实验动物学及其在肿瘤模型中的应用

1、内蒙古医科大学病理教研室内蒙古医科大学病理教研室贾永峰贾永峰实验动物学及其在肿瘤模型中的应用实验动物学及其在肿瘤模型中的应用 第一章实验动物学总论第一章实验动物学总论一、基本概念一、基本概念（一）实验动物（一）实验动物 是指经人工培育，对其携带微生物实行控制，遗传背景明确，来源清楚，可用于科学实验、药品、生物制品的生产和检定及其它科学实验的动物。三大特点： 1 遗传角度有要求，必须经人工培育，遗传背景明确，来源清楚。根据基因的纯合程度，实验动物分为： 近交系、突变系、杂交群、封闭群近交系、突变系、杂交群、封闭群。 2 对其携带的微生物、寄生虫实行人工控制。 3 用于科学实验，它是人类的替身，最

2、精密的仪器都无法替代。 （二）实验用动物（二）实验用动物 实验用动物是指能够用于科学实验的 所有动物. 实验用动物不仅包含了实验动物，而且还包括野生动物、经济动物和观赏动物。 由于野生动物和经济动物及家畜与实验动物相比其生物学特征、遗传背景、微生物控制状态等都有一定的不确定性，因此应用这些动物进行科学实验其结果往往出现较大差异，降低了实验结果的可信程度。 实验、野生、经济、观赏动物的区别动物 人工培育繁育遗传背景物种来源微生物、寄生虫用途实验动物严格人工明确明确人工控制科学实验野生动物未经自然不明确不明确自然选择保护或发展经济经济动物一定程度人工一般一般择优劣汰发展经济观赏动物一定程度人工一般

3、一般择优劣汰观赏宠物 （三）动物实验（三）动物实验 即科学合理的使用实验动物,有效地进行各类科学实验，通过科学的动物实验、研究、探讨生命现象本质以及各类相关学科领域疑难课题。（一）定义（一）定义 实验动物学实验动物学（Laboratory animal science）是研究）是研究实验动实验动 物物和和动物实验动物实验的科学。的科学。（二）研究范围（二）研究范围 1. 实验动物遗传育种学实验动物遗传育种学 （Laboratory animal genetic breeding science） 2. 实验动物微生物学和寄生虫学实验动物微生物学和寄生虫学 （Laboratory animal

4、microbiology and parasitology） 3. 实验动物环境生态学实验动物环境生态学 （Laboratory animal environmental ecology） 二二 实验动物学的定义和范围实验动物学的定义和范围4.实验动物营养学（实验动物营养学（Laboratoryanimalnutriology）5. 实验动物饲养管理（实验动物饲养管理（Laboratory animal husbandry）6. 实验动物医学（实验动物医学（Laboratory animal medicine）7. 比较医学（比较医学（Comparative medicine） 8. 动物实验

5、（动物实验（Animal experimental techniques） （一）实验动物是生命科学研究的支撑条件之一（一）实验动物是生命科学研究的支撑条件之一 生命科学实验研究的四个支撑条件生命科学实验研究的四个支撑条件-AEIRAEIR要素要素 A A：AnimalAnimal：实验动物；：实验动物； E E：EquipmentEquipment：仪器设备；：仪器设备； I I：InformationInformation：信息；：信息； R R：ReagentReagent：试剂；：试剂； （二）实验动物在生命科学研究中被广泛应用，很多重（二）实验动物在生命科学研究中被广泛应用，很多重

6、要的科研成果来源于实验动物要的科研成果来源于实验动物 （三）实验动物是人类的替身（三）实验动物是人类的替身. . 三三 实验动物的重要性实验动物的重要性（一）传统的动物学分类方法（一）传统的动物学分类方法 依据自然自然分类法，把整个生物，通常是用 界界(kingdom)、门门(phylum)、纲纲(class)、目目(order)、科科(family)、 属属(genus)、种种(species)等划分分类等级。 以大家鼠大家鼠为例，它属于： 脊椎动物门(phylum vertebrata) 哺乳动物纲(class mammalia) 啮齿目(order rodentea) 鼠科(family

7、 murinae) 大家鼠属(genus rattus) 大家鼠种(species rattus norvegicus) 学名：褐家鼠（大家鼠） (Rattus norvegicus) 多数情况下，根据不同目的进行种下 分类， 把实验动物划分为不同品系。四四 实验动物的分类实验动物的分类（二）按实际用途分类（二）按实际用途分类 1 1、实验动物、实验动物 2 2、经济动物（、经济动物（Economical animalsEconomical animals），或称家畜、家禽），或称家畜、家禽 3 3、野生动物（、野生动物（Wild animalsWild animals） 4 4、观赏动物（、

