检验方法评价

1、检测系统检测系统(xtng)的性能评价、的性能评价、确认和验证确认和验证精品资料1.1.测量误差：测量结果减去被测量的真值的差，简称测量误差：测量结果减去被测量的真值的差，简称(jinchng)(jinchng)误差。误差。2.2.随机误差：测量结果与在重复条件下，对同一被测量进行无随机误差：测量结果与在重复条件下，对同一被测量进行无限多次测量所得结果的平均值之差。限多次测量所得结果的平均值之差。3.3.系统误差：在重复性条件下，对同一被测量进行无限多次测系统误差：在重复性条件下，对同一被测量进行无限多次测量所得结果的平均值与被测量的真值之差称为系统误差。量所得结果的平均值与被测量的真值之差称

2、为系统误差。亦称为正确度亦称为正确度复习基础知识复习基础知识精品资料4 4、正确度：检测结果离真值的偏移程度、正确度：检测结果离真值的偏移程度5 5、精密度：表示、精密度：表示(biosh)(biosh)测量结果中随机误差测量结果中随机误差大小的程度。大小的程度。6 6、准确度：、准确度： 准确度是测量结果中系统误差（正确度）与准确度是测量结果中系统误差（正确度）与随机误差（精密度）的综合。随机误差（精密度）的综合。精品资料检验结果应该：检验结果应该：准确准确(zhnqu)精确精确迅速迅速精品资料1.实验方法实验方法分级分级实验方法学与量值实验方法学与量值溯源溯源2.参考物的参考物的分级分级3

3、.值溯源值溯源4.方法学评价方法学评价第一节、方法学与量值溯源第一节、方法学与量值溯源(syun)精品资料 是指准确度最高，系统误差最小，经过详是指准确度最高，系统误差最小，经过详细的研究，没有发现产生细的研究，没有发现产生(chnshng)(chnshng)误差的原误差的原因或在某些方面不够明确的方法。因或在某些方面不够明确的方法。决定性方法决定性方法(fngf)(fngf)参考方法参考方法 是指准确度与精密度已经充分证实的分析方是指准确度与精密度已经充分证实的分析方法，干扰因素少，系统误差与重复测定的随机误差法，干扰因素少，系统误差与重复测定的随机误差相比可以忽略不计，有适当的灵敏度、特异

4、性及较相比可以忽略不计，有适当的灵敏度、特异性及较宽的分析范围。宽的分析范围。常规方法常规方法 是指性能指标符合临床或其他目的需要，有是指性能指标符合临床或其他目的需要，有足够的精密度、准确度、特异性和适当的分析范围，足够的精密度、准确度、特异性和适当的分析范围，而且经济实用。而且经济实用。 一一临床生化检验方法分级临床生化检验方法分级精品资料表3-1 临床生化检验项目的决定性方法、参考方法、常规方法 项目决定性方法 参考方法 常规方法钙钙ID-MSID-MS原子吸收分光光度法原子吸收分光光度法邻甲酚酞络合酮法、邻甲酚酞络合酮法、MTBMTB法法氯氯ID-MSID-MS、中子活化法、中子活化法

5、电流滴定法电流滴定法硫氰酸汞法、选择性电极法硫氰酸汞法、选择性电极法镁镁ID-MSID-MS原子吸收分光光度法原子吸收分光光度法MTB MTB 法法钾钾ID-MSID-MS、中子活化法、中子活化法火焰光度法火焰光度法离子选择电极法、火焰光度离子选择电极法、火焰光度法法钠钠中子活化法中子活化法火焰光度法火焰光度法离子选择电极法、火焰光度离子选择电极法、火焰光度法法清蛋白清蛋白- -免疫化学法免疫化学法溴甲酚绿法溴甲酚绿法总蛋白总蛋白- -凯氏定氮法凯氏定氮法双缩脲法双缩脲法肌肝肌肝ID-MSID-MS离子交换层析法离子交换层析法苦味酸法、酶法苦味酸法、酶法尿素尿素ID-MSID-MS尿素酶法尿素

6、酶法二乙酰一肟法、酶法二乙酰一肟法、酶法尿酸尿酸ID-MSID-MS尿酸酶法（紫外）尿酸酶法（紫外）磷钨酸比色法磷钨酸比色法胆红素胆红素- -重氮反应法重氮反应法J-G J-G 法、钒酸盐氧化法法、钒酸盐氧化法葡萄糖葡萄糖ID-MSID-MS已糖激酶法已糖激酶法葡萄糖氧化酶法葡萄糖氧化酶法胆固醇胆固醇ID-MSID-MSAbell-Kendall Abell-Kendall 法法酶法酶法甘酒三脂甘酒三脂ID-MSID-MS变色酸显色法变色酸显色法酶法酶法精品资料 （primary reference materials）也称一级标准）也称一级标准(biozhn)品，与决定性方法平行，用于验证决

