白细胞血小板配血试验

1、白细胞血小板配血试验白细胞血小板配血试验一、人类白细胞抗原一、人类白细胞抗原 人类白细胞抗原代表个体特异性人类白细胞抗原代表个体特异性 与移植排斥有关的抗原称为与移植排斥有关的抗原称为组织相容性抗原或组织相容性抗原或移植抗原移植抗原-MHS-MHS 编码编码MHSMHS的基因组称为的基因组称为主要组织相容性复合物主要组织相容性复合物(MHC)(MHC) 人类的人类的MHCMHC是首先在白细胞上发现的，称为是首先在白细胞上发现的，称为人类人类白细胞抗原白细胞抗原(human leukocyte antigen(human leukocyte antigen，HLA)HLA)HLAHLA的研究历史

2、的研究历史最早发现人类白细胞抗原者为最早发现人类白细胞抗原者为Dausset-1954Dausset-1954年年 HLAHLA不仅仅是白细胞特异性同种抗原。不仅仅是白细胞特异性同种抗原。 它是分布广泛的组织抗原。它是分布广泛的组织抗原。HLAHLA的分型命名的分型命名 血清学分型命名血清学分型命名 具有临床意义的具有临床意义的HLAHLA基因有基因有A A、B B、C C、DRDR、DQDQ、DPDP等等位点位点(Loci)(Loci)，每个位点又有若干等位基因，这些基，每个位点又有若干等位基因，这些基因的产物便是因的产物便是HLAHLA抗原。抗原。 临床意义比较大的临床意义比较大的HLA-

3、AHLA-A、B B、C C称为称为类抗原类抗原 HLA-DRHLA-DR、DQDQ、DPDP称为称为类抗原。类抗原。HLAHLA的遗传的遗传 单体型遗传单体型遗传 存在基因重组存在基因重组 多态性现象多态性现象 连锁不平衡连锁不平衡 HLAHLA抗体及抗体检测抗体及抗体检测 临床上临床上HLAHLA抗体多由抗体多由妊娠、妊娠、输血或器官移植等免疫产生输血或器官移植等免疫产生HLAHLA在医学中的应用在医学中的应用 一、一、HLAHLA与输血与输血 HLAHLA与非溶血性输血反应与非溶血性输血反应 HLAHLA与血小板输注与血小板输注 二、二、HLAHLA与器官移植与器官移植 ( (一一) )

4、肾移植肾移植 ( (二二) )骨髓移植骨髓移植 三、三、HLAHLA与亲子鉴定与亲子鉴定二、血小板血型二、血小板血型u一类是与其他细胞表面或组织共有的一类是与其他细胞表面或组织共有的抗原，称抗原，称血小板相关抗原血小板相关抗原u另一类为另一类为血小板特异性抗原血小板特异性抗原血小板血型血小板血型u相关抗原：相关抗原：主要与红细胞的主要与红细胞的ABOABO血型系统以及血型系统以及人类白细胞抗原人类白细胞抗原(HLA)(HLA)有关有关u特异性抗原：特异性抗原：由血小板特有的抗原决定簇组成由血小板特有的抗原决定簇组成，表现出血小板独特的遗传多态性，在其他细胞，表现出血小板独特的遗传多态性，在其他

5、细胞和组织上不能发现和组织上不能发现血小板血型血小板血型u血小板表面存在红细胞血小板表面存在红细胞ABOABO系统系统的的A A抗原和抗原和B B抗原抗原, ,可能是从可能是从血浆中吸附血浆中吸附上的。上的。u是否还存在其他红细胞血型抗原尚在探讨是否还存在其他红细胞血型抗原尚在探讨之中之中u在我国，通常进行在我国，通常进行ABOABO同型血小板输血同型血小板输血配合性血小板输注配合性血小板输注 ABOABO同型同型 血小板抗体的筛选血小板抗体的筛选 交叉配合试验：确保供受体的血小板交叉配合试验：确保供受体的血小板型和型和HLAHLA型的配合型的配合血小板血型血小板血型 血小板特异性抗原血小板特

6、异性抗原n 具有独特的型特异性，并构成血小板膜结构具有独特的型特异性，并构成血小板膜结构中的一部分中的一部分n血小板特异性抗原有血小板特异性抗原有6 6个血型系统个血型系统2424个抗原，个抗原，正式命名为正式命名为HPA-1HPA-1、HPA-2HPA-2、HPA-3HPA-3、HPA-4HPA-4、HPA-5HPA-5、HPA-15HPA-15血小板血型的临床意义血小板血型的临床意义一一. .血小板输注无效性血小板输注无效性(PTR)(PTR)二二. .输血后紫癜输血后紫癜(PTP)(PTP)三三. .新生儿同种免疫性血小板减少性紫癜新生儿同种免疫性血小板减少性紫癜(NAITP)(NAIT