8、观赏动物（Exihibiting animalsExihibiting animals） （三）（三）按遗传学控制分类按遗传学控制分类 根据根据基因的纯合程度基因的纯合程度，把实验动物分成下列四类：，把实验动物分成下列四类： 1 1、近交系动物（、近交系动物（Inbred strain animalsInbred strain animals） 2 2、突变系动物（、突变系动物（Mutant strain animalsMutant strain animals） 3 3、杂交群动物（、杂交群动物（Hybrid colony animalsHybrid colony animals）（杂交一代

9、，）（杂交一代， F1F1代动物）代动物） 4 4、封闭群动物、封闭群动物(Closed colony animals(Closed colony animals)(远交系远交系)1 1、近交系动物（、近交系动物（Inbred strain animalsInbred strain animals） 又叫纯系动物。是采用同胞兄妹或亲子交配，连续繁殖又叫纯系动物。是采用同胞兄妹或亲子交配，连续繁殖2020代代以上所培育出来的遗传上达到高度一致的动物群。以上所培育出来的遗传上达到高度一致的动物群。( (近亲结婚近亲结婚) )基因纯合程度可达基因纯合程度可达99.8%。 主要指啮齿动物；可出现近亲交

10、配衰退。主要指啮齿动物；可出现近亲交配衰退。 亲子交配与兄妹交配不能混用。亲子交配与兄妹交配不能混用。 亲子交配时必须采用年轻的双亲同其子女交配。亲子交配时必须采用年轻的双亲同其子女交配。 较大动物纯种培育很难获得成功，因为世代间隔较长，费用较大，较大动物纯种培育很难获得成功，因为世代间隔较长，费用较大， 所以成功率低。所以成功率低。 禽类和兔的血缘关系达到禽类和兔的血缘关系达到80%以上（相当于兄妹交配四代）时，即可以上（相当于兄妹交配四代）时，即可 称为近交系。称为近交系。2 2、突变系动物（、突变系动物（Mutant strain animalsMutant strain animals

11、） 具有特殊突变基因的品系动物，正常染色体基因发生突具有特殊突变基因的品系动物，正常染色体基因发生突变，并具有各种遗传缺陷的动物。变，并具有各种遗传缺陷的动物。 在长期繁殖过程中，动物的子代突然发生变异，变异的基因位点又在长期繁殖过程中，动物的子代突然发生变异，变异的基因位点又可遗传下去，或者即使没有明确的基因位点，经淘汰和选育后，仍能维可遗传下去，或者即使没有明确的基因位点，经淘汰和选育后，仍能维持其稳定的遗传性状。这种变异并能继续保持遗传基因特性的品系动物，持其稳定的遗传性状。这种变异并能继续保持遗传基因特性的品系动物，称为突变系动物。如无胸腺裸鼠、无称为突变系动物。如无胸腺裸鼠、无K K

12、细胞、或无细胞、或无K K、无、无B B、无巨噬细胞、无巨噬细胞等裸鼠。用于免疫研究、移植实验等。等裸鼠。用于免疫研究、移植实验等。3 3、杂交群动物（、杂交群动物（Hybrid colony animalsHybrid colony animals） （杂交一代，F1代动物） 两个近交品系动物之间进行有计划交配所获得的第一代两个近交品系动物之间进行有计划交配所获得的第一代 动物。动物。 例如：例如：C57BL/6JC57BL/6JDBA/2B6D2F1 DBA/2B6D2F1 （B6B6为为 C57BL/6JC57BL/6J的缩写，的缩写，D2 D2 为为 DBA/2DBA/2的缩写。）的缩

13、写。）4 4、封闭群动物、封闭群动物(Closed colony animals)(Closed colony animals) 以非近亲交配方式进行繁殖生产的一个种群，在不从外部以非近亲交配方式进行繁殖生产的一个种群，在不从外部引入新的血缘条件，至少连续繁殖四代以上称封闭群。引入新的血缘条件，至少连续繁殖四代以上称封闭群。 封闭群又称远交群。封闭群又称远交群。（四）按微生物学控制分类四）按微生物学控制分类 根据实验动物所携带的根据实验动物所携带的微生物微生物情况，将实验动物分为不同情况，将实验动物分为不同的等级。的等级。 大多数国家通常将实验动物分为大多数国家通常将实验动物分为无菌动物无菌动

