第十四章维生素类药物的分析

1、维生素：维生素： 是维持人体正常代谢机能所必需的是维持人体正常代谢机能所必需的微量营养物质。微量营养物质。 人体不能合成维生素。人体不能合成维生素。发现简史p公元前公元前3500年年-古埃及人发现能防治夜盲症的物质，古埃及人发现能防治夜盲症的物质，也就是后来也就是后来 的维的维A。 p1600年年-医生鼓励以多吃动物肝脏来治夜盲症。医生鼓励以多吃动物肝脏来治夜盲症。p1747年年-苏格兰医生林德发现柠檬能治坏血病，也就苏格兰医生林德发现柠檬能治坏血病，也就是后来的维是后来的维C。p1831年年-胡萝卜素被发现。胡萝卜素被发现。p1905年年-甲状腺肿大被碘治愈。甲状腺肿大被碘治愈。p1911年

2、年-波兰化学家丰克为维生素命名。波兰化学家丰克为维生素命名。p1915年年-科学家认为糙皮病是由于缺乏某种维生素而科学家认为糙皮病是由于缺乏某种维生素而造成的造成的 p1916年年-维生素维生素B被分离出来。被分离出来。 p1917年年-英国医生发现鱼肝油可治愈佝偻病，随后断英国医生发现鱼肝油可治愈佝偻病，随后断定这种病是定这种病是 缺乏维缺乏维D引起的。引起的。p1920年年-发现人体可将胡萝卜转化为维生素发现人体可将胡萝卜转化为维生素A。 p1922年年-维维E被发现。被发现。 p1928年年-科学家发现维科学家发现维B至少有两种类型。至少有两种类型。 p1933年年-维维E首次用于治疗。

3、首次用于治疗。 p1948年年-大剂量维大剂量维C用于治疗炎症。用于治疗炎症。 p1949年年-维维B3与维与维C用于治疗精神分裂症。用于治疗精神分裂症。 p1954年年-自由基与人体老化的关系被揭开。自由基与人体老化的关系被揭开。 p1957年年-Q10多酶被发现。多酶被发现。 p1969年年-体内超级抗氧化酶被发现。体内超级抗氧化酶被发现。 p1970年年-维维C被用于治疗感冒。被用于治疗感冒。 p1993年年-哈佛大学发表维生素哈佛大学发表维生素E与心脏病关系的与心脏病关系的研究结果研究结果必需维生素必需维生素 13种种 p维生素维生素A，维生素，维生素B，维生素，维生素C，维生素，维生

4、素D，维生素，维生素E，维生素，维生素K，维生素，维生素H（生（生物素），维生素物素），维生素P，维生素，维生素PP，维生素，维生素M，维生素，维生素T，维生素，维生素U，水溶性维生素。，水溶性维生素。必需维生素？必需维生素？p外源性：人体自身不可合成，需要通过外源性：人体自身不可合成，需要通过食物补充；食物补充； p微量性：人体所需量很少，但是可以发微量性：人体所需量很少，但是可以发挥巨大作用；挥巨大作用； p调节性：维生素必需能够调节人体新陈调节性：维生素必需能够调节人体新陈代谢或能量转变；代谢或能量转变； p特异性：缺乏了某种维生素后，人将呈特异性：缺乏了某种维生素后，人将呈现特有的病态

5、。现特有的病态。 VitA、D2、D3、 E、K1 等等 脂溶性脂溶性水溶性水溶性 VitB族族(B1、B2、B6、B12) VitC、叶酸、烟酸、烟酰胺、叶酸、烟酸、烟酰胺分类：分类：VitMVitPP常见维生素的生理活性p维生素维生素A ：有：有VA1-3，其中，其中VA1活性最高，活性最高，又称为视黄醇；维生素又称为视黄醇；维生素A是眼睛中是眼睛中视紫质视紫质的原料，也是皮肤组织必需的材料，人的原料，也是皮肤组织必需的材料，人缺少它会得干眼病、夜盲症等。缺少它会得干眼病、夜盲症等。p对人体的生长、视觉和生殖功能都很重对人体的生长、视觉和生殖功能都很重要要 。 p维生素维生素D：又称钙化醇

