本科寄生虫实验五

1、实验实验 五五-疟原虫疟原虫 Malaria Parasite -弓形虫弓形虫 Toxoplasma-人芽囊原虫人芽囊原虫 Blastocystis hominis . . 掌握间日疟原虫掌握间日疟原虫(P.v)(P.v)红细胞内期的形态特点。红细胞内期的形态特点。. . 掌握恶性疟原虫掌握恶性疟原虫(P.f)(P.f)早期滋养体和配子体的形态特点。早期滋养体和配子体的形态特点。. . 认识疟原虫在肝细胞内认识疟原虫在肝细胞内( (即红外期即红外期) )及在蚊体内发育阶段及在蚊体内发育阶段的形态特点。的形态特点。. . 练习血片的制作及染色。练习血片的制作及染色。. . 熟悉弓形虫滋养体及包囊

2、的形态特征。熟悉弓形虫滋养体及包囊的形态特征。. . 熟悉隐孢子虫卵囊形态特征，了解改良抗酸染色法。熟悉隐孢子虫卵囊形态特征，了解改良抗酸染色法。. . 熟悉肉孢子虫卵囊、孢子囊形态特征。熟悉肉孢子虫卵囊、孢子囊形态特征。. . 了解人芽囊原虫形态特征。了解人芽囊原虫形态特征。 . . 拷贝拷贝“标本复习标本复习”文件夹，做好考前复习。文件夹，做好考前复习。. . 班长在下次实验课前班长在下次实验课前2-32-3天，到天，到106106馆一楼准备室领取玻馆一楼准备室领取玻片和透明胶。片和透明胶。the Purpose and Requirements在人体内发育在人体内发育: :在雌性按蚊体内

3、发育在雌性按蚊体内发育: :红细胞外期红细胞外期红细胞内期红细胞内期疟原虫生活史发育包括：疟原虫生活史发育包括：红细胞外期红细胞外期 Exoerythrocytic stage- -在肝细胞内进行裂体增殖；在肝细胞内进行裂体增殖；- -间日疟原虫和卵形疟原虫速发型子孢子红外期发育的时间分别是间日疟原虫和卵形疟原虫速发型子孢子红外期发育的时间分别是6-86-8天和天和9 9天，而迟发型子孢子为数月至年余；恶性疟原虫天，而迟发型子孢子为数月至年余；恶性疟原虫6 6天，三日疟原天，三日疟原虫虫11-1211-12天。天。红内期红内期 Erythrocytic cycle Early trophozo

4、it/ Ring form,Large trophozoite,Schizont裂体增殖周期裂体增殖周期Gametocyte P.vP.v 红细胞内期发育红细胞内期发育48 h薛氏小点（薛氏小点（红色红色）细胞核（细胞核（紫红色紫红色）细胞质（细胞质（淡蓝色淡蓝色）疟色素（疟色素（棕褐色棕褐色）- -经姬氏或瑞氏染色，基本结构如下：经姬氏或瑞氏染色，基本结构如下：疟原虫疟原虫红细胞（红细胞（红色红色）红细胞变化红细胞变化- -被寄生红细胞变化：体积、颜色、薛氏小点被寄生红细胞变化：体积、颜色、薛氏小点- -疟原虫：核数目、胞质形状、疟色素疟原虫：核数目、胞质形状、疟色素( Early trop

5、hozoit/Ring form, R )P.vP.v 早期滋养体早期滋养体/ /环状体环状体. . 核核1 1个个, ,. . 胞质环形胞质环形, ,胞质与核之间有空泡胞质与核之间有空泡, ,呈戒指状呈戒指状, ,. . 大小约为红细胞直径的大小约为红细胞直径的1/3.1/3. . 被寄生红细胞无明显改变被寄生红细胞无明显改变. .( Large trophozoite, T )P.vP.v 晚期滋养体晚期滋养体/ /大滋养体大滋养体. . 核核1 1个个, ,. . 胞质增多变形胞质增多变形, ,形状不规则，有空泡，形状不规则，有空泡，. . 胞质内出现棕褐色烟丝状的疟色素胞质内出现棕褐色

