医学微生物学课件：3消毒与灭菌

1、 消毒灭菌 与病原微生物实验室生物安全第3章消毒与灭菌 生长繁殖 微生物 变 异 死 亡 环境改变环境适宜 环境剧变一、常用术语杀灭物体上的病原微生物的作用和法。 消毒 杀灭物体上的所有微生物（包括病原微生物和非病原微生物、细菌的繁殖体和芽胞）的作用和方法。 灭菌抑制体内或体外细菌的生长繁殖。 抑菌指物体上不含活的微生物。无菌防止微生物生长进入机体或其他物品的操作技术。无菌操作防止或抑制微生物生长繁殖的方法。 防腐 举例并连线： 外科手术 无菌 内服抗生素 无菌操作 接种环火焰烧灼 消毒 火化 抑菌 局部皮肤75%酒精擦拭 灭菌 消毒、灭菌的方法一般可分为： 热力灭菌法 辐射杀菌法物理学方法

2、滤过除菌法 干燥和低温抑菌法等化学方法 原理： 破坏菌体蛋白质与核酸，使 其肽链断裂，蛋白质 变性凝固， 核酸解链崩解，导致细菌死亡。二、物理消毒灭菌法1. 热力灭菌法（1）干热灭菌法干烤法焚烧法烧灼法160170 2 h；适用于耐高温物品的灭菌废弃物品、尸体接种环、试管口、瓶口等 高压蒸汽灭菌法121.3 1520 min（2）湿热灭菌法煮沸法100 5 min；杀灭细菌的繁殖体压力：1.05kg/cm2 或 103.4kPaautoclaveLouis Pasteur (1822 - 1895).巴氏消毒法（pasteurization）61.1 62.8 30 min；71.7 15 3

3、0 sec；杀灭液体中的病原菌或特定的微生物。用于牛乳的消毒。表 常用热力灭菌法种类方法效果用途干热焚烧用焚烧炉燃烧灭菌废弃污物、尸体烧灼火焰烧灼灭菌接种环，试管口干烤红外线干烤箱，热空气160-170C 2h电磁波热效应灭菌灭菌玻璃器皿等耐高温的物品医疗器械湿热煮沸法100C，5-10分钟，沸水消毒饮水和食具高压蒸气灭菌法高压蒸气灭菌器103.4Kpa(15磅/吋，1.05Kg/cm2)121.3C15-20分钟灭菌耐高温耐湿物品巴氏消毒法种类效果 用途湿热巴斯德创用，61.1-62.830分钟，71.7 30秒钟（常用） 消毒（杀死病原菌，不破坏营养成分）牛奶，酒类方法流通蒸气法100 蒸

4、气1530分钟消毒（杀死细菌繁殖体，不杀死芽胞）不耐高温、高压物品间歇灭菌法反复多次流动蒸气灭菌不耐高温、高压物品湿热与干热灭菌效果的比较热型 温度（）时间 布层内的温度（）灭菌效果 （h） 20层 40层 100层湿热 90-105.3 3 101 101 101.5 完 全干热 130-140 4 86 72 70.5 不 完 全 热致死时间（min） 100煮沸 121湿热 160干热非芽胞菌、酵母 2 1 3肝炎病毒 5 2 4炭疽杆菌（芽胞） 0 3 6破伤风梭菌（芽胞） 60 5 12肉毒梭菌（芽胞） 500 12 30 微 生 物 表.热对不同种类微生物的致死时间 湿热效力大于干

5、热 （1）湿热中细菌菌体蛋白较易凝固变性 （2）湿热的穿透力比干热大、传导快 （3）湿热的蒸汽有潜热效应 原因 紫外线杀菌原理：使DNA上相邻的T碱基通过共价键结合成 二聚体，干扰DNA复制与转录，导致细菌 死亡。 特点：穿透力弱 适用范围：适于空气和物体表面消毒。2. 辐射杀菌法杀菌波长200300nm，最佳杀菌波长：265-266nm。 电离辐射适用：用于一次性医用塑料制品的消毒。种类：高速电子、 射线、 r射线等。机理：自由基及自由基离子 破坏微生物蛋白质、 核酸、酶 死亡 微波波长1-1000mm 的电磁波穿透特点：可穿透玻璃、陶瓷、塑料。 不可穿透金属制品。热效应杀菌！应用：食品、食