7、P)四. .血小板的自身免疫作用血小板的自身免疫作用-特发性血小板减少性特发性血小板减少性紫癜紫癜( (简称简称ITP)ITP)血小板同种抗体与输血血小板同种抗体与输血 1.ABO1.ABO血型的选择血型的选择 一般需要做主侧或次侧的交叉配血，最好输一般需要做主侧或次侧的交叉配血，最好输注注ABOABO血型配合的血小板血型配合的血小板 2 2RhRh血型的选择血型的选择 D D阴性的患者，最好要避免用阴性的患者，最好要避免用D D阳性献血者的浓阳性献血者的浓缩血小板。对育龄妇女可以注射缩血小板。对育龄妇女可以注射RhRh免疫球蛋白免疫球蛋白 三、输血前免疫血液学检查三、输血前免疫血液学检查 目

8、的目的: :供者与患者的血液供者与患者的血液 输血前免疫血液学检查输血前免疫血液学检查一、标本采集一、标本采集二、红细胞悬液的配制二、红细胞悬液的配制三、标本的保存三、标本的保存一、标本采集一、标本采集1 1红细胞标本红细胞标本-ACD-ACD或或CPDCPD、(Na(Na2 2-EDTA)-EDTA)抗抗凝静脉血凝静脉血 少数患者有一种自身抗体少数患者有一种自身抗体-不宜用抗凝不宜用抗凝血液作为红细胞抗原标本血液作为红细胞抗原标本 2 2血清标本血清标本 一般实验避免使用血浆一般实验避免使用血浆 配血试验用血清配血试验用血清不超过不超过7272小时小时1 1、红细胞悬液常用浓度有、红细胞悬液

9、常用浓度有2 2、5 5和和10102 2、2 2的悬液一般用于滴定抗体效价，的悬液一般用于滴定抗体效价，5 5的悬的悬液常用于血型鉴定和交叉配血试验，液常用于血型鉴定和交叉配血试验，1010的的悬液则用于测定抗体的亲合力。悬液则用于测定抗体的亲合力。 三、标本的保存三、标本的保存1 1血清标本血清标本 不稀释的血清标本如加有防腐不稀释的血清标本如加有防腐剂可在剂可在44保存数月保存数月, ,在一在一2020以下可保存数以下可保存数年年如用生理盐水稀释的血清只限当天使用如用生理盐水稀释的血清只限当天使用2 2红细胞标本红细胞标本 一般试验用的凝血标本要在一般试验用的凝血标本要在5 5天之内使用

10、，以不溶血为准。如用保存液可天之内使用，以不溶血为准。如用保存液可保存保存3 3周周用盐水配制的红细胞悬液只能在当天使用用盐水配制的红细胞悬液只能在当天使用 供受双方供受双方ABOABO、RhRh血型鉴定血型鉴定ABOABO血型正反定型血型正反定型RhRh血型鉴定血型鉴定试管法试管法 抗A、抗B以外的所有抗体统称为不规则抗体。 常见于多次输血的人群患者血清患者血清+ +试剂筛选红细胞试剂筛选红细胞盐水介质盐水介质聚凝胺介质聚凝胺介质抗人球蛋白介质抗人球蛋白介质受者血清受者血清+ +供者红细胞供者红细胞受者红细胞受者红细胞+ +供者血清供者血清 方法方法主侧主侧次侧次侧 盐水介质盐水介质 聚凝胺

11、介质聚凝胺介质 抗人球蛋白介质抗人球蛋白介质（1）低离子聚凝胺交叉配血技术）低离子聚凝胺交叉配血技术n原理：聚凝胺（Polybrene），一种高价阳离子季胺盐多聚物，溶解后能产生很多正电荷，可以中和红细胞表面的负电荷，使红细胞之间距离减少，能引起正常红细胞可逆性的非特异性凝集。如果使抗体致敏的红细胞被聚凝胺凝集，则凝集不可逆。1 红细胞间有一定间距2 加入聚凝胺后，可以缩短红细胞之间的距离，使其非特异性凝集3 加入枸橼酸钠，可以中和聚凝胺4 红细胞的非特异性凝集消失聚凝胺枸橼酸钠1 红细胞上已有不完全抗体致敏2 加入聚凝胺后，缩短红细胞之间的距离，让不完全抗体可以同时与两个红细胞结合使其特异性

12、凝集3 加入枸橼酸钠中和聚凝胺4 由于不完全抗体的结合，红细胞的特异性凝集不消失聚凝胺枸橼酸钠枸橼酸钠不完全抗体不完全抗体试验分步原理血清红细胞悬液加入LIM混合液Polybrene受体血型抗原I g G 抗 体迅速致敏试验分步原理Polybrene分子连接到红细胞上加入Polybrene试验分步原理离心Polybrene拉近红细胞间的距离并造成凝集1个IgG分子同时连接两个红细胞试验分步原理加入重悬液减弱了Polybrene的作用加重悬液试验分步原理已被血型抗体致敏的红细胞不会散开阳性结果试验分步原理未被血型抗体致敏的红细胞很快散开阴性结果注意事项注意事项n按比例加样n致敏时间n观察非特异性