14、物、无特定致病原无特定致病原动物动物和和常规动物常规动物。 我国按微生物和寄生虫控制标准，将实验动物分为四个我国按微生物和寄生虫控制标准，将实验动物分为四个等级以满足不同的实验目的：等级以满足不同的实验目的：1 1、普通动物、普通动物2 2、清洁动物、清洁动物3 3、无特定致病原动物（、无特定致病原动物（SPFSPF）4 4、无菌动物、无菌动物* *不同级别的动物，规定所携带的微生物不同。不同级别的动物，规定所携带的微生物不同。 普通动物普通动物 普通动物普通动物（conventional animalconventional animal，CVCV），饲养在开放系统中，），饲养在开放系统中，

15、在微生物控制上要求最低的动物，要求不携带人畜共患病和动物烈性传在微生物控制上要求最低的动物，要求不携带人畜共患病和动物烈性传染病病原的动物，排除体外寄生虫和真菌（这类实验动物的用途决定了染病病原的动物，排除体外寄生虫和真菌（这类实验动物的用途决定了其面对的实验人员大都是学生，人员多，发生传染危害性大）。其面对的实验人员大都是学生，人员多，发生传染危害性大）。 由于普通动物微生物控制上要求最低，对实验结果的准确性、反应由于普通动物微生物控制上要求最低，对实验结果的准确性、反应性和重复性都较差，因此国际上普遍认为仅可作性和重复性都较差，因此国际上普遍认为仅可作教育示教之用教育示教之用或探索某或探索

16、某些科学研究的方法的些科学研究的方法的预实验预实验之用，不可作为科研、生产和检疫之用。之用，不可作为科研、生产和检疫之用。 1 清洁级动物清洁级动物 清洁动物清洁动物（clean animalclean animal，CLCL），除不带有普通动物），除不带有普通动物应排除的病原外，不携带对动物危害大和对科学研究干扰应排除的病原外，不携带对动物危害大和对科学研究干扰大的病原。清洁级动物种子必须来源于大的病原。清洁级动物种子必须来源于SPFSPF动物或无菌动物。动物或无菌动物。 普遍应用于短期或部分科研实验。在我国已广泛应用普遍应用于短期或部分科研实验。在我国已广泛应用于科研实验，是我国目前科研工

17、作主要要求的一类标准级于科研实验，是我国目前科研工作主要要求的一类标准级别的实验动物。但也是在我国现实情况下的一种过渡型动别的实验动物。但也是在我国现实情况下的一种过渡型动物级别物级别注注: :这类级别的大小鼠在国家标准中被取消了，现由这类级别的大小鼠在国家标准中被取消了，现由SPFSPF动动物代替）。物代替）。根据新修订的国家实验动物微生物、寄生虫质量标准，我国将实验大、小鼠分根据新修订的国家实验动物微生物、寄生虫质量标准，我国将实验大、小鼠分为三类即清洁级、无特定病原体级、无菌级（包括悉生动物）。其它品种实验为三类即清洁级、无特定病原体级、无菌级（包括悉生动物）。其它品种实验动物仍然分为普

18、通级、清洁级、无特定病原体级、无菌级（包括悉生动物）四动物仍然分为普通级、清洁级、无特定病原体级、无菌级（包括悉生动物）四级。级。 即从即从20022002年年5 5月月1 1日起取消了普通级大、小鼠标准。日起取消了普通级大、小鼠标准。2 无特定病原体动物无特定病原体动物 无特定病原体动物无特定病原体动物（specific pathogen free specific pathogen free animalanimal，SPFSPF），简称），简称SPFSPF动物，指动物体内无特定的微动物，指动物体内无特定的微生物和寄生虫存在，但带有非特定的微生物和寄生虫。生物和寄生虫存在，但带有非特定的微

19、生物和寄生虫。 除不具有普通动物、清洁级动物应该排除的病原外，除不具有普通动物、清洁级动物应该排除的病原外，不携带主要潜在感染或条件致病和对科学实验干扰大的不携带主要潜在感染或条件致病和对科学实验干扰大的病原。病原。3SPFSPF动物的应用：动物的应用： 1 1、国际上公认、国际上公认SPFSPF动物适用于动物适用于所有科研实验所有科研实验，是目前国，是目前国 际标准级别的实验动物。际标准级别的实验动物。 2 2、用于药物学、毒理学、肿瘤学、传染病学科的研究工作。、用于药物学、毒理学、肿瘤学、传染病学科的研究工作。 3 3、用于血清、各种疫苗的生产、产品质量检定和新药安全、用于血清、各种疫苗的

