白芍总苷的研究报告进展综述

1、-. z.白芍总苷研究进展的综述目 录摘要1关键词1白芍化学成分研究1.1 单萜及其苷类成分21.2 黄酮及其苷类化合物2 1.3 鞣质类2 1.4 多糖3二、提取工艺2.1 回流提取法32.2 煎煮法42.3 超声提取法4三、精制工艺3.1 大孔树脂纯化法5 3.2 联合技术纯化6四、检识4.1 liebermann-burchard反响64.2 薄层色谱检识74.3 指纹图谱检识7五、含量测定的方法5.1 高效液相法测白芍中白芍总苷的含量85.2 其他方法测白芍中白芍总苷的含量8 药理作用6.1 TGP对心血管系统作用96.2TGP对神经系统作用96.3TGP对内分泌代谢系统作用96.4T

2、GP对消化系统作用96.5TGP对泌尿生殖系统作用106.6TGP对皮肤及骨骼系统作用10七、展 望10八、参考文献10-. z.【摘要】：白芍来源于毛茛科植物芍药的枯燥根，含芍药苷、芍药内酯苷、氧化芍药苷、苯甲酰芍药苷等单萜类化合物, 合称白芍总苷。近年来由于提取工艺以及检测方法的提高，对白芍中的白芍总苷的研究越来越深入，本文就白芍中的白芍总苷的提取别离、含量等研究作综述。 【关键词】：白芍总苷，提取，纯化，含量测定 白芍来源于毛茛科植物芍药Paeonia lactif loraPa ll1 的枯燥根, 别名金芍药, 主产于*、*等地。白芍性微寒, 味微苦、酸, 归肝、脾经, 具有平肝止痛、

3、养血调经、敛阴止汗等成效。白芍中主要含芍药苷、芍药内酯苷、氧化芍药苷、苯甲酰芍药苷等单萜类化合物, 合称白芍总苷( TGP)1，也是白芍的有效部位, 具有镇静镇痛、抗炎、免疫调节等作用。因此对于白芍总苷的提取别离、含量测定的研究很有必要性。【 abstract 】: the root of herbaceous peony from ranunculaceae plant peony dry root, including paeoniflorin, paeonia lactiflora lactone glycosides, o*idation paeoniflorin, benzoyl p

4、aeoniflorin and single terpenoids, root of herbaceous peony are total glycosides. In recent years due to the e*traction technology and the improvement of detection method, the root of herbaceous peony root of herbaceous peony total glycosides research more and more thorough, in this paper the root o

5、f herbaceous peony root of herbaceous peony total glycosides e*traction separation, content and research review.【 key words 】: root of herbaceous peony total glycosides, e*traction, purification, the content determinationRoot of herbaceous peony from ranunculaceae plant peony Paeonia lactif loraPa l

6、l1 dry root, alias gold peony, mainly produced in zhejiang, anhui, sichuan, etc. Root of herbaceous peony se* small cold, taste slightly bitter, acid to the liver, spleen, liver pain with flat, keep blood to regulate the menstrual function, gathered Yin hidroschesis effect and so on. The main root o

7、f herbaceous peony contain peony glucoside, paeonia lactiflora lactone glycosides, o*idation paeoniflorin, benzoyl paeoniflorin and single terpenoids, root of herbaceous peony are total glycosides (TGP) 1, is also the root of herbaceous peony effective parts, have posed analgesic, anti-inflammatory

8、and immune regulation effect. So for the root of herbaceous peony total glycosides in the e*traction and separation of the content determination, the research is a necessity-. z.一白芍化学成分研究1.1 单萜及其苷类成分1963 年, Shibata S. 等首次从白芍的根中别离得到一种蒎烷单萜苷,命名为芍药苷paeoni-florin2。在1972年,Kaneda M.等用*射线单晶衍射法确定了它的构造,并同时别离得