6、烟丝状的疟色素. . . . 被寄生红细胞体积稍增大被寄生红细胞体积稍增大, ,色淡色淡, ,出现鲜红薛氏小点出现鲜红薛氏小点. .( Young schizont, YS )P.vP.v 未成熟裂殖体未成熟裂殖体. . 核分裂核分裂, , 数目数目121212个个, ,. .胞质分裂胞质分裂, ,围绕核围绕核, ,形成裂殖子形成裂殖子, ,数目数目12-2412-24个个, ,. .疟色素集中成疟色素集中成1-21-2团，位于虫体中央或一侧团，位于虫体中央或一侧. . . . 被寄生红细胞体积增大被寄生红细胞体积增大, ,色淡色淡, ,出现鲜红薛氏小点出现鲜红薛氏小点. .疟色疟色素素疟色素

7、疟色素疟色疟色素素雄配子体雄配子体雌配子体雌配子体. .核核1 1个个, ,疏松疏松, ,近中央近中央, ,. .核核1 1个个, ,致密致密, ,偏向一侧偏向一侧, ,. .细胞质几乎充满胀大的红细胞，疟色素均匀分布于其中细胞质几乎充满胀大的红细胞，疟色素均匀分布于其中. . . 被寄生红细胞体积增大被寄生红细胞体积增大, ,色淡色淡, , 鲜红薛氏小点明显鲜红薛氏小点明显. .P.vP.v 配子体配子体(Gametocyte,G)P.fP.f 红细胞内期发育红细胞内期发育36-48 h外周血中不易见到！外周血中不易见到！P.fP.f 早期滋养体早期滋养体/ /环状体环状体( Early t

8、rophozoit; Ring form, R ). . 核核1 1个个, ,. . 胞质环形胞质环形, ,胞质与核之间有空胞质与核之间有空泡泡, ,呈戒指状呈戒指状, ,. . 大小约为红细胞直径的大小约为红细胞直径的1/5.1/5.多虫型多虫型双核型双核型边缘型边缘型P.fP.f 配子体配子体(Gametocyte,G)疟色素集中于核的周围。疟色素集中于核的周围。疟色素散于核的周围疟色素散于核的周围 。- -被寄生的红细胞因破裂而不见或仅见一部分。被寄生的红细胞因破裂而不见或仅见一部分。 一个红细胞被一个红细胞被P.f P.f and P.v P.v 同时感染同时感染P. fP. v一个红

9、细胞有多个疟原虫寄生一个红细胞有多个疟原虫寄生, 注意与裂殖体鉴别。注意与裂殖体鉴别。In female anopheline :在雌性按蚊体内发育在雌性按蚊体内发育 蚊胃上囊合子（卵囊）蚊胃上囊合子（卵囊）卵囊卵囊子孢子子孢子-子孢子子孢子Sporozoite：- -子孢子为感染阶段；子孢子为感染阶段；- -间日疟间日疟原虫和原虫和卵形疟卵形疟原虫子孢子具有两种类型：速发型和迟发型。原虫子孢子具有两种类型：速发型和迟发型。 -Thin blood film / thick blood film stained with Giemsa or Wrights stain.-Thick blood

10、 film -Thin blood film Laboratory diagnosis - -具体操作见后面实验操作。具体操作见后面实验操作。TachyzoiteTissue cyst of Toxplasma gondii 缓殖子缓殖子BrachyzoiteOocyst of Toxplasma gondii改良抗酸染色法改良抗酸染色法. .卵囊卵囊 Oocyst卵囊卵囊 Oocyst孢子囊孢子囊Sporocyst肉孢子囊肉孢子囊Sarcocyst：包囊：空泡型：颗粒型：分裂状态- -碘染色碘染色 患者女性，患者女性，4747岁，因外伤于岁，因外伤于19971997年年4 4月月5 5日入院

11、手术。术前血常日入院手术。术前血常规，血红蛋白规，血红蛋白10.3g/L10.3g/L，红细胞，红细胞3.353.3510101212/L/L，白细胞，白细胞21.621.610109 9/L/L。术中输血术中输血400ml400ml，术后第，术后第9 9天起不规则发热，实验室检查血红蛋白天起不规则发热，实验室检查血红蛋白8.6g/L8.6g/L，红细胞，红细胞2.72.710101212/L/L，白细胞，白细胞15.215.210109 9/L/L，晚幼红细胞，晚幼红细胞30/10030/100个白细胞。成熟红细胞易见破碎红细胞，红细胞内查见疟原个白细胞。成熟红细胞易见破碎红细胞，红细胞内查

