自身抗体的检测及应用

1、自身抗体的检测及应用自身抗体的检测及应用 一、自身免疫一、自身免疫 【概念】【概念】 当机体免疫系统受某种因素作用使自身免疫当机体免疫系统受某种因素作用使自身免疫耐受削弱或破坏时，免疫系统会对自身成份包括耐受削弱或破坏时，免疫系统会对自身成份包括正常或变性的组织正常或变性的组织、器官、细胞、蛋白质或酶类器官、细胞、蛋白质或酶类等自身抗原产生免疫应答反应等自身抗原产生免疫应答反应，出现自身抗体或出现自身抗体或致敏淋巴细胞的这种现象称为自身免疫致敏淋巴细胞的这种现象称为自身免疫 。一、自身免疫一、自身免疫v自身免疫可以是正常生理性的，例如：自身免疫可以是正常生理性的，例如： 针对衰老或死亡的自体细

2、胞。针对衰老或死亡的自体细胞。v自身免疫也可以是病理性的自身免疫也可以是病理性的，引起自引起自身免疫病。身免疫病。二、自身免疫性疾病二、自身免疫性疾病 【概念】【概念】 在内因与外因的共同作用下在内因与外因的共同作用下，机体的自身免机体的自身免疫应答失控疫应答失控，反应过度反应过度，直接或间接破坏自身组直接或间接破坏自身组织织，并引起相应器官病变，导致临床症状，则为并引起相应器官病变，导致临床症状，则为自身免疫性疾病自身免疫性疾病 。 分为器官特异性和全身性。分为器官特异性和全身性。二、自身免疫性疾病二、自身免疫性疾病自身免疫性疾病的特点自身免疫性疾病的特点：（1）多数自身免疫性疾病是自发或特

3、发性的，）多数自身免疫性疾病是自发或特发性的，感染，药物等外因可能有一定的影响。感染，药物等外因可能有一定的影响。（2）患者血清中存在有高水平的）患者血清中存在有高水平的球蛋白。球蛋白。（3）患者血清中有高效价的自身抗体或出现与）患者血清中有高效价的自身抗体或出现与自身抗原反应的致敏淋巴细胞。自身抗原反应的致敏淋巴细胞。（4）病损部位有变性的免疫球蛋白沉积，呈现）病损部位有变性的免疫球蛋白沉积，呈现以大量淋巴细胞和浆细胞浸润为主的慢性炎症。以大量淋巴细胞和浆细胞浸润为主的慢性炎症。二、自身免疫性疾病二、自身免疫性疾病自身免疫性疾病的特点自身免疫性疾病的特点：（5）病程一般较长，发作与缓解交替出

4、现，仅）病程一般较长，发作与缓解交替出现，仅有少数为自限性。有少数为自限性。（6）女性多男性，老年多于青少年。）女性多男性，老年多于青少年。（7）有遗传倾向。）有遗传倾向。（8）应用肾上腺皮质激素等免疫抑制剂有效。）应用肾上腺皮质激素等免疫抑制剂有效。（9）常有其它自身免疫病同时存在。）常有其它自身免疫病同时存在。（1010）可复制出相似的动物疾病模型）可复制出相似的动物疾病模型 。三、自身抗体三、自身抗体 【概念】【概念】 由各种原因造成的机体由各种原因造成的机体B细胞产生针细胞产生针对自身组织成分的抗体，称为自身抗体。对自身组织成分的抗体，称为自身抗体。 自身抗体是自身免疫性疾病的重要标志

5、自身抗体是自身免疫性疾病的重要标志，每每 种自身免疫性疾病都伴有特征性的自身抗体谱种自身免疫性疾病都伴有特征性的自身抗体谱。RARA自身抗体谱及临床意义自身抗体谱及临床意义 RF60RA中出现，量与中出现，量与RA活活 动性及严重性呈正相关。动性及严重性呈正相关。亦在其它亦在其它CTD出现出现 抗抗CCP在在50RA中出现中出现 （抗环瓜氨酸肽抗体）（抗环瓜氨酸肽抗体） 特异性较高特异性较高 AKA（抗角蛋白抗体）（抗角蛋白抗体） 在在40RA阳性阳性 APF（抗核周因子）（抗核周因子）在在52RA阳性阳性 抗抗RA33RA阳性率为阳性率为35 抗抗Sa在部分在部分RA阳性阳性以上抗体阳性有助