6、，：又称钙化醇， 与钙、磷代谢及植物与钙、磷代谢及植物神经系统、内分泌及血管系统有密切关系，具神经系统、内分泌及血管系统有密切关系，具有皮质类固醇激素样作用。可用于治疗异位性有皮质类固醇激素样作用。可用于治疗异位性皮炎皮炎、红斑狼疮红斑狼疮、斑秃、聚合性痤疮、泛发性、斑秃、聚合性痤疮、泛发性脓疱性银屑病等脓疱性银屑病等 ；与晒太阳有关。；与晒太阳有关。p维生素维生素E 可用于治疗冻疮、多形红斑、结节性可用于治疗冻疮、多形红斑、结节性红斑、单纯性红斑、单纯性紫癜紫癜、色素性紫癜性、色素性紫癜性皮肤病皮肤病、肢、肢端紫绀症、痛经以及治疗抑郁症。端紫绀症、痛经以及治疗抑郁症。p维生素维生素K 促进肝

7、脏合成凝血酶原及血浆因子，促进肝脏合成凝血酶原及血浆因子，与皮质类固醇激素有协同作用。可用于治疗紫与皮质类固醇激素有协同作用。可用于治疗紫癜、慢性癜、慢性荨麻疹荨麻疹、淋巴瘤伴皮肤瘙痒病等。、淋巴瘤伴皮肤瘙痒病等。p维生素维生素B1 可用于治疗可用于治疗湿疹湿疹、皮炎、脓皮病、皮炎、脓皮病、念珠菌病、光感性皮肤病、带状念珠菌病、光感性皮肤病、带状疱疹疱疹后遗神经后遗神经痛、多发性神经炎等。痛、多发性神经炎等。p维生素维生素B2 可用于治疗脂溢性皮炎、脂溢可用于治疗脂溢性皮炎、脂溢性性脱发脱发、寻常痤疮、酒渣鼻、寻常须疮、寻常痤疮、酒渣鼻、寻常须疮、口周湿疹、日光性皮炎等。口周湿疹、日光性皮炎等

8、。p维生素维生素B6 可用于治疗脂溢性皮炎、脂溢可用于治疗脂溢性皮炎、脂溢性脱发、寻常痤疮、酒渣鼻、湿疹、渗性脱发、寻常痤疮、酒渣鼻、湿疹、渗出性银屑病、神经性皮炎、妊娠痒疹、出性银屑病、神经性皮炎、妊娠痒疹、斑秃、唇炎等。斑秃、唇炎等。p维生素维生素B12 是体内多种代谢过程中必需的辅是体内多种代谢过程中必需的辅酶，参与核蛋白的合成，甲基的转换以及脂肪酶，参与核蛋白的合成，甲基的转换以及脂肪和糖的代谢，可用于治疗慢性荨麻疹、接触性和糖的代谢，可用于治疗慢性荨麻疹、接触性皮炎、早期银屑病、皮炎、早期银屑病、扁平疣扁平疣、水痘、带状疱疹、水痘、带状疱疹、扁平苔癣、脂溢性皮炎、光感性皮肤病等。扁平

9、苔癣、脂溢性皮炎、光感性皮肤病等。p维生素维生素C 主要用于抗炎和抗衰老，可用于治疗主要用于抗炎和抗衰老，可用于治疗紫癜性皮肤病、湿疹、荨麻疹、紫癜性皮肤病、湿疹、荨麻疹、黄褐斑黄褐斑、黑变、黑变病、特发性斑状色素沉着、早期银屑病、砷剂病、特发性斑状色素沉着、早期银屑病、砷剂皮炎等。皮炎等。 CH3CH3CH2ORCH3CH3CH3-H 维生素维生素A醇醇-COCH3 维生素维生素A醋酸酯醋酸酯-COC15H31 维生素维生素A棕榈酸酯棕榈酸酯R :第一节第一节 维生素维生素A的分析的分析全反式全反式（一）为一个具有共轭多烯侧链的环己烯（一）为一个具有共轭多烯侧链的环己烯1. 具有具有UV吸收

10、吸收2.2.存在多种立体异构化合物存在多种立体异构化合物结构与性质结构与性质一、一、维生素A 325.5 100% 全反式新维生素Aa 328 75% 2顺新维生素Ab 320.5 24% 4顺新维生素Ac 310.5 15% 2，4顺异维生素Aa 323 21% 6顺异维生素Ab 324 24% 2，6顺max 相对生物效价相对生物效价顺反异构顺反异构C H2O HVitA2C H2VitA33 3.易发生脱氢、脱水、聚合反应易发生脱氢、脱水、聚合反应CH2OHCH2OHCH3鲸醇鲸醇酸酸醛醛环环氧氧化化物物、氧氧化化剂剂紫紫外外线线、VitAVitAVitAOO2 v或有金属离子存在时氧化