6、具、非金属器械、检验室用品3、滤过除菌法机理：用物理阻留的方法将液体或空气中的细菌、 真菌除去,以达到除菌目的。 器具：滤菌器（filter） 适用物品：不耐高温液体（血清、毒素、抗生素） 以及空气等的除菌。 过滤除菌过滤除菌过滤除菌过滤除菌过滤除菌生物洁净技术空气过滤 过滤材料 过滤率初级 塑料泡沫海绵 50%中级 无纺布 50%-90%高级 超细玻璃滤纸 99.95%-99.99% 生物洁净技术初中 过滤器 0.5-5m 尘埃微粒 + 层流空气高去除空气洁净 生物洁净工作箱冷冻真空干燥法（lyophilization）4.干燥与低温抑温法保存细菌菌种的最好的方法.干燥保存食品低温保存菌种

7、在低温状态下真空抽去水分冷冻真空干燥法：用途：保存菌种三、化学消毒灭菌法 1、化学消毒剂杀菌机制（1）使菌体蛋白质变性或凝固；（2）干扰细菌的酶系统和代谢；（3）损伤菌细胞膜。 类 别 含氯消毒剂 2、常用消毒剂类别、种类、用途 高 效 过氧化物 醛类环氧乙烷 中 效醇类酚类 低 效季铵盐类洗必泰高锰酸钾常 用 种 类次氯酸纳、漂白粉等 过氧化氢、过氧乙酸甲醛、戊二醛 环氧乙烷 碘酊、碘伏 乙醇、异丙醇石炭酸、来苏 新洁尔灭 洗必泰高锰酸钾 含碘消毒剂 用 途 -物体表面、水、皮肤、地面、排泄物 物品表面、皮肤、空气后者精密仪器、内窥镜 气体消毒剂皮肤黏膜、体温计 医疗护理器材、皮肤、体温计

8、现已不用皮肤、黏膜、物品、地面 皮肤、黏膜、物品、地面皮肤黏膜、食具、蔬菜、水果 3、影响消毒灭菌效果的因素（1）微生物的种类、物理状态、数量（清洁）；（2）消毒剂的性质、浓度与作用时间；（3）环境因素：温度、PH、有机物4、 选择适当的消毒剂低毒价廉低破坏易贮藏方便有效 生物技术安全 指现代生物技术的研究、开发、应用以及转基因生物可能对生物多样性、生态环境和人类健康产生潜在的危害。 指与生物有关的各种因素对社会、经济、人类健康及生态环境所产生的危害或潜在风险。狭义： 定 义 一、病原微生物实验室生物安全1、病原微生物的分类一类 能够引起人类（动物）非常严重疾病的微生物，以及我国未发现或宣布已

9、消灭的微生物。二类 能够引起人类（动物）严重疾病，比较容易直接或间接在人与人、动物与人、动物与动物间传播的微生物。高致病性病原微生物： 第一、二类三类 能够引起人类（动物）疾病，但一般情况下对人、动物或环境不构成严重危害，传播风险有限，实验室感染后很少引起严重疾病，能有效治疗和预防措施的微生物。四类 通常情况下不会引起人类（动物）疾病的微生物。2、生物安全防护实验室的分级一级 （P1） 人、动植物、环境 危害较低、不具有致病性 二级（P2） 同上 中等潜在危险危害 有级别 影响范围 危险性 预防治疗措施三级（P3） 同上 高度危险性（气溶胶途径） 有四级（P4） 同上 高度危险性 （气溶胶或不

10、明途径 或未知致病因子） 无 P : protectP3实验室：生物安全防护三级实验室P4实验室-“魔鬼实验室” 特殊空调系统-空气温度与湿度都是预先设定好空气过滤程度达到99.999-空气在整个环境中1H循环多次。定向负压系统-负40帕核心区典型的P4实验室 由更衣区（外更衣室、淋浴室和内更衣室 ） 过滤区 缓冲区 消毒区（化学淋浴室） 核心区（自动连锁装置） 最先进的P4实验室-法国梅里厄P4实验室 面积仅为600平方米的实验室造价达4000万法郎，其中的仪器设备价值1000万法郎，每年的运行维持和实验费用是190万欧元。二、实验室感染的控制以及监督和法律责任感染前感染后监督实验室感染的控制法律责任消毒与灭菌 -思考1、何为消毒