Ph对杂交鲟幼鱼消化道淀粉酶活性的影响

1、Ph对杂交鲟幼鱼消化道淀粉酶活性的对杂交鲟幼鱼消化道淀粉酶活性的影响影响w摘要w本试验测定了杂交鲟幼鱼胃、肠道、肝脏和幽门盲囊中淀粉酶的活性及p H 对这一酶活性的影响.结果表明: 从胃、肠、肝脏和幽门盲囊中均可检测出淀粉酶的活性, 各消化器官淀粉酶活性最适p H 值分别为: 胃6.5、幽门盲囊7.5、 肠7.0肝胰脏7.5； 且最适p H 条件下淀粉酶活性大小为胃 肠肝 幽门盲囊。w关键词：杂交鲟 消化道 淀粉酶 PHw1.前言w 杂交鲟【1】是我国特产鱼类，体纺锤形，体表披五行硬鳞，尾长，口腹位，歪尾。这是一种海栖性的洄游鱼类，每年911 月间，由海口溯长江而上，到金沙江至屏山一带进行繁殖

2、。孵出的幼仔在江中生长一段时间后，再回到长江口育肥。每年秋季，当杂交鲟溯江生殖洄游时，在各江段都可捕到较大数量的杂交鲟，故有“长江鱼王”之称。成体的杂交鲟体大而重，雄体一般重68106公斤，雌的130250公斤，据称，最高的记录竟达 500公斤。杂交鲟产卵量也很大，一条母鲟一次可产百万粒鱼籽，只是成活率不高，最后成鱼的仍为少数。因为长江水流较急，在动荡的水浪中进行受精，自然受精不完全，这就淘汰了一批鱼卵。受精卵在孵化过程中，或遇上食肉鱼类和其它敌害，或“惊涛拍岸”，又要损失一大批。即便孵成了小鱼，“大鱼吃小鱼”，还会有一定的损失。如此“三下五去二”，下的鱼籽虽多，能“长大成鱼”而传宗接代的却不

3、多。实际上，这是动物在进化过程中生殖适应的结果。凡在个体发育过程中幼子损失大的种类，下子则多；反之，则少。这不是“上帝”的安排，而是那些下子少、损失又大的种类在历史的长河中被淘汰了。 w 杂交鲟虽然个体庞大，但却摄食“斯文”，只以浮游生物、植物碎屑为主食，偶而吞食小鱼、小虾。据统计，长江上游每年可产杂交鲟2、3万公斤。但近年来捕捞过多，加之此鱼殖率低、成熟期长（10年左右），其种群数量已日趋减少。为使这种我国特产的“活化石”免遭灭顶之灾，有关部门已把杂交鲟列为保护对象。但有些具体问题仍有待解决。譬如长江葛洲坝水利枢纽建成后，切断了杂交鲟由海口上溯金沙江生殖洄游的通道，以致那些大腹便便的母鲟，被

4、阻于坝下而丧身。如何解决坝区的鱼道问题，已迫在眉睫。可喜的是，据悉，有关杂交鲟的人工繁殖和放流工作已试验成功。如若通过具体实践，使杂交鲟能在淡水中定居并繁衍后代，那就更有现实意义了。w 我国曾在辽宁北票晚侏罗世（距今1亿4千万年前）地层中发现过鲟类化石，北票鲟。这种鲟只在两体侧有一行侧线鲮，其它体表裸露，与杂交鲟体披五行鳞者不同。 w适宜杂交鲟生存的环境：w（1）水温w杂交鲟是一种适应于水温范围相当广的温水性鱼类，在人工养殖的条件下，杂交鲟的生存水温为037，生长适宜水温为1325，最佳生长水温为2022。亲鲟适宜催产水温为1724.5。鱼卵最佳孵化水温为1721。入冬之后，当水温下降至96时

5、，杂交鲟摄食量很少，生长停滞，甚至出现体重下降的现象。立春前后，水温逐渐回升至1013，开始少量摄食，生长缓慢。清明之后，水温回升至15以上，摄食开始活跃，生长加快。当水温达到3338时，杂交鲟反而不能正常活动。w(2)含氧量 w杂交鲟对溶氧量要求较高，一般要求水中的溶氧量在5毫克/升以上。如果当水中溶氧量下降至4毫克/升时，杂交鲟的食欲就下降；当溶氧量继续降至3毫克/升或降至3毫克/升以下时，杂交鲟摄食量迅速减少，甚至停止摄食，严重者发生活动迟缓、昏迷、甚至窒息死亡。值得指出的是，水的溶氧量变幅大的肥水，不应作为培育杂交鲟仔、幼鱼的水源。 w(3)PHw杂交鲟适宜于在pH为7.08.0的弱碱