11、或有金属离子存在时氧化v临床使用时成酯后，溶于植物油中；阴临床使用时成酯后，溶于植物油中；阴凉干燥处保存，还需加入凉干燥处保存，还需加入N2或一定抗氧或一定抗氧剂提高稳定性。剂提高稳定性。共轭多烯侧链共轭多烯侧链 易被氧化易被氧化（二）（二）环氧化物环氧化物OC H2OHVitA醛醛HOCVitA酸酸C OOH（三）（三）与三氯化锑发生呈色反应与三氯化锑发生呈色反应紫紫红红蓝蓝色色3SbClVitACHCl3溶解性溶解性（四）（四）不溶于水，微溶于乙醇；不溶于水，微溶于乙醇；易溶于有机溶剂和植物油等易溶于有机溶剂和植物油等(五)紫外吸收特征p共轭多烯紫外吸收；共轭多烯紫外吸收；325328nm

12、范围内有最大吸收，可用于鉴范围内有最大吸收，可用于鉴别和定量测定；别和定量测定；三氯化锑反应三氯化锑反应（一）（一）条件：条件： 无水、无醇无水、无醇紫紫红红蓝蓝色色 3SbClVitACHCl3鉴别试验鉴别试验二、二、SbCl3水水SbOCl乙醇可使碳正离子的正电荷消失乙醇可使碳正离子的正电荷消失-RCOOSbCl5+CH2蓝色蓝色紫红紫红+CH2-RCOOSbCl5VitAVitAHCl去去水水无无水水乙乙醇醇max为为326nm一个吸收峰一个吸收峰UV法法（二）（二）max为为350390nm三个吸收峰三个吸收峰去水去水VitA（VitA3）CH2CH3CH3CH2ORCH3CH3CH3

13、VitAUSP 显色剂显色剂 磷钼酸磷钼酸 规定斑点颜色和规定斑点颜色和Rf值值BP 对照品法对照品法 显色剂显色剂 三氯化锑三氯化锑TLC法法（三）（三）立体异构体立体异构体氧化产物及光照产物氧化产物及光照产物合成中间体合成中间体去氢维生素去氢维生素A（ VitA2）去水维生素去水维生素A（ VitA3）UV法（三点校正法）法（三点校正法）（一）（一）含量测定含量测定三、三、三点校正法三点校正法1. 前提条件：前提条件：（1）杂质的吸收在）杂质的吸收在310340nm波长范围内呈波长范围内呈一条直线，且随波长的增大吸收度减小；一条直线，且随波长的增大吸收度减小；（2）物质对光的吸收具有加和性

14、。）物质对光的吸收具有加和性。测定对象：测定对象：VitA醋酸酯醋酸酯328340316328第一法第一法 等波长差法等波长差法第二法第二法 等吸收比法等吸收比法(皂化法皂化法)32176AAA测定对象：测定对象：VitA醇醇2. 波长的选择：波长的选择：（1） 1 VitA的的 max（如（如VitA酯酯 328nm）（2） 2 3 分别在分别在 1的两侧各选一点的两侧各选一点第二步：求第二步：求)(%cm1样样 l(%)CA%)(cm1 样样3、测定法、测定法（1）基本步骤）基本步骤: 第一步：第一步：A选择，选择，A328测定或测定或A328校正校正第三步第三步 求效价求效价换换算算因因

15、数数）效效价价（样样样样 %)(cm1)(Eg/IU第四步：求标示量第四步：求标示量标标示示量量平平均均丸丸重重100g/IU 标标示示量量丸丸标标示示量量100/IU 标标示示量量平平均均丸丸重重换换算算因因数数100CA A*D*换算因数换算因数*WW*100*标示量标示量100换算因数：换算因数：%)(cm1Eg/IU纯纯）效效价价（换换算算因因数数单位单位E1cm数值所相当的效价数数值所相当的效价数（由纯品计算而得）（由纯品计算而得）醋醋酸酸酯酯维维生生素素 Ag344.0IU1 2907000g344. 0g101g/IU6 ）效效价价g/IU%)(cm1

16、纯纯）效效价价（换换算算因因数数1900 醇醇维维生生素素 Ag300.0IU1 3330000g300. 0g101g/IU6 ）效效价价g/IU%)(cm1 纯纯）效效价价（换换算算因因数数1830 方法：方法：（2） 第一法第一法维生素维生素A醋酸酯醋酸酯iAnm360340328316300ml/IU159S处处测测、分分别别于于溶溶液液环环己己烷烷 判断判断 是否在是否在326329nm之间之间max 改用第二法改用第二法是是否否 求算求算 并与规定值比较并与规定值比较328/ AAi 299.0AA811.0AA0000.1AA907.0AA555.0AA