7、定品，与决定性方法平行，用于验证决定性方法、评价与校准参考方法，以及为二级标准性方法、评价与校准参考方法，以及为二级标准(biozhn)品定值。品定值。 原级参考原级参考(cnko)(cnko)物质物质次级参考物质次级参考物质 （secondary reference materialssecondary reference materials）也称二级标）也称二级标准品准品 ，二级标准品的定值源于一级标准品和参考，二级标准品的定值源于一级标准品和参考方法，主要用于评价常规方法，也可为质控物定方法，主要用于评价常规方法，也可为质控物定值。值。 常规校准品常规校准品 校准（校准（calibrat

8、ion）指的是对由仪器、方法和试剂所组成）指的是对由仪器、方法和试剂所组成的检测系统的校准过程。的检测系统的校准过程。电解质、酶类、其他生化指标应合理选择校准品电解质、酶类、其他生化指标应合理选择校准品二二临床生化检验的参考物质和校准品临床生化检验的参考物质和校准品 精品资料标准标准(biozhn)(biozhn)品品校准校准(jio zhn)(jio zhn)品品质控品质控品一一级标准品用高纯化学物质。一般由国家标准计量局出具证书。级标准品用高纯化学物质。一般由国家标准计量局出具证书。二级标准品某种成分的浓度可用公认的参考方法测定。由参考实验室或二级标准品某种成分的浓度可用公认的参考方法测定

9、。由参考实验室或权威学术组织出具证书，如权威学术组织出具证书，如SRMSRM、BCRBCR、IFCCIFCC。标准品标准品(standard）可用做校准品（）可用做校准品（calibrater），考虑血），考虑血清成分复杂、难以避免基质效应清成分复杂、难以避免基质效应 。质控品多是成分相对稳定的混合血清，分为定值和非定值、冻干质控品多是成分相对稳定的混合血清，分为定值和非定值、冻干或液体，添加了防腐剂和保护剂等。或液体，添加了防腐剂和保护剂等。精品资料图图21-1 各级各级( j)参考物质和校准品的关系及其量值传递过程参考物质和校准品的关系及其量值传递过程精品资料三三量值溯源量值溯源(syun

10、)溯源性溯源性(traceability）是指通过一条具有规定不确）是指通过一条具有规定不确定度（定度（uncertainty）的不间断的比较链，使测量结果）的不间断的比较链，使测量结果或测量标准的值能够与规定的参考标准（通常或测量标准的值能够与规定的参考标准（通常(tngchng)是国家或国际测量标准）联系起来的特性是国家或国际测量标准）联系起来的特性，称为溯源性。其不间断的比较链称为溯源链。，称为溯源性。其不间断的比较链称为溯源链。溯源性溯源性精品资料图图3-2 量值溯源量值溯源(syun)和量值传递途径和量值传递途径精品资料第二节 检测系统(xtng)的性能评价、确认和验证教学教学(ji

11、o xu)(jio xu)：检测系统的性能评价检测系统的性能评价检测系统的性能确认检测系统的性能确认检测系统的性能验证检测系统的性能验证精品资料系系统统误误差差误差分类误差分类评价试验评价试验评价指标评价指标理想结理想结果果比例系统误差比例系统误差回收试验回收试验回收率回收率95-105%95-105%恒定系统误差恒定系统误差干扰试验干扰试验干扰值干扰值接近接近0 0比例系统误差比例系统误差恒定系统误差恒定系统误差方法对比试验方法对比试验Y=a+bXY=a+bXb b接近接近1.01.0a a接近接近0 0随机随机误差误差重复性试验重复性试验（批内、批间、（批内、批间、日间）、总不精日间）、总

12、不精密度密度CVCV 0.97 b 0.97，或，或b 1.03b 1.03。 相关系数相关系数r r一般情况下，一般情况下，0.9750.975或或20.95 20.95 。精品资料二、检测二、检测(jin c)限的评价限的评价 1. 可检测的最低分析可检测的最低分析(fnx)物浓度为检测系统物浓度为检测系统的分析的分析(fnx)灵敏度或称检测限。灵敏度或称检测限。 分析分析(fnx)灵敏度：灵敏度：具有定性含义的：具有定性含义的： 检测低限（检测低限（LLD） 空白空白具有定量含义的：具有定量含义的： 生物检测限（生物检测限（BLD） 加物加物 功能灵敏度（功能灵敏度（FS） CV精品资料