12、见疟原虫小滋养体，确诊为恶性疟。经三联抗疟治疗后痊愈。虫小滋养体，确诊为恶性疟。经三联抗疟治疗后痊愈。 Case discussion 1 思考题：思考题：1.1.该患者有可能经什么方式感染恶性疟原虫？该患者有可能经什么方式感染恶性疟原虫？ 2.2.本病的诊断依据是什么？本病的诊断依据是什么？ 3.3.恶性疟与间日疟的治疗一样吗？恶性疟与间日疟的治疗一样吗？ 患者男性，患者男性，3030岁，因头痛高热岁，因头痛高热3 3天入院治疗，刚援非回国。血天入院治疗，刚援非回国。血常规检查：血红蛋白常规检查：血红蛋白15g/L15g/L，红细胞，红细胞4.544.5410101212/L/L。入院后第。

13、入院后第2 2天出天出现昏迷，持继高热，反复多次镜检，于入院后第现昏迷，持继高热，反复多次镜检，于入院后第4 4天在红细胞内查天在红细胞内查见疟原虫小滋养体，同时在骨髓涂片中查见疟原虫小滋养体，确见疟原虫小滋养体，同时在骨髓涂片中查见疟原虫小滋养体，确认为恶性疟原虫，会诊后确诊为恶性脑型疟。认为恶性疟原虫，会诊后确诊为恶性脑型疟。Case discussion 2 思考题：思考题：1.1.从疟疾流行区（如非洲）工作、旅游、学从疟疾流行区（如非洲）工作、旅游、学习归国的人员，如发现原因不明的高热，应考虑其可能患习归国的人员，如发现原因不明的高热，应考虑其可能患了什么病？应该做什么检查？了什么病？

14、应该做什么检查？ 2.2.试述脑型疟的临床表现及致病机制？试述脑型疟的临床表现及致病机制？ 女，女，4848岁，因右眼突然失明岁，因右眼突然失明2020余天入院。病人无诱因突然出现余天入院。病人无诱因突然出现右眼失明，无眼部红、痛、闪光症状。入院后查：右眼视力：光感、右眼失明，无眼部红、痛、闪光症状。入院后查：右眼视力：光感、外眼无异常，玻璃体出血。静脉点滴血栓通，口服活血化疲、软坚外眼无异常，玻璃体出血。静脉点滴血栓通，口服活血化疲、软坚散结中药，右眼视力无提高。局麻下行散结中药，右眼视力无提高。局麻下行“右眼玻璃体切割术右眼玻璃体切割术”，手，手术顺利。术后第术顺利。术后第1 1天，右眼视

15、力天，右眼视力0.20.2，结膜充血，角膜透明；瞳孔药，结膜充血，角膜透明；瞳孔药物性散大，玻璃体清亮，眼底见视盘界清，色正常，物性散大，玻璃体清亮，眼底见视盘界清，色正常，C/D = 0.2C/D = 0.2，视网膜动脉稍红，视网膜动脉稍红，A: V=1:2A: V=1:2，颞下方视网膜可见陈旧性出血灶，考，颞下方视网膜可见陈旧性出血灶，考虑玻璃体出血即为此处出血灶渗入，局部伴色素沉着，脉络膜萎缩；虑玻璃体出血即为此处出血灶渗入，局部伴色素沉着，脉络膜萎缩；术后第术后第3 3天视力天视力0.50.5；术后两次抽血查弓形体阳性（；术后两次抽血查弓形体阳性（PCRPCR法）。追问法）。追问病史，

16、病人儿童时期视力正常，近来病人有养猫史病史，病人儿童时期视力正常，近来病人有养猫史4 4年，最后诊断：年，最后诊断：右眼玻璃体出血；右眼玻璃体出血；弓形体性视网膜脉络膜炎。弓形体性视网膜脉络膜炎。 Case discussion 3 思考题：结合病例分析感染弓形虫的可能途径有哪些？思考题：结合病例分析感染弓形虫的可能途径有哪些？ 1. 1. 临床疟疾发作与疟原虫的繁殖有何关系？临床疟疾发作与疟原虫的繁殖有何关系？2. 2. 试讨论引起疟疾暴发性流行的原因。试讨论引起疟疾暴发性流行的原因。3. 3. 简述如何诊断疟疾？简述如何诊断疟疾？4. 4. 刚地弓形虫感染为何分布很广？试述弓形刚地弓形虫感