20、生产、产品质量检定和新药安全 性评价。性评价。 4 4、用于生物学鉴定，破伤风抗毒素、百日咳菌苗、狂犬病、用于生物学鉴定，破伤风抗毒素、百日咳菌苗、狂犬病 疫苗用疫苗用SPFSPF小鼠。口蹄疫疫苗、结核菌素用小鼠。口蹄疫疫苗、结核菌素用SPFSPF豚鼠。豚鼠。 使用使用SPFSPF动物有利于全世界科研人员在不同时间，空间动物有利于全世界科研人员在不同时间，空间 进行比较，有利于产品进入国际市场。进行比较，有利于产品进入国际市场。4无菌动物和悉生动物无菌动物和悉生动物 无菌动物无菌动物（germfree animalgermfree animal，GFGF），是指无可检出一切生），是指无可检出一

21、切生命体的动物，进一步是指用现有的检测技术在动物体内外的任命体的动物，进一步是指用现有的检测技术在动物体内外的任何部位，均检不出任何活的微生物和寄生虫的动物。包括病毒、何部位，均检不出任何活的微生物和寄生虫的动物。包括病毒、立克次体、细菌（包括螺旋体、支原体）、真菌和原虫。立克次体、细菌（包括螺旋体、支原体）、真菌和原虫。 无菌的概念是相对的，只是根据目前现有的科学知识和检无菌的概念是相对的，只是根据目前现有的科学知识和检测方法在一定时期内不能检出的病原体而已。测方法在一定时期内不能检出的病原体而已。 在特殊的饲养条件和环境中培育繁殖（隔离系统）。在特殊的饲养条件和环境中培育繁殖（隔离系统）。

22、无菌动物的无菌动物的生物学特点生物学特点一、在形态上的改变：一、在形态上的改变：消化系统：消化系统：最显著的是盲肠壁伸展变薄最显著的是盲肠壁伸展变薄 ，盲肠及内容物，盲肠及内容物的总重量为普通动物的的总重量为普通动物的5-10 5-10 倍。倍。血液循环系统血液循环系统：心脏相对变小，白细胞数少，且数量波：心脏相对变小，白细胞数少，且数量波动范围小，与无病原体入侵有关。动范围小，与无病原体入侵有关。免疫系统免疫系统：无菌动物几乎没有受过抗原刺激，其免疫机：无菌动物几乎没有受过抗原刺激，其免疫机能基本上处于原始状态。能基本上处于原始状态。二、在生理学上改变：二、在生理学上改变： 免疫功能：免疫功

23、能：免疫功能处于原始状态，应答速度慢，过敏免疫功能处于原始状态，应答速度慢，过敏反应，对异体移植物的排斥反应以及自身免疫现象消失或减反应，对异体移植物的排斥反应以及自身免疫现象消失或减弱。弱。 生长率：生长率：对生长率的改变因动物种属不同而异对生长率的改变因动物种属不同而异 ，无菌，无菌禽类生长率高于普通禽类；无菌大鼠、小鼠与普通大、小鼠禽类生长率高于普通禽类；无菌大鼠、小鼠与普通大、小鼠相当；豚鼠、兔相当；豚鼠、兔 则低于普通动物。则低于普通动物。 生殖：生殖：一般无菌杂食动物的繁殖性能高于普通动物，无一般无菌杂食动物的繁殖性能高于普通动物，无菌草食动物则低于普通动物。菌草食动物则低于普通动

24、物。 代谢、营养：代谢、营养：无菌动物的代谢周期比普通动物长，无菌无菌动物的代谢周期比普通动物长，无菌动物不能合成动物不能合成VBVB。 寿命寿命：无菌动物的寿命普遍长于普通动物：无菌动物的寿命普遍长于普通动物无菌动物的应用无菌动物的应用1 1、微生物研究、微生物研究某些疾病病原体的致病作用与机体本身内在关系某些疾病病原体的致病作用与机体本身内在关系的研究的研究: :如猫瘟病毒，正常猫易感，无菌猫不易感，说如猫瘟病毒，正常猫易感，无菌猫不易感，说明感染受肠道微生物的影响。明感染受肠道微生物的影响。病毒性疾病的研究；无菌动物是研究病毒病病毒性疾病的研究；无菌动物是研究病毒病, ,病毒病毒性质性质

