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1、会计学1实验六实验六PCR产物的琼脂糖凝胶电泳检测产物的琼脂糖凝胶电泳检测第一页，编辑于星期一：十九点 四十七分。第1页/共12页第二页，编辑于星期一：十九点 四十七分。 琼脂糖是一种线性多糖聚合物，天然聚合长链状分子，在沸水中溶解，45开始形成多孔性刚性滤孔，凝胶孔径的大小取决于琼脂糖的浓度，浓度越高，孔隙越小，其分辨能力就越强。DNA分子在琼脂糖凝胶中泳动时有电荷效应和分子筛效应。第2页/共12页第三页，编辑于星期一：十九点 四十七分。实验原理实验原理（1）电荷效应 DNA分子在PH值高于其等电点的溶液中带负电荷，在电泳时向阳极移动。第3页/共12页第四页，编辑于星期一：十九点 四十七分。

2、（2）分子筛效益 在一定的电场强度下，DNA分子的迁移速度主要取决于分子筛效益，即DNA分子本身的大小和构象（共价闭环DNA线状DNA开环DNA），而且其迁移速度与其相对分子质量的对数值成反比，所以不用相对分子质量的DNA分子可以在琼脂糖凝胶电泳中分离。第4页/共12页第五页，编辑于星期一：十九点 四十七分。2. DNA分子进行染色的原理（以溴化乙锭为例） 观察琼脂糖凝胶中DNA最常用的方法是利用荧光染料溴化乙锭进行染色。溴化乙锭是一种高度灵敏的荧光染色剂，用于观察琼脂糖凝胶中的DNA分子。溴化乙锭在紫外光照射下能发射荧光，当DNA样品在琼脂糖凝胶中从负极向正极泳动时，溴化乙锭从正极向负极移动

3、，这样溴化乙锭分子就会嵌入到DNA分子中的碱基对之间形成络合物，这种络合物在紫外光下发射的荧光要比单纯的DNA分子要强的多，便于DNA的检测。第5页/共12页第六页，编辑于星期一：十九点 四十七分。第6页/共12页第七页，编辑于星期一：十九点 四十七分。实验步骤实验步骤琼脂糖凝胶的配制琼脂糖凝胶的配制1g琼脂糖100mlTBE缓冲液5l GoldView 冷却到60第7页/共12页第八页，编辑于星期一：十九点 四十七分。1.将适量的DNA Marker用移液枪加入凝胶的第一个孔中。2.在PCR产物中加入6DNA LodingBuffer（每5ul产物加入1ul），混匀后，用移液枪加入到样品孔内，每孔加2ul。点样点样第8页/共12页第九页，编辑于星期一：十九点 四十七分。 肉眼可见指示剂泳至距制胶板前端约2-3cm处即可停止电泳。切断电源，取出凝胶，置于紫外线透射仪上观察电泳结果，或用凝胶成像分析系统拍照保存。电泳、观察电泳、观察第9页/共12页第十页，编辑于星期一：十九点 四十七分。第10页/

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