17、染为何分布很广？试述弓形虫致病的特点？虫致病的特点？5.5.什么叫机会致病性原虫？有哪些常见的机什么叫机会致病性原虫？有哪些常见的机会性致病原虫？会性致病原虫？6. 6. 引起贫血的寄生虫有哪些？致病机理？引起贫血的寄生虫有哪些？致病机理？Questions:实验内容实验内容 （一）示教内容：（一）示教内容： 1.1.间日疟原虫红细胞内期各期，恶性疟原虫早期间日疟原虫红细胞内期各期，恶性疟原虫早期滋养体和配子体、疟原虫囊合子、子孢子以及红外期滋养体和配子体、疟原虫囊合子、子孢子以及红外期标本：油镜下观标本：油镜下观 2.2.弓形虫速殖子（吉氏染色）：油镜下观弓形虫速殖子（吉氏染色）：油镜下观

18、3.3.隐孢子虫卵囊（改良抗酸染色）：图片示教隐孢子虫卵囊（改良抗酸染色）：图片示教 4.4.猪人肉孢子虫肉孢子囊：高倍镜下观猪人肉孢子虫肉孢子囊：高倍镜下观实验内容实验内容 （二）实验操作：薄血涂片制作与染色（二）实验操作：薄血涂片制作与染色 1.1.鼠疟原虫（鼠疟原虫（Plasmodium bergheri Plasmodium bergheri 伯氏疟原虫）伯氏疟原虫）接种小白鼠：取液氮保种的伯氏疟原虫，解冻后用生接种小白鼠：取液氮保种的伯氏疟原虫，解冻后用生理盐水稀释。在无菌操作的条件下，给健康小白鼠作理盐水稀释。在无菌操作的条件下，给健康小白鼠作腹腔内注射，每只腹腔内注射，每只1ml

19、1ml，感染后，感染后3-53-5天，外周血即可查天，外周血即可查到原虫（由老师完成）。到原虫（由老师完成）。 2.2.薄血片制作：用剪刀剪去鼠尾未端少许，取洁薄血片制作：用剪刀剪去鼠尾未端少许，取洁净玻片一张，从鼠尾取血一小滴置玻片中部，另取一净玻片一张，从鼠尾取血一小滴置玻片中部，另取一张玻片作推片，将推片的短边接触血滴，待血液向两张玻片作推片，将推片的短边接触血滴，待血液向两侧扩散后，以两玻片呈侧扩散后，以两玻片呈30-4030-40角，将推片自右向左角，将推片自右向左匀速快捷向前推进，即成薄血膜。理想的薄血膜应是匀速快捷向前推进，即成薄血膜。理想的薄血膜应是血量和宽度适中，平滑不起波浪

20、，未端成舌形。血量和宽度适中，平滑不起波浪，未端成舌形。Preparation of blood film and stain- -血涂片制作和染色血涂片制作和染色-血血 涂片涂片 制制 作作Preparation of blood film and stain1-31-3为薄血片制作；为薄血片制作；4-64-6为厚血片制作为厚血片制作实验内容实验内容（二）实验操作：薄血涂片制作与染色（二）实验操作：薄血涂片制作与染色玻璃板玻璃板橡皮筋橡皮筋滴加染液滴加染液3.3.固定：待血片阴干后，用甲醇固固定：待血片阴干后，用甲醇固定薄血膜，自然晾干。定薄血膜，自然晾干。4.4.染色：按染色：按1 1毫升

21、水加毫升水加4 4滴吉氏原液滴吉氏原液的比例配制染液。将涂有血膜的玻的比例配制染液。将涂有血膜的玻片血膜面朝下，一端架在铁丝上，片血膜面朝下，一端架在铁丝上，用吸管滴注染液于玻板与血片之间，用吸管滴注染液于玻板与血片之间，使染液与血膜完全接触，染色使染液与血膜完全接触，染色20min20min。5.5.自来水轻轻冲洗血膜，晾干镜检。自来水轻轻冲洗血膜，晾干镜检。- -镜下观察血片的操作步骤及注意事项镜下观察血片的操作步骤及注意事项1. 101. 10倍镜下经过观察后选择一较倍镜下经过观察后选择一较好的视野作为油镜下观察野，避免好的视野作为油镜下观察野，避免红细胞严重重叠或太稀少的视野红细胞严重