17、328360328340328328328316328300 规定值规定值 差值差值328iA/A 判断差值是否超过判断差值是否超过02. 0 03%15%3%第二法第二法 校校正正328A328A第二第二法法 3403163283282523AAA.A 校校正正 计算计算 A328（校正）（校正） 用用A328计算计算有超过有超过0.02无超过无超过%100AAAf328328)(328 校校正正f VitAD胶丸中VitA的含量测定 精密称取本品(规格10000VitAIU/丸)装量差异项下（平均装量0.08262g/丸）的内容物 0.2399g 至250ml量瓶中，用环己烷稀释至刻度，摇

18、匀；精密量取2.0ml，置另一20 ml量瓶中，用环己烷稀释至刻度，摇匀。以环己烷为空白，测定最大吸收波长为328nm，并在下列波长处测得吸收度为A300 ：0.354A316 ：0.561A328 ：0.628A340 ：0.523A360 ：0.216A300 /A328 ：0.555A316/A328 ：0.907A328/A328 ：1.000A340/A328 ：0.811A360/A328 ：0.299 求本品中维生素求本品中维生素A的含量？的含量？A300 /A328 ：0.564A316/A328 ：0.893A328/A328 ：1.000A340/A328 ：0.833A3

19、60/A328 ：0.344 0.555 0.907 1.000 0.811 0.299 + 0.010.01 0 + 0.02 + 0.04 605.0523.0561.0628.0252.3252.3340316328328AAAA校正=%)3%15(%7 .3%100328328)(328AAAf校正 %0 .99%1001000008262. 010020125022399. 01900605. 0%100)ml100/g(C1900A%328 标标示示量量平平均均丸丸重重标标示示量量校校正正适用于维生素适用于维生素A醇醇（等吸收比法） 第一法无法消除杂质干扰时用此法第一法无法消除杂质

20、干扰时用此法 皂化法、皂化法、6/7A法法 （3）第二法）第二法i/KOHAnm334325310300ml/IU159VitAVitAS处测处测、于于稀释至稀释至溶解溶解异丙醇异丙醇除去植物油的干扰除去植物油的干扰甘油和脂肪酸盐甘油和脂肪酸盐植物油植物油醇醇醋酸酯醋酸酯皂化液皂化液挥干乙醚挥干乙醚乙醚提取乙醚提取乙醇乙醇 水溶性水溶性脂溶性脂溶性 判断判断 max是否在是否在323327nm之间之间取未皂化样品采用取未皂化样品采用色谱法纯化后再测色谱法纯化后再测定定 计算计算325300AA是是否否 判断判断 A300 /A325 是否大于是否大于0.73是是否否取未皂化样品采用色取未皂化样

21、品采用色谱法纯化后再测定谱法纯化后再测定 计算计算A325(校正校正) 334310325325260455528156A.A.A.A 校校正正%100AAAf325325)(325 校校正正03%3% 校正校正325A325A 校正校正325Af三氯化锑比色法三氯化锑比色法（二）蓝蓝色色 3SbClVitA优点：优点： 简便简便 快速快速max 618nm620nm标准曲线法标准曲线法 SbOClSbClOH32缺点：缺点：呈色不稳定呈色不稳定 （5 10s内）内）水分干扰水分干扰与标准曲线温差与标准曲线温差1专属性差专属性差三氯化锑有腐蚀性三氯化锑有腐蚀性（三）高效液相色谱法三）高效液相色

22、谱法流动相：正己烷异丙醇（流动相：正己烷异丙醇（9973）检测波长：检测波长：325nm第二节第二节 维生素维生素B1的分析的分析一、结构与性质一、结构与性质1.溶解性溶解性(1)易溶于水易溶于水(2)水溶液呈酸性水溶液呈酸性3.UV共轭双键共轭双键max = 246nm二、性质二、性质 蓝色荧光蓝色荧光硫色素硫色素正丁醇正丁醇 OOH2.硫色素荧光反应硫色素荧光反应4.与生物碱沉淀试剂反应与生物碱沉淀试剂反应杂原子的反应，能与某些生物碱沉淀试剂杂原子的反应，能与某些生物碱沉淀试剂反应，生成组成恒定的沉淀，可用于鉴别反应，生成组成恒定的沉淀，可用于鉴别和含量测定。和含量测定。5.氯化物的特性氯

23、化物的特性6.硫元素反应：与硫元素反应：与NaOH共热，形成硫化共热，形成硫化钠，硝酸铅生成黑色沉淀；钠，硝酸铅生成黑色沉淀；7.红外光谱特征红外光谱特征荧荧光光消消失失蓝蓝色色荧荧光光硫硫色色素素正正丁丁醇醇）（环环合合 HCNFeKOHNaOHVitB6321O OH专属性反应专属性反应二、鉴别试验二、鉴别试验（一）（一）硫色素反应硫色素反应CH2NNH3CNH2CH3NNaSC2H4OHONNH3CNH2HClNSCH3C2H4OHCH2NaOHNNH3CNNNaSCH3C2H4OH-H2O硫色素硫色素SCH3C2H4OHNNH3CNNH环合NNH3CNNSCH3C2H4OH H22HV