25、, ,提纯病毒提纯病毒, ,安全疫苗和单一特异性抗血清的安全疫苗和单一特异性抗血清的有用工具。有用工具。a)a) 研究细菌间、细菌与宿主间的关系。研究细菌间、细菌与宿主间的关系。 2 2、免疫学研究、免疫学研究 免疫系统功能和机体受感染后感受性改变的研究。免疫系统功能和机体受感染后感受性改变的研究。a)a) 丙种球蛋白和特异性抗体的研究：一般无菌动物血丙种球蛋白和特异性抗体的研究：一般无菌动物血清中很少或完全缺乏丙种球蛋白和特异性抗体。清中很少或完全缺乏丙种球蛋白和特异性抗体。 3 3、老年病研究、老年病研究 无菌小鼠自然死亡期比普通小鼠长，研究表明无菌小鼠自然死亡期比普通小鼠长，研究表明微生

26、物因素与机体老年化有关。微生物因素与机体老年化有关。4 4、其他学科的研究、其他学科的研究 在放射医学中的应用：可以将由放射所引起的症状在放射医学中的应用：可以将由放射所引起的症状和感染所引起的症状区别开来。和感染所引起的症状区别开来。 在营养研究中的应用：无菌动物是研究营养的良好在营养研究中的应用：无菌动物是研究营养的良好模型。如：模型。如：VBVB。 悉生动物悉生动物（gnotobiotic animalgnotobiotic animal，GNGN）又称已知菌动物或已知菌丛动物，是在无菌动又称已知菌动物或已知菌丛动物，是在无菌动物体内植入已知微生物的动物，并且饲养在隔离系物体内植入已知微

27、生物的动物，并且饲养在隔离系统内。统内。根据植入无菌动物体内菌种数目的不同，可分根据植入无菌动物体内菌种数目的不同，可分为单菌、双菌、三菌和多菌动物。为单菌、双菌、三菌和多菌动物。悉生动物的特征：悉生动物的特征：动物与已知微生物的共生体。动物与已知微生物的共生体。在肠道内合成某种维生素。在肠道内合成某种维生素。与无菌动物比较，生活力较强，对疾病的抵与无菌动物比较，生活力较强，对疾病的抵抗力明显增强。抗力明显增强。悉生动物的应用悉生动物的应用: : 由于悉生动物可排除普通动物体内不明确的微生物对实由于悉生动物可排除普通动物体内不明确的微生物对实验结果的干扰，因而可作为研究微生物与宿主验结果的干扰

28、，因而可作为研究微生物与宿主, , 微生物之间微生物之间相互作用的动物模型。相互作用的动物模型。 微生物学的研究微生物学的研究: :可根据实验需要，在无菌动物体内有目的可根据实验需要，在无菌动物体内有目的地植入单一或多种微生物地植入单一或多种微生物, ,观察微生物对机体的作用观察微生物对机体的作用, ,了解微了解微生物和抗体之间的关系，以及微生物之间的相互关系。生物和抗体之间的关系，以及微生物之间的相互关系。 抗体制备研究：普通动物微生物种类多，抗原复杂，悉生动抗体制备研究：普通动物微生物种类多，抗原复杂，悉生动物可有目的植入单一抗原，可制备较纯的、效价高的抗体。物可有目的植入单一抗原，可制备

29、较纯的、效价高的抗体。 微生物和寄生虫相互关系的研究微生物和寄生虫相互关系的研究: :宿主消化道的微生态状况宿主消化道的微生态状况影响寄生虫的寄生。影响寄生虫的寄生。 其他方面的研究：如骨髓移植、肿瘤其他方面的研究：如骨髓移植、肿瘤 营养代谢等方面的研究营养代谢等方面的研究不同微生物控制的实验动物的比较不同微生物控制的实验动物的比较 种类种类 饲养环境饲养环境 概念概念 无菌动物无菌动物 隔离系统隔离系统 以封闭的无菌技术获得的以封闭的无菌技术获得的,用现有用现有 方法不方法不 能检出任何微生物和寄生能检出任何微生物和寄生 虫虫 的动物。的动物。悉生动物悉生动物 隔离系统隔离系统 确知所带的微

