细菌的分布与分离接种

1、医学微生物学实验微生物学教研室 2011年4月实验内容一、细菌分布实验 空气中细菌的检查（操作） 皮肤、日常物品细菌的检查（操作）二、细菌分离接种技术（操作） 平板划线接种法；斜面培养基接种法 液体培养基接种法；半固体穿刺接种法三、细菌在培养基上生长现象（示教） 目的要求认识细菌在外界的分布规律掌握细菌分离培养基本技术认识细菌在不同培养基中的生长现象一、细菌的分布实验（1）空气细菌检查 材料：培养基，普通琼脂平皿（2）皮肤（其他物品）消毒前后的细菌检查 材料：培养基，无菌生理盐水，75%酒精棉球， 2.5%碘酒棉球，无菌棉棒（3）自来水中的细菌检查 材料：培养基，无菌棉棒，酒精灯1. 空气中细

2、菌的检查(操作,4块/室) 取三块琼脂平板，将2个打开皿盖分别置于不同的环境1530min后，盖好皿盖。另外1个不启盖作为对照。置37培养1824h。材料：普通琼脂平板方法：结果：计数菌落数，观察菌落数的差异。2、皮肤（其他物品）消毒前后的细菌检查方法在1个平皿底部做好标记，分为消毒前与消毒后两个区域。取一支无菌棉签放入无菌盐水中浸泡，在管壁上挤干水后擦拭皮肤或其他物品，然后将该棉签涂布于无菌平皿消毒前区域，作来回划线，注意勿划破琼脂表面。将皮肤区域或物品用碘酒棉球及酒精棉球涂擦消毒，另取一支无菌棉棒用消毒前所述方法取材，接种于标有消毒后的平皿区域。平皿37、24h培养后取出观察表面有无细菌生

3、长，比较消毒前后菌落数目，描述菌落特征。结果：计数菌落数371824h消毒前消毒后自来水中的细菌检查在1个平皿底部做好标记。用酒精灯对水管口灭菌，拧开水管开关放水15S。取一支无菌棉签蘸取自来水，将该棉签涂布于标有消毒前的无菌琼脂平皿表面，作来回划线，注意勿划破琼脂表面。将平皿于37、24h培养后取出观察平皿表面有无细菌生长，描述菌落特征。1. 半固體培養基接種法（操作）2. 斜面培養基接種法3. 液體培養基接種法 細菌的接種法（一）分離培養1. 平板分離劃線接種法（操作）（二）純培養 接种环（上）和接种针（下） 柄约22cm25mm绝缘柄约7.5cm金属柄约14.5cm58cm安装环(针)的

4、螺口(约8mm)无菌操作无菌操作Aseptic area10-20cm外焰焰芯内焰菌液采取法（一）平板划线接种法（分离培养法）连续划线法 分段划线法 IVIII1/5 I1/10 Rotate 90Flame loopRotate 90Rotate 90III1/4 Flame loop（一）平板划线接种法（分离培养法）培养结果132注意事项：1.区之间接种 要灭菌2.用力适当，不要划破 琼脂表面3.注意无菌操作（二）液体培养基接种法（二）液体培养基接种法（三）半固体穿刺接种法用途：观察细菌动力，保存菌种。斜面培养基接种法（操作）用途：常用于扩大纯种细菌及实验室保存菌种。斜面培养基接种法液体培养基接种法半固体培养基接种法（操作）方法：穿刺接种结果：沿穿刺线生长动力- 扩散生长动力+三、细菌在培养基上生长现象（示教）沉淀成链生长浑浊均匀分散生长菌膜表面生长（需氧菌）1. 固体2. 半固体3. 液体菌落 菌苔动力+ 动力-固体培养基生长现象液体培养基中生长现象沉淀生长混浊生长表面生长半固体培养基中生长现象有鞭毛动力+无鞭毛动力沿刺线生长