24、itB1 4242HgIHBHgIK 淡淡黄黄H+ 2KIIIHIB2 红红色色H+白白色色硅硅钨钨酸酸 H+ OH4WO12OHSiOB23222 白色扇形白色扇形苦酮酸苦酮酸 H+（二）（二）沉淀反应沉淀反应 PbSNaSVitBAcPbNaOH OHNHAgNOAgCl白白3HNO3HNO蓝蓝淀淀粉粉试试纸纸 KIMnOClS元素反应元素反应Cl-反应反应（三）（三）其他反应其他反应H+三、含量测定三、含量测定 HClOClOBHClOHClClBAcHg）（喹那啶红亚甲蓝喹那啶红亚甲蓝(紫红紫红天蓝天蓝)（一）（一）非水溶液滴定法非水溶液滴定法UV法法（二）（二）片剂、注射剂片剂、注射

25、剂= 421%cmE11（每片）相当于标示量的（每片）相当于标示量的%=A = ECLChP11 标示量标示量% WEA %cm 100D 100平均片重平均片重（每（每ml）相当于标示量的）相当于标示量的 标示量标示量% VEA %cm 100D 100注意p维生素维生素1的紫外吸收峰随溶液的的紫外吸收峰随溶液的pH变变化而不同：化而不同：pH2.0时，最大吸收波长在时，最大吸收波长在246nm处；处；pH7.0时，时，2个吸收峰：个吸收峰：232233和和266；p可采用差示分光光度法测定其含量；可采用差示分光光度法测定其含量；荧荧光光硫硫色色素素异异丁丁醇醇铁铁氰氰化化钾钾 VitBNa

26、OH（三）（三）硫色素荧光法：维生素硫色素荧光法：维生素B1的专属性反应的专属性反应1、+ NaOH + 铁氰化钾铁氰化钾 + 异丁醇异丁醇+ NaOH + 异丁醇异丁醇+ NaOH + 铁氰化钾铁氰化钾 + 异丁醇异丁醇+ NaOH + 异丁醇异丁醇SdAb对照液对照液供试液供试液dSbAC样样 C标标3、（1）灵敏度高，线性范围宽）灵敏度高，线性范围宽（2）专属性强，氧化产物及代谢产物不干扰，可用）专属性强，氧化产物及代谢产物不干扰，可用于制剂分析，体液分析等。于制剂分析，体液分析等。硫色素荧光法特点p为维生素为维生素B1的专属性反应，可用于维生的专属性反应，可用于维生素素B1及制剂的含量

27、测定；及制剂的含量测定；p不受氧化破坏产物的影响，结果较准确；不受氧化破坏产物的影响，结果较准确；但操作比较复杂，受干扰因素多；但操作比较复杂，受干扰因素多；p氧化剂除了铁氰化钾外，还可以使用氯氧化剂除了铁氰化钾外，还可以使用氯化汞或者溴化氰；化汞或者溴化氰；第三节第三节 维生素维生素C的分析的分析654321OOHHOO COHHCH2OHL抗坏血酸抗坏血酸结构与性质结构与性质一、一、（一）结构（一）结构二烯醇二烯醇内酯内酯两个手性碳（两个手性碳（C4,C5）OO HH OO CO HHC H2O H123456C3OH的的pKa = 4.17C2OH的的pKa = 11.572.酸性酸性一

28、元酸一元酸（二）性质（二）性质1.溶解性溶解性1、易溶于水、易溶于水2、水溶液呈酸性、水溶液呈酸性OOHHOO C OHHCH2OH123456L(+)抗坏血酸抗坏血酸活性最强活性最强手性手性C（C4、C5）3.旋光性旋光性*CH2OHOOOO C OHHCH2OHCHHOCHOHCOCOCOONa HH+OH-有活性有活性有活性有活性无活性无活性OHOO C OHHCH2OHHOO4.还原性还原性二烯醇结构二烯醇结构与碱反应与碱反应单单钠钠盐盐32CONa酮酮酸酸盐盐水水解解 NaOH5.水解反应水解反应OHOO C OHHCH2OHHOOHOO C OHHCH2OHNaOCOONaOCOC