9、到了羟基芍药苷o*ypaeoniflorin,苯甲酰芍药苷benzoylpaeoniflorin和白芍苷albiflorin 3 。 随后,Kitagawa等从牡丹皮中别离得到苯甲酰羟基芍药苷benzoylo*ypaeoniflorin4， Murakami N.等别离出了氧化苯甲酰芍药苷5 等成分。1981 年,日本学者Shimizu M.等从芍药的根中别离得到了新的单萜芍药苷元酮 paeoniflorigenone 6, 此外，Shibutani S. 也得到了gallotan-nin 7。1983 年,郎惠英等从白芍的根中别离得到两个单萜苷,分别是 -10-蒎烯基-巢菜苷Z-(1S,5R

10、)-pinen-10-yl-vicianoside8和药新苷lactiflorin9。在1990年，Jin Yu等修正了郎惠英等人会出的该化合物的构造式10。1985 年, Hayashi T 等人从芍药根中别离得到Paeonilacto-neA、B和C11 。20世纪90年代初, Kadota S.等人又得到一新的单萜palbinone12,并采用2D-NMR技术确定了它的构造。1996年日本学者Murakami N. 等人从日本芍药根甲醇提取物中别离得到了一种具有生物活性的单萜苷6-O-D-glucopyranosyl-lactinolide和两个新的单萜lactinolide. paeo

11、nilactinone以及新的单萜苷1-O-D-gluc-opyranosyl-paeonisuffrone13。1.2 黄酮及其苷类化合物 1997年K.Kamiya等从芍药中别离得到2个黄酮类化合物，分别是：kaempferol-3-O-D-glucoside和Kaempferol-3,7-di-O-D-glucoside。161.3 鞣质类 1980年，Nishizawa等从芍药根中别离得到了没食子酰鞣质类化合物penta-,he*a-,hepta-,octa-,nona-,and decagalloylglucose,1983年，他们用13C-NMR的方法确定了其中的1,2,3,6-O

12、-四没食子酰基葡萄糖和1，2，3，4，6-O-五没食子酰基葡萄糖1，2，3，6-tetra-和1，2，3,4,6-penta-O-galloyl-D-glu-cose)的构造。1998年，*继振等17从杭白芍中别离得到-谷甾醇、没食子酸、苯甲酸等化合物，其中，没食子酸是首次从白芍中分得。 1.4 多糖 1993年，Tomoda等18从白芍中别离得到了2个具有免疫活性的多糖。1994年，他们又从白芍中别离得到了另一个酸性多糖PA19。-. z.二提取工艺 白芍总苷的提取过程，系指溶剂进入药材细胞组织溶解其有效成分后变成浸出液的全过程，它的实质就是溶质由药材固相转移到液相中的传质过程。很多学者们一

13、般采用的提取方法为回流提取法、煎煮法、超声提取法。-. z.2.1 回流提取法 高秀强、*敏彦等20以白芍总苷为考察指标，采用了乙醇溶剂的加热回流提取方法。对影响乙醇回流提取的三个因素：提取次数、提取时间、加醇量进展试验，确定了优化的工艺为加10倍量的70%乙醇溶液提取两次，每次提取两个小时。吴英华、任凤莲等21用正交试验的方法，考察乙醇体积量、固液比、提取时间对白芍总苷提取的影响。结果得到，在浸渍3次的条件下，得到最正确工艺条件：乙醇浓度为85%，固液比为1:5，提取时间为3小时。在此条件下，白芍总白芍总苷的提取率为1.366%。王爽、侯立强22研究白芍的提取精制工艺。通过正交试验来判定何种

14、工艺提取白芍的收膏率高，结果：以70% 乙醇提取3 次，时间为90min，90min，90min加醇量为8 倍，8 倍，8 倍收膏率最高。2.2 煎煮法 在实际生产中常用一定浓度的乙醇或水提取, 通过对芍药苷的溶出率进展比拟, 发现以7 0 %乙醉提取白芍测得芍药昔含量最高, 但考虑到在大生产过程中乙醇价格昂贵, 故采用水提法提取白芍中白芍总苷，具有简单、易行、提取完全等优点。李衫, 王亚楠等23采用正交试验设计, 采用水浸提, 以加水量、提取时间、提取次数, 作为主要考虑因素。确定了白芍总苷的最正确提取工艺为: 参加12 倍量的水煎煮三次, 每次3 h 。其中提取次数经过试验确定为主要影响因