6、于早期RA及不典型RA的诊断和早期开展治疗，改善预后自身抗体与疾病的关系自身抗体与疾病的关系 某些自身抗体对某种疾病的诊断具有高度特某些自身抗体对某种疾病的诊断具有高度特异性异性，已经成为该病的血清标记抗体或特异性抗已经成为该病的血清标记抗体或特异性抗体体 。 某些自身抗体与疾病的活动性有相关性某些自身抗体与疾病的活动性有相关性，少数少数自身抗体参与了免疫病病理性损伤自身抗体参与了免疫病病理性损伤 。特异性较强的自身抗体特异性较强的自身抗体 抗抗Sm系统性红斑狼疮系统性红斑狼疮 抗抗Scl-70系统性硬化症系统性硬化症 抗抗SSA/SSB干燥综合征干燥综合征 抗抗CCP类风湿关节炎类风湿关节炎

7、抗体滴度的高低可判断疾病的活动性抗体滴度的高低可判断疾病的活动性 抗双链抗双链DNASLE aCLSLE、磷脂抗体综合征、磷脂抗体综合征 RF类风湿关节炎类风湿关节炎预测疾病的预后及临床亚型预测疾病的预后及临床亚型 抗抗Jo-1皮肌炎合并肺间质病变皮肌炎合并肺间质病变 抗抗Scl-70弥漫性系统性硬化弥漫性系统性硬化 抗抗rRNP狼疮脑病狼疮脑病自身抗体的意义自身抗体的意义 自身免疫性疾病的诊断；自身免疫性疾病的诊断； 疾病活动性的判断；疾病活动性的判断； 疗效的观察及预后；疗效的观察及预后； 指导临床用药等；指导临床用药等； 进行不同疾病的鉴别诊断。进行不同疾病的鉴别诊断。自身抗体常用检测方

8、法自身抗体的检测方法：自身抗体的检测方法：（1）酶联免疫吸附测定法（）酶联免疫吸附测定法（ELISA）：）：该法检该法检测自身抗体快速、敏感及特异性高，但对抗原测自身抗体快速、敏感及特异性高，但对抗原的要求很高，必须使用高质量的纯化抗原，由的要求很高，必须使用高质量的纯化抗原，由于一种抗原只能检测一种抗体，多种抗体的检于一种抗原只能检测一种抗体，多种抗体的检测就必须多种单独的抗原，因此该法在临床免测就必须多种单独的抗原，因此该法在临床免疫实验室的应用受到一定限制疫实验室的应用受到一定限制 。（2）酶免疫斑点）酶免疫斑点(条带条带)实验实验 【优点优点】将经亲和层析纯化的抗原包被在固定将经亲和层

9、析纯化的抗原包被在固定的位置的位置，每一种抗原只对应一条条带每一种抗原只对应一条条带，不会产不会产生非特异性反应条带生非特异性反应条带，结果灵敏度高结果灵敏度高、特异好特异好，判断实验结果简单判断实验结果简单，每个反应区均有质控带，每个反应区均有质控带，可以显示操作是正确可以显示操作是正确，阴性与阳性的结果明显阴性与阳性的结果明显，容易判断容易判断，条带显色与抗体滴度相关条带显色与抗体滴度相关 。(3)间接免疫荧光法间接免疫荧光法(IFT): 检测检测ANA的金标准，的金标准， 具有很高的敏感性和特异性。具有很高的敏感性和特异性。间接免疫荧光法原理 将稀释的血清与生物载片（反应区内固定将稀释的