29、CHOHHOCHCH2OHNa2CO3NaOH显色糠醛衍生物糠醛吡咯脱水 H糖类的显色反应糖类的显色反应蓝蓝色色糠糠醛醛吡吡咯咯脱脱水水 HVitC50结构与糖类相似结构与糖类相似6.具糖的性质具糖的性质7.UV特征特征nmnmmaxOHmaxH6565 去去氢氢抗抗坏坏血血酸酸 OVitC利用还原性：与氧化剂的反应利用还原性：与氧化剂的反应鉴别试验鉴别试验二、二、OHOO C OHHCH2OHHOCH2OHOOOO C OHH O黑AgAgNOVitC3（一）与（一）与AgNO3反应反应（二）与（二）与2，6 - 二氯靛酚反应二氯靛酚反应无无色色二二氯氯靛靛酚酚， VitC62氧化型氧化型玫

30、瑰红色玫瑰红色H还原型还原型蓝色蓝色 OHOHNClHOClONClHOClOHH（玫瑰色）玫瑰色）（无色）（无色）红红碱碱性性酒酒石石酸酸铜铜 OCuVitC与碱性酒石酸铜反应与碱性酒石酸铜反应USP与与KMnO4反应反应 MnKMnOVitC（三）与其他氧化剂反应（三）与其他氧化剂反应（四）糖类的反应（四）糖类的反应蓝色糠醛戊糖脱水三氯醋酸 VitC-CO2-H2OOC HN（蓝色）（蓝色）OC H O(糠醛糠醛)OCHOH3CH2OHCH（戊糖）（戊糖）NNH50(吡咯吡咯)OO CO HHC H2O HH OO HC H2O HOO CO HHHH OOH2OC COHO OCHOH3

31、CH2OHBP0.01mol/L HClnmmax243 58554511E%cm （五）（五）UV三、杂质检查三、杂质检查（一）溶液的澄清度与颜色检查（一）溶液的澄清度与颜色检查（二）铁、铜离子的检查（二）铁、铜离子的检查维生素维生素C C原料药原料药 片片 剂剂 注射剂注射剂维生素维生素C C原料药原料药糠醛缩合呈色糠醛缩合呈色催化催化V Vc c氧氧化分解化分解原子吸收法原子吸收法(三)草酸的检查p草酸与金属离子作用形成沉淀；所以对草酸与金属离子作用形成沉淀；所以对Vc的原料，尤其是注射液，要进行草酸的原料，尤其是注射液，要进行草酸检查；检查；p加入加入CaCl2，比浊法；，比浊法；II

32、VitCH去氢抗坏血酸2指示剂指示剂 淀粉指示液淀粉指示液（一）碘量法（一）碘量法四、含量测定四、含量测定原理：利用原理：利用V Vc c强的还原性强的还原性OHOO C OHHCH2OHHO IH+OO C OHHOOCH2OHH I2+ 取本品约取本品约0.2g，精密称定，加新沸过，精密称定，加新沸过的冷水的冷水100ml与稀醋酸与稀醋酸10ml使溶解，加淀粉使溶解，加淀粉指示液指示液1ml，立即用碘滴定液（，立即用碘滴定液（0.05mol/L）滴定，至溶液显蓝色，在滴定，至溶液显蓝色，在30秒内不褪。每秒内不褪。每1ml碘滴定液碘滴定液(0.05mol/L)相当于相当于8.806mg的的

33、C6H8O6。2、方法、方法原料药原料药（2）酸性环境）酸性环境 稀醋酸稀醋酸 （1）新沸冷）新沸冷H2O减慢减慢VitC被被O2氧化速度氧化速度（3）立即滴定）立即滴定 赶走水中赶走水中O2减少减少O2的干扰的干扰3、讨论、讨论4.附加剂干扰的排除附加剂干扰的排除片剂片剂 过滤过滤注射剂注射剂 抗氧剂抗氧剂 丙酮丙酮甲醛甲醛Na2SO3 NaHSO3 Na2S2O3 Na2S2O5 CHHOOaS3a S O+H2N H ON2252HO NH COS3a33COCHCH33CHCHCNaSO3OH33CHCHCNaSO3OH空空样样二二氯氯靛靛酚酚液液空空白白样样品品VVHAcHPO 3(

34、二二)2，6 - 二氯靛酚滴定法二氯靛酚滴定法酚酚亚亚胺胺二二氯氯靛靛酚酚， 6 6 VitC1、原理、原理2、方法、方法自身指示终点法自身指示终点法（2）快速滴定）快速滴定 2min内内 （1）酸性环境）酸性环境 HPO3-HAc 稳定稳定VitC防止其他还原性物质干扰防止其他还原性物质干扰（3）亦可剩余比色测定）亦可剩余比色测定 AVitC测测二二氯氯靛靛酚酚（定量过量）（定量过量）（测剩余染料）（测剩余染料）3、讨论、讨论（4）缺点）缺点 需经常标定需经常标定贮存贮存一周一周不稳定不稳定专属性强，多用于含专属性强，多用于含 Vc的制剂和食品的的制剂和食品的分析分析（5）优点）优点（三）高