6、性水中生活【3】。当pH下降时，就意味着水中二氧化碳的增多，酸性增大，溶氧量降低，这对于要求较高溶氧量的杂交鲟不利；当pH过高时，会使水中氨氮毒害作用加大，对于养殖杂交鲟也不利 w2试验目的和意义w 杂交鲟在国内外水产品中商品价值也极高，又具有很大的经济意义。皮可制革；鳔称为“鳇鱼肚”，含有丰富的胶质，可配制上等漆料，并可入药；肉味道鲜美；脊椎骨、鼻骨等均为上等佳肴，素有“鲨鱼翅，鲟鱼骨，食之延年益寿，滋阴壮阳”之说；体表由硬磷形成的骨板是制作工艺品的材料；尤以鱼卵最为名贵，用鲟鱼卵制成的“鱼子酱”，含脂量极高，被视为世界三大珍味之一。另据报导，杂交鲟所含的抗癌因子是目前的主药源鲨鱼的15至2

7、0倍。可以说杂交鲟浑身是宝，确属难得的特有经济鱼类，在分布区其自古就为最要的渔业对象。因此，积极研究开发杂交鲟的增养殖，并在大量增养殖基础上合理开发利用将大有作为。w鱼类消化酶不仅是鱼类消化生理的重要内容,而且为人工配合饲料的研制提供科学的理论依据【15】。随着鱼类营养学和饲料学的拓展和深入,鱼类消化酶的研究越来越受到人们重视。故本实验旨在研究ph对鲟鱼消化道淀粉酶的影响，以便为杂交鲟人工配合饲料的研究提供一些资料。w3试验材料与方法w3.1材料w3.1.1选择杂交鲟幼鱼w杂交鲟购自养殖场。健康状况良好，体表无伤。目测大小一致，平均体长为20厘米左右，平均体重一斤。w3.1.2试验药品w（1）

8、0.04%可溶性淀粉 精确称取可溶性淀粉0.20g，置于20ml烧杯内，加入蒸馏水约5ml，摇匀使成淀粉混悬液，另称取无水磷酸二氢钠13.3g及苯甲酸4.3g，共置于500ml烧杯内，加入蒸馏水约250ml,煮沸后，将淀粉混【2】悬液倒入此烧杯内，并用蒸馏水洗涤装淀粉混悬液的烧杯数次，洗涤亦倒入此烧杯内。继续煮沸1分钟，冷却至室温后倒入500ml容量瓶中，并用蒸馏水稀释至500ml刻度。此淀粉液pH应为7.00.1，在室温下保存23个月。 （2）、0.1N碘贮存液：精确称取碘酸钾(KIO3) 3.567g及碘化钾（KI）45g置于1L容量瓶内，加入蒸馏水约800ml，然后缓慢加入浓盐酸9ml，

9、摇匀后用蒸馏水稀释至1L刻度，置冰箱内备用。 （3）、0.01N碘应用液：取0.1N碘贮存液50ml，用蒸馏水稀释至500ml，盛于 棕色瓶中置冰箱内约保存1个月。 3.1.3试验器材w实验器材有分光光度计、电子天平、离心机、pH测定仪，恒温水箱、匀浆器、剪子、镊子、冰块、50ml比色管若干、移液管若干，500ml容量瓶，烧杯，称量纸，吸耳球，100ml量筒，玻璃棒 滴管、试管夹、酒精灯、三脚架、石棉网w3.1.4 试验时间和地点w 实验于2011年3月16日4月1日结束，历时15天。其中预备实验10天，正式试验5天。实验地点为 河北农业大学海洋学院 生物实验室。w3.2试验步骤w3.2.1样

10、品的制备【9】w活鱼运输回来后, 在冰盘中将鱼解剖, 取出胃、肠、幽门盲囊和肝脏, 剥除多余的脂肪和结缔组织, 然后剪开胃、肠、幽门盲囊和肝脏, , 再用去离子水冲净消化道内容物, 并分别称重后剪碎; 用体积为其重量10 倍的去离子水在玻璃匀浆器充分研磨匀浆, 匀浆后进行离心处理(3000r/ min1 ) 离心10分钟，将上清液即粗酶提取液置4 冰箱中保存备用。w 3.2.2淀粉酶活性测定w取50ml刻度比色管4支，标明为对照管，测定管3支。对照管，测定管都加0.04可溶性淀粉5.0ml 。将两管在37水浴中预热25分钟，测定管加酶液0.1ml，对照管不加；将所有管混匀后，再置37水浴中反应

11、7.5分钟，都加0.01N碘应用液5.0ml，用蒸馏水稀释至50ml，立即混匀。采用碘- 比色法，参照周景祥【16】的方法在660nm 波长下进行计算和测定, 所用仪器为上海精密科学仪器有限公司产的721 分光光度计。用660nm或红色滤光板进行比色，以蒸馏水校正光密度0点，读取对照管和测定管光密度读数。w3.2.3计算w淀粉酶活性定义【10】: lmL 酶滤液中的酶, 在30 和底物淀粉作用30min1 ,水解10mg 淀粉为1 个淀粉酶活性单位(U) 。w w淀粉酶活力单位/100ml（对照管光密度测定管光密度）/对照管光密度2/1030/7.5100/0.1=（对照管光密度测定管光密度）

12、/对照管光密度800表1：胃中淀粉酶活性的测定 光密度ph胃对照 胃测1胃测2 胃测3 淀粉酶活性6.00.3910.340.3240.33122.766.50.4710.3710.370.369171.557.00.4660.3890.3720.382145.927.50.4090.3550.340.352117.368.00.4490.3950.3930.39299.78表2：幽门盲囊中淀粉酶活性的测定 光密度ph幽对照幽测1幽测2 幽测3淀粉酶活性6.00.4710.4620.4580.46018.686.50.4810.4690.4700.46521.627.00.5080.4610.