10、血清与生物载片（反应区内固定有包被基质的生物薄片）温育，如果样本有包被基质的生物薄片）温育，如果样本是阳性的，特异性是阳性的，特异性IgG、IgA和和 IgM抗体与抗体与相应的核抗原结合。在第二次温育时，荧相应的核抗原结合。在第二次温育时，荧光素标记的抗人抗体与结合在生物基质上光素标记的抗人抗体与结合在生物基质上的抗体反应，形成荧光显微镜下所观察到的抗体反应，形成荧光显微镜下所观察到的特异性荧光模式。的特异性荧光模式。抗核抗体抗核抗体(ANA)(ANA)是以自身真核细胞成分作为是以自身真核细胞成分作为靶抗原的一组自身抗体的总称，泛指各种核靶抗原的一组自身抗体的总称，泛指各种核成分的抗体，是一种

11、广泛存在的自身抗体。成分的抗体，是一种广泛存在的自身抗体。抗核抗体抗核抗体(ANA)(ANA)均质型均质型与与AHA（抗组蛋白抗体（抗组蛋白抗体）、抗、抗DNA有关，引起有关，引起LE形成主要见于形成主要见于SLE、药物性狼疮、药物性狼疮核膜型核膜型 与抗与抗ds-DNA有关，有关， 多见于多见于SLE，特别是有肾炎者，特别是有肾炎者抗核抗体抗核抗体(ANA)(ANA)斑点型斑点型 与抗与抗ENA有关，应进一有关，应进一步查特异性抗体步查特异性抗体核仁型核仁型多见于系统性硬皮病多见于系统性硬皮病项目项目检验方法检验方法SLE四项四项ANA间接免疫荧光抗DSDNA抗体间接免疫荧光抗组蛋白抗体EL

12、ISA抗核小体抗体ELISAENA系列系列抗RNP免疫印迹、 ELISA抗SM免疫印迹、 ELISA抗SSA免疫印迹、 ELISA抗SSB免疫印迹、 ELISA抗JO-1免疫印迹、 ELISA抗SCL-70免疫印迹、 ELISA抗核糖体P蛋白免疫印迹、 ELISARA三项三项AKA（抗角质蛋白抗体）间接免疫荧光抗RA33ELISA抗CCP（抗环瓜氨酸肽抗体）ELISAANCA四项四项P-ANCA（荧光模型为核周模型）间接免疫荧光C-ANCA（荧光模型为细胞质模型）间接免疫荧光MPO-ANCA（髓过氧化酶抗体）ELISAPR3-ANCA（抗蛋白酶3抗体）ELISA常常见见的的自自身身抗抗体体及及

13、其其检检测测方方法法(1)(2)自身免疫肝炎七项自身免疫肝炎七项检验方法检验方法ANA间接免疫荧光抗LMA抗（肝细胞膜抗体）间接免疫荧光ASMA（抗平滑肌抗体）间接免疫荧光抗LKM（抗肝肾微粒体抗体）间接免疫荧光抗SLA（抗可溶性肝抗原抗体）间接免疫荧光AMA（线粒体抗体）间接免疫荧光抗LSP（抗肝脏特异性蛋白抗体）间接免疫荧光RF三项三项RF-IgGELISARF-IgAELISARF-IgMELISA抗磷脂综合征三项（抗磷脂综合征三项（ASP）ELISAPT-IgG（凝血素抗体）ELISAPT-IgMELISA抗2-糖蛋白1抗体ELISA常常见见的的自自身身抗抗体体及及其其检检测测方方法法

14、 ds-DNA 判断疾病活动性-ELISA 诊断疾病-IFT自身抗体检测结果正确解读检测方法局限性：假阳性，假阴性临床意义局限性：非特异性，生理性，疾病前期临床表现阳性，实验室检查阴性实验室检查阳性，临床表现阴性自身免疫病自身抗体非常复杂SLE患者中存在100多种自身抗体Semin Arthritis Rheum. 2004 Oct;34(2):501-37.自身免疫病自身抗体非常复杂APS患者中存在30种自身抗体J Autoimmun, 2008. 30(1-2): p. 74-83.N Engl J Med 2003;349:1526-33.疾病预警自身抗体在SLE发病前9.4年出现疾病预