13、2.检测(jin c)限的不同概念精品资料3.检测检测(jin c)限实验限实验精品资料4.结果结果(ji gu)可接受性评价可接受性评价与仪器或试剂厂家与仪器或试剂厂家(chn ji)标示比较标示比较精品资料 所谓回收即分析方法正确测定所谓回收即分析方法正确测定(cdng)(cdng)加入常规分析样品中的纯分析物的能力。加入常规分析样品中的纯分析物的能力。目的是测定目的是测定(cdng)(cdng)比例系统误差，以衡比例系统误差，以衡量候选方法的准确度。量候选方法的准确度。精品资料方法方法 将被分析的纯品标准液加入病人样品将被分析的纯品标准液加入病人样品中，成为分析样品，原病人样品加入相同中

14、，成为分析样品，原病人样品加入相同(xin tn)(xin tn)量的无分析物的溶液作基础量的无分析物的溶液作基础样品，然后用实验方法分析，两者测定结样品，然后用实验方法分析，两者测定结果的差值为回收量。果的差值为回收量。精品资料回收率计算回收率计算 以测定血清以测定血清(xuqng)(xuqng)钙为例说明如下：钙为例说明如下：样品制备样品制备 1) 1)基础样品：血清基础样品：血清(xuqng)2ml(xuqng)2ml蒸馏水蒸馏水0.1ml0.1ml； 2) 2)分析样品：血清分析样品：血清(xuqng)2ml(xuqng)2ml4mmol/L4mmol/L钙标准液钙标准液0.1ml0.

15、1ml； 3) 3)分析样品：血清分析样品：血清(xuqng)2ml(xuqng)2ml25mmol/L25mmol/L钙标准液钙标准液0.1ml0.1ml；精品资料精品资料故本例的管的加入量分别为：故本例的管的加入量分别为： 回收浓度回收浓度(nngd)(nngd)分析样品测得浓度分析样品测得浓度(nngd)(nngd)基础样品测得浓度基础样品测得浓度(nngd)(nngd)回收率（）回收浓度回收率（）回收浓度(nngd)/(nngd)/加入浓度加入浓度(nngd)(nngd)100100精品资料精品资料 理想的结果期望理想的结果期望(qwng)(qwng)回收率回收率达到达到100100，

16、要求，要求95%-105%95%-105%。现在平。现在平均回收率为均回收率为95.795.7. .精品资料注意事项注意事项准确吸量。准确吸量。样品样品(yngpn)(yngpn)中加入标准液后，总的浓度必须在测定方法中加入标准液后，总的浓度必须在测定方法的分析范围内，须作加入高、中、低不同浓度的回收试验，的分析范围内，须作加入高、中、低不同浓度的回收试验，计算平均回收率。计算平均回收率。加入标准液后，使实验样品加入标准液后，使实验样品(yngpn)(yngpn)中被测浓度达到医学中被测浓度达到医学上具有决定意义的浓度。上具有决定意义的浓度。加入标准液的体积在整个样品加入标准液的体积在整个样品

17、(yngpn)(yngpn)中要少，一般在中要少，一般在1010以内。以内。精品资料四、临床生化四、临床生化(shn hu)(shn hu)干扰试验干扰试验 EP7-AEP7-A干扰：在临床干扰：在临床(ln chun)(ln chun)生化中，由于另一成分的影响或生化中，由于另一成分的影响或者样本的特性，待测的一定浓度的分析物出现有临床者样本的特性，待测的一定浓度的分析物出现有临床(ln (ln chun)chun)意义的偏倚。意义的偏倚。分析物：实验室测试的物质或者成分分析物：实验室测试的物质或者成分干扰物：样本中不同于分析物的能引起测量偏倚的组分干扰物：样本中不同于分析物的能引起测量偏倚

18、的组分 。精品资料应用应用(yngyng)(yngyng)举例举例尿酸对尿酸对GOD-PODGOD-POD法测定血糖的干扰：法测定血糖的干扰：样本制备样本制备(zhbi)(zhbi)： 基础样本：基础样本： 血清血清0.9ml+0.1ml0.9ml+0.1ml蒸馏水蒸馏水 分析样本分析样本1 1： 血清血清0.9ml+4mmol/L0.9ml+4mmol/L尿酸尿酸0.1ml0.1ml 分析样本分析样本2 2： 血清血清0.9ml+8mmol/L0.9ml+8mmol/L尿酸尿酸0.1ml0.1ml 尿酸样本：蒸馏水尿酸样本：蒸馏水0.9ml+8mmol/L0.9ml+8mmol/L尿酸尿酸0