30、生物菌丛确知所带的微生物菌丛,经特殊饲经特殊饲 养的动物。养的动物。SPF动物动物 屏障系统屏障系统 无特定的微生物和寄生虫的动物。无特定的微生物和寄生虫的动物。清洁动物清洁动物 半屏障系统半屏障系统 不携带对动物危害大不携带对动物危害大,对科学研究对科学研究 干扰大的干扰大的 病原微生物。病原微生物。普通动物普通动物 开放系统开放系统 不携带人畜共患病和动物烈性传不携带人畜共患病和动物烈性传 染病原体的动物。染病原体的动物。第二章第二章清洁级实验动物房的使用清洁级实验动物房的使用 普通环境普通环境：该环境设施符合动物居住的：该环境设施符合动物居住的基本要求，不能完全控制传染因子，适基本要求，

31、不能完全控制传染因子，适用于饲育教学等用途的普通级实验动物。用于饲育教学等用途的普通级实验动物。 屏障环境屏障环境：该环境设施适用于饲育清洁：该环境设施适用于饲育清洁实验动物及无特定病原体实验动物，该实验动物及无特定病原体实验动物，该环境严格控制人员和物品的进出。环境严格控制人员和物品的进出。 隔离环境隔离环境：该环境设施采用无菌隔离装置以保：该环境设施采用无菌隔离装置以保存无菌或无外来污染动物，隔离装置内的空气、存无菌或无外来污染动物，隔离装置内的空气、饲料、水、垫料和设备均为无菌，动物和物料饲料、水、垫料和设备均为无菌，动物和物料的动态传递须经特殊的传递系统，该系统既能的动态传递须经特殊的

32、传递系统，该系统既能保证与环境的绝对隔离，又能满足转运动物时保证与环境的绝对隔离，又能满足转运动物时保持内环境一致。保持内环境一致。 该环境设施适用于饲育无特定病原体该环境设施适用于饲育无特定病原体（SPFSPF）、悉生（）、悉生（GnotobioticGnotobiotic）及无菌（）及无菌（Germ Germ FreeFree）实验动物。）实验动物。动物实验设施（设备）环境指标动物实验设施（设备）环境指标 项 目指 标小鼠、大鼠、豚鼠、地鼠犬、猴、猫、兔、小型猪鸡普通环境屏障环境隔离环境普 通环境屏障环境隔离环境隔离环境温度，192620251 6 2618221626日温差， 4 3 4

33、 3 3相对湿度， 4070换气次数，次/ h81010202050810102020502050气流速度，m/s 0.10.2压强梯度，Pa -2050100150 -2050100150100150空气洁净度，级 -10000 100 -10000 100 100落下菌数，个/皿 30 3无检出 30 3无检出无检出氨浓度，mg/m3 14噪声， dB 60照度，lx工 作 照度 150300动 物 照度 1520 100200 510昼夜明暗交替时间h 12/12或10/14品质控制实验动物的环境因素遗传因素人为因素：设施、饲养、管理、调教和实验处理等生物因素：各种病原体（细菌、病毒、寄

34、生虫）物理因素：温度湿度气流光照噪声笼具垫料饲养密度化学因素：饲料饮水空气臭气杀虫剂消毒剂有毒物质 清洁级动物引入动物实验室的规定1 1、 外购的大、小鼠品系，需查明该生产单位是外购的大、小鼠品系，需查明该生产单位是否具备该动物生产合格证，如不具备合法证明，否具备该动物生产合格证，如不具备合法证明，则立即退回。则立即退回。2 2、 动物运输盒箱包装是否符合该级别要求，如动物运输盒箱包装是否符合该级别要求，如发现有破漏等不符合该级别要求的情况，则立即发现有破漏等不符合该级别要求的情况，则立即退回。退回。 3 3、 如怀疑该品系动物不合要求或不健康，如怀疑该品系动物不合要求或不健康，则应立即向法定

35、检测机构要求鉴定，如确属不则应立即向法定检测机构要求鉴定，如确属不合格或以次充好，则将该批动物如数退回，并合格或以次充好，则将该批动物如数退回，并通报上级动物管理委员会严肃处理。通报上级动物管理委员会严肃处理。4 4、 在以上三点均符合要求的前提下，将动物在以上三点均符合要求的前提下，将动物连同包装盒一起送入缓冲间，不得在送入之前连同包装盒一起送入缓冲间，不得在送入之前将动物包装盒打开。将动物包装盒打开。 5 5、 动物连同合格的包装盒放入缓冲动物连同合格的包装盒放入缓冲间后，即喷洒过氧乙酸等空气消毒剂，间后，即喷洒过氧乙酸等空气消毒剂，开启紫外线消毒开启紫外线消毒2020分钟，然后打开实验分