13、4650.46867.727.50.5250.4700.4600.47088.388.00.4590.4300.4360.42550.54表3：肠中淀粉酶活性的测定 光密度ph肠对照肠测1 肠测2肠测3 淀粉酶活性6.00.5090.5000.4930.49122.006.50.4810.4500.4390.43168.197.00.5030.4250.4240.425124.067.50.4520.420.410.39577.888.00.4700.4400.4500.43547.66表4：肝脏中淀粉酶活性的测定 光密度ph肝对照肝测1肝测2肝测3 淀粉酶活性6.00.8400.7890.8

14、050.78046.676.50.8800.820.810.7963.647.00.7910.7250.7150.71074.847.50.9250.8010.8400.784101.198.00.9000.8000.7400.84294.22结合表结合表1及图及图1 可以看出胃中淀粉酶的活性随可以看出胃中淀粉酶的活性随ph的增大，活的增大，活性先增强；当性先增强；当ph为为6.5时活性最大。时活性最大。结合表结合表2及图及图2可以看出在可以看出在ph66.5之间，淀粉酶活性缓慢增之间，淀粉酶活性缓慢增加；之后迅速增加达到最大值，及加；之后迅速增加达到最大值，及ph=7.5为酶活性的最佳为酶活

15、性的最佳ph.结合表结合表3及图及图3可以看出随可以看出随ph增加，肠中淀粉酶活性先增大，增加，肠中淀粉酶活性先增大，在在ph=7达到最大，之后活性渐渐下降；故酶活性最大的最佳达到最大，之后活性渐渐下降；故酶活性最大的最佳ph为为7.结合表结合表4及图及图4可以看出随可以看出随ph增加，肝中淀粉酶活性先逐渐增增加，肝中淀粉酶活性先逐渐增大，然后缓慢降低，当大，然后缓慢降低，当ph为为7.5时酶活性最大。时酶活性最大。w5讨论w 鱼类消化酶【12】不仅是鱼类消化生理的重要研究内容,而且为人工配合饲料的研制提供科学的理论依据。随着鱼类营养学和饲料学研究的拓展和深入,鱼类消化酶的研究【13】越来越受

16、到人们重视。国内外关于鱼类消化酶的研究报道【17】,先后有野鲮(Labeo rohita)、蟾胡子鲶(Clarias batrachus)和叉尾鲶。胡思玉; 白建梅等研究了pH值对昆明裂腹鱼淀粉酶活性影响，结果表明：在最适pH值条件下,昆明裂腹鱼胃、前肠、中肠、后肠和肝等主要消化器官淀粉酶活性分别为669.5、789.23、796.86、761.51和774.09,淀粉酶活性最高的是中肠,最低的是胃。其最适pH在7.4到8.6之间。倪寿文【7】等的研究结果表明, 草鱼、鲤、鲢、鳙和尼罗罗非鱼淀粉酶的最适p H 为6.0 8.0 ,肉食性的南方大口鲶淀粉酶的最适pH 为5.0 -7.0。鳜淀粉酶

17、的最适pH 为6.6 7.0。这一结果与黄鳝7.0 8.0、大菱鲆的7.0 7.5、金头鲷的8.0、大口鲇的8.0、Natalia , Tengjaroenkul 等的研究认为在中性pH 值时可以检测到最高的淀粉酶活性基本接近, 但Munilla - Moran 研究尖吻平鱿(Sebastes mentella) 发现其适宜的pH 范围为4.5 -5.0 , 为酸性范围, 这可能是不同的鱼类其淀粉酶适宜的pH 值范围不同所致。w 等研究了种鲤 科鱼类和种丽科鱼类食性与消化酶的关系，鱼 类消化酶酶促反应与酶动力学等方面的研究 鱼类酶动力学是研究酶催化反应速度的问题，它比较了肉食性、杂食性、革食性类鱼的淀粉酶和脂 肪酶的活性差异；黄耀桐等【8】研究了草鱼肠道和肝胰 脏淀粉酶活性与饲料的关系；吴婷婷等【6】研究了鳜鱼、青 鱼、草、鲤、鲫、鲢的消化酶活性；桂远明等研究了温 度对草、鲤、鲢、鳙主要消化酶活性的影响。这些研 究显示淀粉酶活性则草食 性鱼类最高，杂食性鱼类次之，肉食性鱼类最低。对于鱼类 酶动力学的研究，大多也是关于温度、值对酶反应 速度的影响【4】。这方面的研究，在鱼类的消化酶研究方 面占有的比例最大。并且从酶促反应中的得出的对于消化 酶活性的最适温度和最适值与鱼类所生活的水温 和其本身消化道的值常常是不一致的，甚至有时 有很大的差别。对于这种现象，其内在机理还有待于 进一步探