19、.1ml0.1ml用用GOD-PODGOD-POD法测定，结果填入下表。法测定，结果填入下表。精品资料干扰实验干扰实验(shyn)(shyn)检测检测结果结果葡萄糖测得值葡萄糖测得值（mmol/Lmmol/L）加入尿酸值加入尿酸值(mmol/L)(mmol/L)干扰值干扰值(mmol/L)(mmol/L)基础样本基础样本6.506.50分析样本分析样本1 16.206.200.400.400.300.30分析样本分析样本2 25.955.950.800.800.550.55尿酸样本尿酸样本0 0精品资料干扰实验干扰实验(shyn)(shyn)检测结果检测结果单位单位(dnwi)(dnwi)浓度

20、尿酸使葡萄糖减少值浓度尿酸使葡萄糖减少值= mmol/L= mmol/L表明正常血清尿酸表明正常血清尿酸0.4mmol/L0.4mmol/L，使血糖测定结果约减少，使血糖测定结果约减少0.28mmol/L0.28mmol/L。 70804005503002121加入尿酸值加入尿酸值干扰值干扰值精品资料五、评价(pngji)测定线性范围 （EP6-A法） 线性范围（线性范围（linear rangelinear range）是指系统最）是指系统最终的输出值（浓度或活性）与被分析物的浓终的输出值（浓度或活性）与被分析物的浓度或活性成比例的范围。度或活性成比例的范围。 线性检测系统反应线性检测系统反

21、应(fnyng)(fnyng)，包括校准、，包括校准、线性化技术、系数和仪器反应线性化技术、系数和仪器反应(fnyng)(fnyng)。 精品资料实验实验(shyn)标本标本 线性实验应使用与病人标本相似线性实验应使用与病人标本相似(xin s)(xin s)的标本，的标本，最少使用最少使用4 4个浓度水平，推荐个浓度水平，推荐5 5个水平。个水平。高值标本应高于线性上限高值标本应高于线性上限3030，低值标本应低于线性，低值标本应低于线性低限。低限。 精品资料样本样本(yngbn)来源来源病人标本病人标本低浓度的标本稀释高浓度标本低浓度的标本稀释高浓度标本用推荐的稀释液稀释病人样本用推荐的稀

22、释液稀释病人样本(yngbn) (yngbn) 病人样本病人样本(yngbn)(yngbn)中添加分析物中添加分析物 商业质控物商业质控物/ /校准物校准物/ /线性验证物质线性验证物质 精品资料可准备如下可准备如下(rxi)血清：血清：低浓度低浓度X1X1混合血清混合血清(xuqng)(xuqng)；高浓度高浓度X5X5混合血清混合血清(xuqng)(xuqng)；血清血清(xuqng)X2(xuqng)X2：3 3份份“X1”+1“X1”+1份份“X5”“X5”；血清血清(xuqng)X3(xuqng)X3：2 2份份“X1”+2“X1”+2份份“X5”“X5”；血清血清(xuqng)X4

23、(xuqng)X4：1 1份份“X1”+3“X1”+3份份“X5”“X5”。浓度由低到高顺序：浓度由低到高顺序：X1, X2, X3, X4, X5 X1, X2, X3, X4, X5 精品资料配制配制(pizh)溶液浓度的计算溶液浓度的计算 X X为标本为标本(biobn)(biobn)浓度，浓度，V V为标本为标本(biobn)(biobn)体体积积 精品资料实验实验(shyn)程序程序 全部实验和数据采集应在同一工作日全部实验和数据采集应在同一工作日内完成。分析序列应为随机排列。有显著内完成。分析序列应为随机排列。有显著携带污染时，应用空白携带污染时，应用空白(kngbi)(kngbi

24、)隔开标本。隔开标本。每个浓度标本重复测定每个浓度标本重复测定4 4次纪录测定结果。次纪录测定结果。 精品资料方法方法(fngf)线性实验记录表线性实验记录表 标本浓度标本浓度测定次数测定次数X X1 1Y Y1-11-1Y Y1-21-2Y Y1-31-3Y Y1-41-4X X2 2Y Y2-12-1Y Y2-22-2Y Y2-32-3Y Y2-42-4X X3 3Y Y3-13-1Y Y3-23-2Y Y3-33-3Y Y3-43-4X X4 4Y Y4-14-1Y Y4-24-2Y Y4-34-3Y Y4-44-4X X5 5Y Y5-15-1Y Y5-25-2Y Y5-35-3Y Y

