灭菌1、何为消毒、灭菌、防腐、无菌？2、你认为在哪些情况下常会使用到消毒与灭菌技术？3、消毒与灭菌通常可使用哪些方法？4、湿热的灭菌效果为什么比干热要好？5、当对某一件器物既可用物理方法也可用化学方法 进行消毒灭菌时，你认为应该优先选哪一种方法 较好？为什么？6、你认为物理或化学方法可导致微生物或感染因子 灭 活或死亡的机理是什么？ 注：讲解时间必须控制在20min之内，留5min 让