15、素。2.3 超声提取法 超声提取法具有简单，省时，高效等优点。贵永光、李申平等24探讨了用超声提取白芍总苷的工艺。通过正交试验对溶剂的体积和超声提取时间、超声功率进展考察；优选超声提取工艺的条件，实验说明：溶剂对白芍总苷的提取影响较小，超声提取温度和时间对其影响较大。最终确定了条件为超声提取温度为60度，溶剂体积为25ml，超声时间为40min ,超声功率为320w。在此条件下，白芍总苷的提取率为1.945%.-. z.三.精制工艺-. z.3.1 大孔树脂纯化法 对白芍中白芍总苷的纯化精制一般采用色谱的方法，其中大孔树脂纯化方法最为常用。大孔吸附树脂作为一类多孔性有机高聚物, 对化学物质的别

16、离作用主要由其吸附性产生。目前吸附树脂逐步应用于中草药提取液的别离纯化25, 其吸附性能与其外表吸附、外表电性或形成氢键等有关, 常用比上柱量、比吸附量等指标来评价26。薛建国，狄留庆等27考察了上样工艺，以AB- 8 型大孔树脂来别离芍药总苷, 对采用动态上样方式, 以10 倍量20%乙醇洗脱, 滴速2.0ml/(mincm2) 别离效果最正确。吴德玲，*伟等28筛选了影响白芍总苷别离的主要因素。称取白芍饮片100 g, 打碎成粗颗粒,以70%乙醇加热回流提取两次, 第1次加8倍量回流提取60m in, 第2次加6倍量回流提取30 m in, 过滤, 合并滤液, 回收乙醇至无醇味, 加水定容

17、至一定体积, 即得上柱溶液。用大孔树脂吸附别离纯化白芍总苷, 选用了均匀设计法,使影响因素多水平实验的每个试验点有充分的代表性，对洗脱工艺参数进展优选。结果确定最正确上柱工艺为药液浓度1 g 生药材/m l ，2倍AB-8树脂量吸附, 柱径高比为1 ：12, 吸附时间30 m in后，以3倍的蒸馏水去糖，收集70%乙醇洗脱液。结论得到，大孔树脂可较好地富集白芍中的总苷, 其膏中总苷含量达60%以上。金继曙29利用DA201 树脂、硅胶及乙酸乙酯等多种载体及试剂进展别离纯化, 得到的提取物白芍总苷含量为70%。聂晓玉，尚城等30在前人用大孔树脂纯化白芍总苷的研究根底上，实验比拟了4 种大孔吸附树

18、脂对白芍提取液的别离效果, 即*、D101、D301、HPD8 型大孔吸附树脂。最后选用* 型大孔吸附树脂别离纯化。利用*型树脂一次吸附与解吸附过程, 提取物中的芍药苷即可在30%以上, 白芍总苷在70%以上, 整个工艺流程短, 污染少,本钱降低。3.2 联合技术纯化舒心莹，孟宪生等31研究乙醇梯度处理和吸附树脂联用对白芍中白芍总苷的纯化工艺, 确定最正确工艺条件和参数。方法: 采用正交试验法考察乙醇梯度处理对白芍总苷含量的影响, 从静态吸附和动态吸附两方面对9 种不同型号的大孔吸附树脂进展综合评价, 筛选出效果最正确的树脂型号, 考察并确定别离纯化条件。结果得到: 最正确醇沉条件为1 g生药

19、/mL的药液用95%乙醇沉至醇浓度为90%, 冷藏10 h;以H PD300为最优型号树脂用于别离纯化白芍中白芍总苷, 以5倍量50%乙醇洗脱药材树脂用量比2：1( 2 g药材：1 mL湿树脂)为最正确工艺。-. z.四检识 实验所提取的有效成分或有效部位，需经过检识鉴定才能进展下一步的研究。一般采用的检识方法包括理化检识和色谱检识。其中理化检识操作简单、初步判定；然后在进展色谱检识加以确定，具有准确、专属性高等特点。-. z.4.1 liebermann-burchard反响 取白芍总苷提取物12mg，加醋酐1ml与硫酸45滴，显红色至紫红色。 4.2 薄层色谱检识 取白芍总苷提取物2mg，