15、警AMA在在PBC发病前发病前10年出现年出现临床复杂性急性肝衰患者出现2和PBC特异性抗体临床复杂性抗CCP抗体在丙肝中8.5 指标阴性是否意味着疾病的排除？ 指标阳性意味着什么？特异性的局限 各指标与对应疾病之间： 如 SLE 抗Sm抗体特异性99% 敏感性仅为25% RA RF阳性可出现在SLE, pSS, SSc, 慢性肺结核，高球蛋白血症等，5%正常人可出现低滴度的RF 。“自相矛盾”的结果ANA (间接免疫荧光法)阳性，靶抗原阴性ANA (间接免疫荧光法)阴性，靶抗原阳性（膜条法），占10%，为客观存在ANCA：荧光法阴性，但靶抗原阳性（5%）特异性指标阳性，人无相应症状 健康人

16、- 一过性阳性（感染、焦虑、疲劳等），2月后 复查可能转阴或者下降。 貌似健康人- 检测自身抗体（微观） 影像-组织 表现-器官（最晚） 患者 - 但不是自身免疫性疾病，如传染病，观察滴 度变化，一般会下降 自身免疫性疾病-但不是指标对应的疾病 自身抗体检测结果的解释疾病标记（志）性自身抗体疾病特异性自身抗体疾病相关性自身抗体疾病非特异性自身抗体生理性自身抗体疾病前期存在检测方法及检测程序局限性检测质量:假阴性假阳性解读困难四、常见自身抗体的检测及应用四、常见自身抗体的检测及应用 自身抗体种类很多，这里只是简单介绍几种自身抗体种类很多，这里只是简单介绍几种常见的自身抗体的检测常见的自身抗体的检

17、测 ： （1）类风湿因子类风湿因子（RF） （2）抗抗ENA抗体谱抗体谱 类风湿因子（类风湿因子（RFRF）的检测及应用）的检测及应用 RF是一种抗人或动物是一种抗人或动物IgGIgG分子分子FcFc片段抗原决片段抗原决定簇的抗体定簇的抗体，是以变性是以变性IgGIgG为靶抗原的自身抗为靶抗原的自身抗体体，可与人或动物的变性可与人或动物的变性IgGIgG结合结合，而不与正常而不与正常IgGIgG发生凝集发生凝集，最多见于类风湿性关节炎患者最多见于类风湿性关节炎患者，RFRF有有IgMIgM、IgGIgG、IgAIgA和和IgEIgE型型，IgMIgM型为主要类型。型为主要类型。类风湿因子（类风

18、湿因子（RFRF）检测方法检测方法：a.a.胶乳凝集试验胶乳凝集试验：只能定性或定量只能定性或定量，灵敏度及特灵敏度及特异性不变异性不变，只能检测只能检测I IgMgM型型RFRF。b.b.速率散射比浊法：定量检测，准确、快速，准速率散射比浊法：定量检测，准确、快速，准确性和敏感性高于确性和敏感性高于胶乳凝集试验胶乳凝集试验，也只能检测也只能检测I IgMgM型型RFRF。c.c.ELISAELISA法法：可检出不同可检出不同I Ig g类型的类型的RFRF。类风湿因子（类风湿因子（RFRF）临床应用临床应用RFRF在在RARA中的阳性率为中的阳性率为70%70%，是诊断，是诊断RARA的重的重要标准之一。要标准之一。RFRF含量与病情的活动性和严重性成正比，持续高含量与病情的活动性和严重性成正比，持续高滴度的滴度的RFRF常提示常提示RARA病情活动，骨侵蚀发生率高，病情活动，骨侵蚀发生率高，常