36、钟，然后打开实验室内缓冲间的门，连盒进入实验室，取室内缓冲间的门，连盒进入实验室，取出动物入笼架。出动物入笼架。动物实验人员操作规定 实验中必需的器件、物品均需严格消毒后由实验中必需的器件、物品均需严格消毒后由传递仓（大物品由缓冲间）进入，并按照传传递仓（大物品由缓冲间）进入，并按照传递仓或缓冲间的进入程序操作，非实验所需递仓或缓冲间的进入程序操作，非实验所需的一切物品严禁带入实验室。的一切物品严禁带入实验室。传递仓（缓冲间）使用规定： 物品传递仓（缓冲间）是传送实验用品、各物品传递仓（缓冲间）是传送实验用品、各种灭菌物品及更替下的物品的专用通道，严种灭菌物品及更替下的物品的专用通道，严禁随意

37、开启，开而不关或改作其他用途。禁随意开启，开而不关或改作其他用途。传递仓（缓冲间）使用方法如下： 灭菌物品传入：开启外门灭菌物品传入：开启外门消毒液喷洒仓内消毒液喷洒仓内去除去除外包装（二层包布）外包装（二层包布）放入仓内放入仓内喷液喷液关闭外门关闭外门开紫外线灯开紫外线灯3030分钟分钟关紫外线灯关紫外线灯开启内门开启内门传传入实验室入实验室 物品传出：开紫外线灯物品传出：开紫外线灯3030分钟分钟关紫外线灯关紫外线灯开启开启内门内门放入送出物品放入送出物品关闭内门关闭内门开启外门开启外门搬出搬出物品物品喷液喷液关闭外门关闭外门开紫外线灯开紫外线灯实验人员进入动物房程序 洗手更衣室戴口罩、帽

38、子穿鞋套内走廊动物室缓冲间外走廊在进出时不能同时打开两扇门。 加水喂料加水喂料：饮水采用过滤水，饮水瓶应及时更换，：饮水采用过滤水，饮水瓶应及时更换，防止漏水、断水。定时消毒。饲料要保持新鲜，灭防止漏水、断水。定时消毒。饲料要保持新鲜，灭菌饲料贮藏不超过一周。菌饲料贮藏不超过一周。 更换笼具更换笼具：每天更换、清洗接粪盘，定期用消毒液：每天更换、清洗接粪盘，定期用消毒液擦拭笼架。擦拭笼架。 动物的排泄物和废物由实验者清除汇总，实验结束动物的排泄物和废物由实验者清除汇总，实验结束后，通过缓冲室带出，交动物实验管理人员处理。后，通过缓冲室带出，交动物实验管理人员处理。 非实验人员不得擅自进入动物实

39、验室。非实验人员不得擅自进入动物实验室。实验后，不必要的仪器、物品、样本或死亡实验后，不必要的仪器、物品、样本或死亡的动物，应在离开实验室时带出（通过缓冲的动物，应在离开实验室时带出（通过缓冲室随身带出），死亡的动物应交实验室管理室随身带出），死亡的动物应交实验室管理人员统一处理。人员统一处理。高压饲料的准备1 1、 饲料需用可高压灭菌的耐高压饲料。饲料需用可高压灭菌的耐高压饲料。 2 2、 检查饲料质量，如发现饲料有霉变、结检查饲料质量，如发现饲料有霉变、结块及虫蛀的情况，不得使用。块及虫蛀的情况，不得使用。 3 3、将饲料装入牛皮纸袋内，外套布袋，扎紧、将饲料装入牛皮纸袋内，外套布袋，扎紧

40、袋口，放高压消毒锅中消毒（袋口，放高压消毒锅中消毒（120120、2020分分钟）。钟）。 4 4、将消毒过的饲料用脱皮法进入传递仓和实、将消毒过的饲料用脱皮法进入传递仓和实验室。验室。实验室环境主要参数的例行观察记录实验室环境主要参数的例行观察记录 1 1、每天由值班人员观察并记录动物实验室的、每天由值班人员观察并记录动物实验室的温度和相对湿度。温度和相对湿度。 2 2、大、小鼠要求室内温度保持在、大、小鼠要求室内温度保持在20202424之之间。间。 3 3、发现温度过高或过低时及时调整。、发现温度过高或过低时及时调整。动物健康状况的间接观察和发现异常情况的处置规定 1、 动物在实验中如发