35、效液相色谱法高效液相色谱法血浆中维生素血浆中维生素C的测定的测定 标准溶液包括样品预处理过程均需加入标准溶液包括样品预处理过程均需加入偏磷酸，偏磷酸同时可用于血样中的蛋偏磷酸，偏磷酸同时可用于血样中的蛋白沉淀；当天取血当天测定；处理好的白沉淀；当天取血当天测定；处理好的样品亦需冰箱保存样品亦需冰箱保存第四节第四节 维生素维生素D D的分析的分析一、结构与性质一、结构与性质（一）结构（一）结构CH2HOCH3HCH3HHHCH3CH3HCH3维生素 D2(麦角骨化醇) CH2HOCH3HCH3HHHCH3CH31212345678910111314151617181920212223242526

36、27维生素D3(胆骨化醇) 1.1.性状性状 无色针状结晶或白色结晶性粉无色针状结晶或白色结晶性粉 末；无臭，无味。末；无臭，无味。2.2.溶解性溶解性 宜溶于有机溶剂，在植物油中宜溶于有机溶剂，在植物油中 略溶，在水中不溶。略溶，在水中不溶。3.3.不稳定性不稳定性 含有多个烯键，所以极不稳含有多个烯键，所以极不稳 定，宜氧化变质，效价降低，定，宜氧化变质，效价降低， 毒性增强。毒性增强。（二）性质（二）性质4 4旋光性旋光性 维生素维生素D2 6D2 6个手性碳原子个手性碳原子 维生素维生素D3 5D3 5个手性碳原子个手性碳原子5 5显色反应显色反应 甾类化合物甾类化合物氯仿溶液氯仿溶液

37、 黄色黄色 红色红色 紫色紫色 绿色绿色6 6紫外吸收特性紫外吸收特性 无水乙醇无水乙醇 265nm 265nm 维生素维生素D2 D2 为为460460490490 维生素维生素D3 D3 为为465465495495醋酐醋酐硫酸硫酸E1cm1%E1%1cm二、鉴别试验二、鉴别试验 （一）显色反应（一）显色反应1 1与醋酐与醋酐- -浓硫酸反应浓硫酸反应 氯仿溶液氯仿溶液 黄色黄色 红色红色 紫色紫色 绿色绿色醋酐醋酐硫酸硫酸2 2与三氯化锑反应与三氯化锑反应 本品本品1,2-1,2-二氯乙烷二氯乙烷 三氯化锑试液三氯化锑试液 橙红色橙红色 粉红色粉红色 3 3其它显色反应其它显色反应 维生

38、素维生素D D 三氯化铁三氯化铁 橙黄色橙黄色 二氯丙醇二氯丙醇 乙酰氯乙酰氯 绿色绿色 （二）比旋度鉴别（二）比旋度鉴别无水乙醇溶液无水乙醇溶液 维生素维生素D D2 2 比旋度为比旋度为102.5102.5至至107.5107.5 维生素维生素D D3 3 比旋度为比旋度为105105至至112112 （三）其它鉴别方法三）其它鉴别方法 薄层色谱法、薄层色谱法、HPLCHPLC法法制备衍生物测熔点制备衍生物测熔点 紫外、红外吸收光谱紫外、红外吸收光谱 （四）维生素（四）维生素D D2 2、D D3 3的区别反应的区别反应维生素维生素D D2 2 维生素维生素D D3 3 96%96%乙醇乙

39、醇 10ml 取取0.1ml0.1ml 乙醇乙醇1ml1ml和和85%85%硫酸硫酸5ml5ml 红色红色max570nm 黄色黄色 max495nm 三、杂质检查三、杂质检查（一）麦角甾醇的检查（一）麦角甾醇的检查维生素维生素D D2 290% %乙醇溶液乙醇溶液 洋地黄皂苷溶液洋地黄皂苷溶液 不得发生浑浊或沉淀不得发生浑浊或沉淀 （二）前维生素（二）前维生素D D的光照产物的光照产物RHO57hvhv加热加热HOCH2R前维生素D前维生素D维生素Dhvhvhvhv异构化hv异构化RHHO光甾醇（lumisterol）RCH3OH速甾醇（tachysterol）ROHCH2反式维生素D5,7