22、重叠或太稀少的视野. . - -镜下观察血涂片的操作步骤及注意事项镜下观察血涂片的操作步骤及注意事项2.2.油镜下观察时按固定方向，如从左油镜下观察时按固定方向，如从左到右或从右到左，将整张片观察完到右或从右到左，将整张片观察完( (约约30min)30min)，以避免在同一部位重复看。，以避免在同一部位重复看。1. 101. 10倍镜下经过观察后选择一较倍镜下经过观察后选择一较好的视野作为油镜下观察野，避免好的视野作为油镜下观察野，避免红细胞严重重叠或太稀少的视野红细胞严重重叠或太稀少的视野. . - -镜下观察血片的操作步骤及注意事项镜下观察血片的操作步骤及注意事项2.2.油镜下观察时按固

23、定方向，如从左油镜下观察时按固定方向，如从左到右或从右到左，将整张片观察完到右或从右到左，将整张片观察完( (约约30min)30min)，以避免在同一部位重复看。，以避免在同一部位重复看。1. 101. 10倍镜下经过观察后选择一较倍镜下经过观察后选择一较好的视野作为油镜下观察野，避免好的视野作为油镜下观察野，避免红细胞严重重叠或太稀少的视野红细胞严重重叠或太稀少的视野. . 3.3.发现目标时，判断是否为疟原虫，发现目标时，判断是否为疟原虫，注意与血小板、白细胞、淋巴细胞、注意与血小板、白细胞、淋巴细胞、细胞碎片、染液颗粒等鉴别。细胞碎片、染液颗粒等鉴别。- -镜下观察血片的操作步骤及注意

24、事项镜下观察血片的操作步骤及注意事项2.2.油镜下观察时按固定方向，如从左油镜下观察时按固定方向，如从左到右或从右到左，将整张片观察完到右或从右到左，将整张片观察完( (约约30min)30min)，以避免在同一部位重复看。，以避免在同一部位重复看。1. 101. 10倍镜下经过观察后选择一较倍镜下经过观察后选择一较好的视野作为油镜下观察野，避免好的视野作为油镜下观察野，避免红细胞严重重叠或太稀少的视野红细胞严重重叠或太稀少的视野. . 3.3.发现目标时，判断是否为疟原虫，发现目标时，判断是否为疟原虫，注意与血小板、白细胞、淋巴细胞、注意与血小板、白细胞、淋巴细胞、细胞碎片、染液颗粒等鉴别。

25、细胞碎片、染液颗粒等鉴别。4.4.肯定为疟原虫后，再依据形态特肯定为疟原虫后，再依据形态特征分析是征分析是R R、T T、YSYS、MS or GMS or G。4.4.形态典型的拍片，存图。形态典型的拍片，存图。实验内容实验内容 附：附：伯氏疟原虫伯氏疟原虫( (Plasmodium berghei) )分布于非分布于非洲扎伊尔的加丹山区森林中，自然宿主为丛林鼠，蚊洲扎伊尔的加丹山区森林中，自然宿主为丛林鼠，蚊媒为杜氏按蚊。媒为杜氏按蚊。 红内期裂体增殖周期约红内期裂体增殖周期约24h24h，早期滋养体为典型，早期滋养体为典型的环状体，偶见双核型，晚期滋养体近似圆形，阿米的环状体，偶见双核型

26、，晚期滋养体近似圆形，阿米巴样外形不典型，成熟裂殖体含裂殖子数在小鼠为巴样外形不典型，成熟裂殖体含裂殖子数在小鼠为6-6-1010个，配子体形状类似人间日疟原虫。疟色素细小，个，配子体形状类似人间日疟原虫。疟色素细小，黑色或金黄色。黑色或金黄色。 多虫寄生在同一红细胞极为普遍多虫寄生在同一红细胞极为普遍( (注意与裂殖体注意与裂殖体鉴别鉴别) )。被寄生的红细胞胀大。被寄生的红细胞胀大。 实验室里长期用红内期原虫转种，不易见到配子实验室里长期用红内期原虫转种，不易见到配子体。体。 实验内容实验内容 （三）自已操作观察：（三）自已操作观察： 1.1.间日疟原虫间日疟原虫( (P.vP.v) )薄血片薄血片：油镜下观察环状体：油镜下观