20、加甲醇1ml，振摇使溶解，作为供试品溶液；另取芍药苷对照品，加甲醇制成每1ml中含1mg的溶液，作为对照品溶液。照薄层色谱法(中国药典2000年版二部附录 B)试验，吸取上述两种溶液各5l，分别点于同一硅胶G薄层板上，以氯仿-甲醇(5:1)为展开剂，展开后，取出，晾干，喷以硫酸溶液(110)，于100加热约5分钟使显色。供试品色谱图中，在与对照品相应的位置上，应显一样颜色的斑点。4.3 指纹图谱检识 谢培山等32建立了薄层指纹图谱来考察白芍总苷的质量，以硅胶60预制板；展开剂采用氯仿-醋酸乙酯-甲醇-甲酸40:5:10:0.2;显色剂为5%香草醛硫酸溶液，80度加热至斑点清晰。用此种方法提高了

21、白芍总苷各成分的别离度，所得到的指纹图谱特征性强，极易观察、识别和比拟。-. z.五.含量测定的方法 白芍总苷是从白芍中提取别离的蒎烷单萜苷类成分, 其中包括芍药苷、羟基芍药苷、芍药花苷、芍药内酯苷、苯甲酰芍药苷等。文献多报道把含量最高的芍药苷这一单一成分作为白芍的质控标准, 而白芍总苷是由一类构造相近的单萜苷类化合物组成的混合物, 难以控制其内在质量。也有报道测定其中的芍药苷和芍药内酯苷来表征白芍总苷, 这需要多种对照品并且也难全面表达其内在质量，以此对于白芍总苷的含量测定具有很大意义。文献报道白芍总苷各成分都具有苯甲酸酯键构造, 将其水解可生成苯甲酸，通过苯甲酸的含量推算出白芍总苷的含量。

22、近年来对白芍中白芍总苷的含量测定方法越来越多，大多采用高效液相法和分光光度法。-. z.5.1 高效液相法测白芍中白芍总苷的含量 高效液相色谱法(HPLC法)具有别离度高,分析速度快,应用*围广,检测灵敏度高,流动相选择*围宽,流出组分易收集,色谱柱可反复使用等优点。 轶娟，浦锦宝等33建立白芍药材中白芍总苷的HPLC含量测定方法。以苯甲酸为对照品,采用碱水解- HPLC法,测定白芍中白芍总苷的含量。通过公式白芍总苷含量% =苯甲酸含量% 480. 27 /122. 12计算出白芍总苷的含量;色谱条件: YMC- Pack ODS - A (5m, 150mm 4. 6mm) HPLC色谱柱,

23、甲醇- 0. 05mol/L磷酸- 异丙醇- 冰乙酸(8515546)为流动相,检测波长230nm。结果得到，苯甲酸在进样量0. 1 2g(r=1.0000)*围内呈良好的线性关系,平均加样回收率为101. 12% , RSD是21.49%。该方法准确、简便、快速,重现性好。*敏彦，高秀强等34同样是采用碱水解高效液相色谱法，采用了乙腈-磷酸25:75为流动相，苯甲酸的进样线性*围为20.016-500.4ng，平均回收率为98.58%。RSD为0.95%，实验说明该法适用于为白芍总苷的含量测定。一般高效液相法白芍总苷都是以苯甲酸为对照品，但是*玉红，陈燕等35考虑到白芍总苷在水解的过程可能有

24、各种因素干扰，故考虑采用芍药苷为对照品与样品平行碱水解，并对不同的对照品进展了比拟，说明以苯甲酸和芍药苷为对照品对测定结果无明显影响，得到以芍药苷为对照品测得的含量略高，验证了该方法的可行性。对于测量中的供试品准备，几乎都采用碱水解法：文献报道36采用三因素三水平正交试验对水解条件进展了选择。结果说明用5%氢氧化钠的溶液，在100度下水解120min为最正确水解条件。5.2 其他方法测白芍中白芍总苷的含量 英华等37研究了白芍总皂苷的紫外吸收特性, 建立了以苯甲酸为对照品, 用紫外分光光度法测定白芍总皂苷含量的方法。方法的回归方程为: Y= 0.003 24+ 0.107 63 c, 相关系数