40、-二烯5,6-ROHCH3四、含量测定四、含量测定正相高效液相色谱法正相高效液相色谱法 （一）维生素（一）维生素D D测定法测定法 含量以单位表示含量以单位表示每单位相当于维生素每单位相当于维生素D 0.025D 0.025g g 注意：计算的是维生素注意：计算的是维生素D D及前维生素及前维生素D D经折经折 算成维生素算成维生素D D的总量的总量测定在半暗室及避免氧化的情况下进行测定在半暗室及避免氧化的情况下进行第一法：无干扰杂质第一法：无干扰杂质第二法：有第二法：有VA及其他杂质干扰及其他杂质干扰第三法：用第二法时，前第三法：用第二法时，前 VD峰受杂质干扰峰受杂质干扰 仅仅VD峰可分离

41、峰可分离 第一法第一法内标物：邻苯二甲酸二甲酯内标物：邻苯二甲酸二甲酯色谱条件及系统适用性试验：色谱条件及系统适用性试验：填充剂：硅胶填充剂：硅胶流动相：正己烷流动相：正己烷-正戊醇（正戊醇（997：3）检测波长：检测波长：254nm无干扰杂质无干扰杂质维维生生素素D3光照光照前维生素前维生素D3反式维生素反式维生素D3维生素维生素D3速甾醇速甾醇D3与维生素与维生素D3的比保的比保 留留 时时 间间分离度分离度1.01.0溶液组成溶液组成先后进样先后进样5次，维生素次，维生素D3 峰面积的峰面积的 RSD2.0 % 0.50.61.01.1系统适用系统适用性试验性试验校正因子测定：校正因子测

42、定：维生素维生素D的校正因子的校正因子: f1=Asmi/Aims前维生素前维生素D折算成维生素折算成维生素D的校正因子的校正因子:f2=（Asmr-f1msAr1）/（Ar2ms）含量测定：计算维生素含量测定：计算维生素D及前维生素及前维生素D折算成折算成 维生素维生素D的总量的总量mi=（f1Ai1+f2Ai2）ms/As第二法第二法第一步：皂化提取第一步：皂化提取供试品供试品OH-加热回流加热回流冷却冷却乙醚提取乙醚提取乙醚提取液乙醚提取液挥干乙醚挥干乙醚残渣残渣甲醇溶解甲醇溶解供试溶液供试溶液A有有VA及其他杂质干扰及其他杂质干扰第二步：分离收集第二步：分离收集供供试试品品溶溶液液AR

43、P-HPLC维生素维生素D前维生素前维生素D维生素维生素A及及其他杂质其他杂质叠叠峰峰分分离离收集收集供供试试品品溶溶液液B维生素维生素D及前及前维生素维生素D第三步：按第一法进行含量测定（内标法）第三步：按第一法进行含量测定（内标法）挥干挥干内标的正内标的正己烷溶液己烷溶液溶解溶解第三法第三法第一步：皂化提取第一步：皂化提取同第二法得供试品溶液同第二法得供试品溶液A第二步：第二步：供供试试品品溶溶液液ARP-HPLC维生素维生素D前维生素前维生素D维生素维生素A及及其他杂质其他杂质叠叠峰峰分分离离供试品溶液供试品溶液C收集收集挥干挥干异辛烷溶解异辛烷溶解90、1.5h挥干挥干正己烷正己烷溶解

44、溶解前维生素前维生素D维生素维生素D第三步：用第一法色谱条件按外标法计算含量第三步：用第一法色谱条件按外标法计算含量用第二法时，前用第二法时，前 VD峰受杂质干扰峰受杂质干扰苯并二氢吡喃醇苯并二氢吡喃醇第五节第五节 维生素维生素E的分析的分析OHO 一、结构与性质一、结构与性质（一）结构（一）结构OR1HOR2CH3名名 称称R1R2相对活性相对活性-生育酚生育酚-生育酚生育酚-生育酚生育酚-生育酚生育酚CH3CH3HHCH3HCH3H1.00.50.20.1*生物效价 右旋体 ： 消旋体 = 1.4 ：10（天然品）（天然品）（合成品）（合成品）CH3COOCH3CH3CH3CH3CH3CH3H3CH3COdl生育酚醋酸酯生育酚醋酸酯（二）性质（二）性质1、溶解性：易溶于有机溶剂，不溶于水、溶解性：易溶于有机溶剂，不溶于水4、UV：乙醇溶液中：乙醇溶液中UV284nm2、水解性：酯键易水解、水解性：酯键易水解 OorOHHVitE醌醌型型化化合合物物生生育育酚酚3、氧化性：无氧条