25、5-45-4精品资料数据数据(shj)(shj)评估评估 初步初步(chb)(chb)数据检查数据检查 离群值检查离群值检查 确定线性范围确定线性范围 精品资料初步数据初步数据(shj)(shj)检查检查 目视检查每一个分析的所有结果有无潜在的目视检查每一个分析的所有结果有无潜在的离群值。将测量数据作为离群值。将测量数据作为Y Y值，计算浓度或相对值，计算浓度或相对浓度作为浓度作为X X值进行作图。值进行作图。 在图上，每一个在图上，每一个Y Y值有一个对应的值有一个对应的X X值，将每值，将每个浓度水平重复测定的均值个浓度水平重复测定的均值(jn zh)(jn zh)点在图上，点在图上，将这

26、些点连接起来，观察每个点与直线的大致偏将这些点连接起来，观察每个点与直线的大致偏差，这样容易发现异常点（明显的抄写错误或仪差，这样容易发现异常点（明显的抄写错误或仪器故障等）。器故障等）。 精品资料判断离群判断离群(l qn)点的方法点的方法对于特定浓度对于特定浓度YiYi值的离群点进行检测时，需将其值的离群点进行检测时，需将其4 4个重复个重复(chngf)(chngf)值从大到小排列（值从大到小排列（Yi-1Yi-1到到Yi-4Yi-4）。）。计算级差计算级差D=Yi-1D=Yi-1Yi-4Yi-4。若若Yi-1Yi-1可能是离群点，计算：可能是离群点，计算：D1=D1=（Yi-1Yi-1

27、Yi-2Yi-2）/D/D。若若Yi-4Yi-4可能是离群点，计算：可能是离群点，计算：D4= Yi-3D4= Yi-3Yi-4Yi-4）/D/D。计算结果（计算结果（D1D1或或D4D4）如果大于）如果大于0.7650.765（0.050.05）或）或0.8890.889（0.010.01），则），则该点判为离群点。该点判为离群点。 精品资料全部数据中的离群全部数据中的离群(l qn)(l qn)点如果有点如果有2 2点，则应保留全部数点，则应保留全部数据或重新进行实验。据或重新进行实验。离群离群(l qn)(l qn)点点2 2个或者以内，保留全部数据。个或者以内，保留全部数据。离群离群(

28、l qn)(l qn)点点2 2个以上，重新实验。个以上，重新实验。精品资料数据数据(shj)的处理的处理 以分析物浓度为以分析物浓度为X X轴，反应值或仪器输出值（均轴，反应值或仪器输出值（均值）为值）为Y Y轴，绘制轴，绘制X-YX-Y线性图（线性图（Y=aX+bY=aX+b）。）。目测线性和进行统计学分析，判断目测线性和进行统计学分析，判断(pndun)(pndun)是否符是否符合要求。合要求。精品资料确定确定(qudng)线性线性范围范围 多项式回归分析多项式回归分析(fnx) (fnx) 非线性程度非线性程度 随机误差的影响随机误差的影响精品资料多项式回归多项式回归(hugu)分析分

29、析可以借助可以借助(jizh)(jizh)多种商业统计软件完成。多种商业统计软件完成。SPSSSPSS和和SASSAS做数据库做数据库例如用例如用SPSSSPSS的话，选的话，选“分析分析” “” “回归分析回归分析” ” “ “曲线估计曲线估计” “” “因变量因变量” ” 、 “ “自变自变量量” ” 、“模型（线性、平方、三次方）模型（线性、平方、三次方）” ” 得三个方程得三个方程精品资料多项式回归多项式回归(hugu)分分析析阶别阶别 回归方程回归方程回归自由度（回归自由度（RdfRdf）一次一次Y=a+bY=a+b1 1X X2 2二次二次Y=a+bY=a+b1 1X+bX+b2 2X X2 23 3三次三次Y= a+bY= a+b1 1X+bX+b2 2X X2 2+b+b3 3X X3 34 4 将测定将测定(cdng)(cdng)数据分别拟合一次、二次和三次多项式数据分别拟合一次、二次和三次多项式精品资料多项式回归多项式回归(hugu)分析分析一次多项式模型为直线，是判断某种方法是否为线性的最一次多项式模型为直线，是判断某种方法是否为线性的最适方程。适方程。二次多项式模型代表一种抛物线反应曲线，有增加趋势二次多项式模型代表一种抛物线反应曲线，有增加趋势(qsh)(qsh)（曲线上升）或减少趋势（曲线