25、0.998 85, 加标回收率为95.7% 102.0%, RSD =2. 57% ( n= 9)。方法简便易行、快速、准确。对最大吸收波长和溶剂进展选择，结果得到，用85% 乙醇作为溶剂,测定波长为227 nm。瞿白露等38基于白芍总苷可被50 g .L- 1氢氧化钠溶液水解产生苯甲酸, 并在pH 2. 72 的乙酸-乙酸钠缓冲溶液中, 苯甲酸经激发光照射产生荧光, 提出了荧光光度法测定中药白芍中白芍总苷含量的方法。在激发波长280 nm, 发射波长310 nm 处, 反响体系的$F( 即F0 与F值之差) 与苯甲酸的质量浓度在1.0 10.0 mg.L- 1*围内呈线性关系。试验选择50g

26、.L- 1 氢氧化钠溶液25mL, 100度条件下水解120 min为最正确的水解条件。此方法可用于白芍总苷的质控与半定量测定, 与高效液相色谱法或高效毛细管电基团和母体构造的物质含量提供了方法。-. z.六.药理作用 近年来白芍及其化学成分的抗炎、免疫调节、抗病毒、抗氧化、抗惊厥、胃肠道疾病、护肝和心血管疾病等的药理研究已取得显著进展。以下就白芍的现代药理研究做一简要概述。-. z.6.1 TGP对心血管系统作用增加心肌血流量,降低血流阻力。心肌缺血最根本原因在于能量供应障碍,心肌缺血再灌注损伤作为一种应激源可引发心肌细胞内质网应激,导致葡萄糖调控蛋白。(GRP78)大量表达,对细胞起保护作

27、用38；抗血栓形成,抗动脉粥样硬化。TGP能抑制静脉血栓模型大鼠血小板聚集和血栓形成的作用39 40；抗心肌重构。白芍总苷和卡托普利能降低不完全结扎腹主动脉造成压力超负荷型心肌重构模型大鼠左心室指数、全心指数41。6.2TGP对神经系统作用抗脑缺血/再灌注损伤作用，TGP对脑缺血/再灌注伤大脑皮层、海马、纹状体等缺血性脑组织病理组织学改变具有保护作用,提高病变组织超氧化物歧化酶(SOD)活性,降低丙二醛(MDA)含量42；TGP同时具有抗抑郁作用 43 44。6.3TGP对内分泌代谢系统作用TGP具有治疗糖尿病肾病的作用 4546； TGP治疗胰岛素抵抗相关疾病(代谢综合征)的作用机制可能与其

28、提高胰岛素敏感性、降低血脂和抑制肝损伤以及增强抗氧化能力等效应有关 47。6.4TGP对消化系统作用TGP治疗肝损伤、肝纤维化TGP降低肝损伤小鼠ALT、AST活性和肝匀浆中MDA的含量,升高SOD活力,保护急性肝损伤,其机制与TGP抵抗自由基、提高抗氧化物酶的活性等有关49 50；TGP具有治疗结肠炎的作用51。6.5TGP对泌尿生殖系统作用TGP治疗狼疮性肾炎，对经雷公藤多苷治疗的狼疮性肾炎的肾脏病理改变有改善,有减毒增效的作用52； TGP具有治疗前列腺炎作用53。6.6TGP对皮肤及骨骼系统作用TGP具有治疗皮肤病的作用54；TGP治疗骨骼病变TGP可能通过直接促进成骨细胞活性,抑制破

29、骨细胞存活,从而调节骨吸收-骨重建动态平衡来防治RA骨质破坏55。-. z.七展望 白芍作为一种传统的中药具有极大地开发利用前景。但是白芍中白芍总苷的含量受到了产地、气候、品种、采收时间等诸多因素的影响，建议建立白芍总苷的指纹图谱加以控制白芍的质量。另外，白芍总苷药理作用研究的不断深入，应提高和创新白芍总苷的提取工艺，在提取率和提取质量的研究方面不断深入，以推进白芍中白芍总苷药剂的研究进展，为充分利用白芍提供更多的科学依据。参考文献：1.*晓燕，李铣.白芍的化学研究进展J.*药科大学校报，2002,191：70-742. Shibata S , Nakahara M. Paeonoflorin

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