13、凝集n观察结果n关于冷凝集聚凝胺方法的特点聚凝胺方法的特点n灵敏：灵敏：灵敏度比抗球蛋白方法高1-20倍。n速度快：速度快：实验时间5分钟左右。n准确：准确：准确度高于酶试验。n不适合于不适合于Kell系统抗体的检测，但黄种人群中Kell系统抗体极罕见。n操作要求较高操作要求较高（2）微柱凝胶技术微柱凝胶技术 凝胶技术的原理凝胶技术的原理 反应室外管壁反 应室 底孔内套管壁凝胶或玻璃珠亲和凝胶试剂或盐水特殊粘液凝胶技术的原理：凝胶技术的原理：A、反应室：反应室：下端底孔很小，液体在孵育过下端底孔很小，液体在孵育过程中不会流入下方微柱中。程中不会流入下方微柱中。B、试剂或盐水层：试剂或盐水层：红

14、细胞在离心力作用下红细胞在离心力作用下穿越该层，红细胞与反应室中的血清分穿越该层，红细胞与反应室中的血清分离并与该层液体中的试剂反应。离并与该层液体中的试剂反应。C、粘液粘液：亲和柱中有一层粘液，作用与亲和柱中有一层粘液，作用与“试剂或盐水层试剂或盐水层”相同。相同。1 1）敏感：）敏感：在凝胶试验中常能发现其它试验不易在凝胶试验中常能发现其它试验不易发现的问题。发现的问题。2 2）结果可保存）结果可保存 凝胶试验的结果可在冰箱中保凝胶试验的结果可在冰箱中保存数日，并且较容易被拍成照片。存数日，并且较容易被拍成照片。3 3）操作技术要求较低：）操作技术要求较低：凝胶试验的操作主要是凝胶试验的操

15、作主要是简单的加样和判读，孵育、离心过程都有专门简单的加样和判读，孵育、离心过程都有专门的设备。其中能被人为改变的因素较少。的设备。其中能被人为改变的因素较少。4)4)无需洗涤的抗球蛋白试验：无需洗涤的抗球蛋白试验： 优点：优点：缺点：缺点：n凝胶试验方法成本较高，需要特殊设备。凝胶试验方法成本较高，需要特殊设备。n高度敏感有时也会造成不便：有报导应用高度敏感有时也会造成不便：有报导应用凝胶试验后，凝胶试验后，1/3001/300的库血直抗阳性。的库血直抗阳性。2不完全抗体可以结合在红细胞不完全抗体可以结合在红细胞表面表面,但是不能和两个红细胞但是不能和两个红细胞同时结合（致敏）。同时结合（致

16、敏）。3加入抗人球蛋白加入抗人球蛋白1红细胞彼此之间有一定的间距红细胞彼此之间有一定的间距4抗人球蛋白可以同时和两抗人球蛋白可以同时和两个不完全抗体的个不完全抗体的FC段结合，段结合，从而把红细胞连接在一起。从而把红细胞连接在一起。1.试剂红细胞试剂红细胞(表面标有抗血小板抗体表面标有抗血小板抗体) 2.加入供者血小板加入供者血小板3.试剂红细胞和血小板特异性结合试剂红细胞和血小板特异性结合4.加入受者的血清加入受者的血清,如有抗血小如有抗血小板抗体板抗体,则和血小板发生特异性则和血小板发生特异性结合结合5.凝胶柱中的抗人球蛋白捕获抗凝胶柱中的抗人球蛋白捕获抗血小板抗体血小板抗体,导致试剂红细

17、胞凝导致试剂红细胞凝集。集。（4）血小板配血实验原理示意图（阳性）血小板配血实验原理示意图（阳性）1.试剂红细胞试剂红细胞(表面标有抗血小板抗体表面标有抗血小板抗体) 2.加入供者血小板加入供者血小板3.试剂红细胞和血小板特异性结合试剂红细胞和血小板特异性结合4.加入受者的血清加入受者的血清,如血清中无如血清中无抗血小板抗体抗血小板抗体,则凝胶柱中的抗则凝胶柱中的抗人球蛋白不发生特异性结合，人球蛋白不发生特异性结合，试剂红细胞仍呈单个分布。试剂红细胞仍呈单个分布。血小板配血实验原理示意图（阴性反应）血小板配血实验原理示意图（阴性反应）HLAHLA的研究历史的研究历史最早发现人类白细胞抗原者为最

18、早发现人类白细胞抗原者为Dausset-1954Dausset-1954年年 HLAHLA不仅仅是白细胞特异性同种抗原。不仅仅是白细胞特异性同种抗原。 它是分布广泛的组织抗原。它是分布广泛的组织抗原。配合性血小板输注配合性血小板输注 ABOABO同型同型 血小板抗体的筛选血小板抗体的筛选 交叉配合试验：确保供受体的血小板交叉配合试验：确保供受体的血小板型和型和HLAHLA型的配合型的配合血小板同种抗体与输血血小板同种抗体与输血 1.ABO1.ABO血型的选择血型的选择 一般需要做主侧或次侧的交叉配血，最好输一般需要做主侧或次侧的交叉配血，最好输注注ABOABO血型配合的血小板血型配合的血小板 2 2RhRh血型的选择血型的选择 D D阴性的