41、现有异常情况应及时报告实验室负责人。 2、 对动物不明原因的死亡，须作必要的尸体解剖，查明原因。 3、 如发现尚未进行实验的动物表现异常，应及时隔离观察，并追查动物来源。 4、 如动物经检验后，发现有烈性传染病的感染，应立即隔离处死，动物实验室需严格消毒。动物废物处理 1 1、 动物的废物应统一置于规定地方倾倒，并动物的废物应统一置于规定地方倾倒，并有专人负责处理。有专人负责处理。 2 2、 废物应与动物尸体分开处理。废物应与动物尸体分开处理。 3 3、 动物尸体一定要焚烧，其他废物可作焚烧、动物尸体一定要焚烧，其他废物可作焚烧、发酵、无害化处理后丢弃或其他相应办法处理，发酵、无害化处理后丢弃

42、或其他相应办法处理，以不污染环境为原则。以不污染环境为原则。 4 4、 对于有特殊试验的实验动物排泄物，要有对于有特殊试验的实验动物排泄物，要有专人负责按规定处理。专人负责按规定处理。实验室的例行清洁卫生和例行消毒规定实验室的例行清洁卫生和例行消毒规定 1 1、 实验室内环境需符合该动物级别的要求。外环境实验室内环境需符合该动物级别的要求。外环境需整洁，及时处理污迹。需整洁，及时处理污迹。 2 2、 实验结束后作一次清洁消毒（用福尔马林与高锰实验结束后作一次清洁消毒（用福尔马林与高锰酸钾熏蒸），再次实验前作一次加强消毒。酸钾熏蒸），再次实验前作一次加强消毒。 3 3、 对外环境每周进行一次消毒

43、性大扫除。对外环境每周进行一次消毒性大扫除。 4 4、 常用消毒剂应每周更换，以保证其消毒性能可靠。常用消毒剂应每周更换，以保证其消毒性能可靠。 5 5、 消毒前后的物品应严格分开保存。消毒前后的物品应严格分开保存。 6 6、 每隔一定时间更换消毒品种，以防抗药性。每隔一定时间更换消毒品种，以防抗药性。第三章第三章常用实验动物常用实验动物第一节小鼠小鼠mouse,Mus muscculus哺乳纲、啮齿目、鼠科、鼠属、小家鼠种。一、生物学特性一、生物学特性 一般特性一般特性 1.1.对外界环境反应敏感，适应性差，强光或对外界环境反应敏感，适应性差，强光或噪声刺激时，可能导致哺乳母鼠神经紊乱，噪声

44、刺激时，可能导致哺乳母鼠神经紊乱，发生食仔现象。温度过高或多低时，生殖能发生食仔现象。温度过高或多低时，生殖能力下降，严重时会发生死亡；力下降，严重时会发生死亡； 2.2.对多种毒素和病原体易感，百万分之一的对多种毒素和病原体易感，百万分之一的破伤风毒素能使小鼠死亡；破伤风毒素能使小鼠死亡； 3.3.对致癌物敏感，自发性肿瘤多。对致癌物敏感，自发性肿瘤多。解剖学特点解剖学特点 1 1小鼠下颌骨的喙状突较小，髁状突小鼠下颌骨的喙状突较小，髁状突发达，运用下颌骨形态的分析技术，可发达，运用下颌骨形态的分析技术，可进行近交系小鼠遗传监测；进行近交系小鼠遗传监测； 2 2小鼠无汗腺小鼠无汗腺 ； 3

45、3淋巴系统发达，外界刺激可使淋巴淋巴系统发达，外界刺激可使淋巴系统增生，因此易患淋巴系统疾病。系统增生，因此易患淋巴系统疾病。生理学特点生理学特点 1.1.小鼠成熟早，繁殖力强，适配鼠龄为出生小鼠成熟早，繁殖力强，适配鼠龄为出生后后60906090天；天； 2.2.交配后交配后10121012小时，雌鼠在阴道口形成一个小时，雌鼠在阴道口形成一个白色的阴道栓，这是受孕的标志；白色的阴道栓，这是受孕的标志； 3.3.小鼠生长发育快慢与品系、营养、环境、小鼠生长发育快慢与品系、营养、环境、带仔数的多少、生产胎次有密切关系；带仔数的多少、生产胎次有密切关系； 4.4.生育期为一年，寿命达生育期为一年，

46、寿命达2 23 3年；年； 5.5.染色体为染色体为2020对。对。二、常用品种品系1 1、BALB/c BALB/c 1913 1913年年BaggBagg从美国俄亥俄商人处购得，从美国俄亥俄商人处购得， 19231923年由年由MacDowell MacDowell 近亲交配，近亲交配，19321932年年 SnellSnell得到第得到第2626代，命名为代，命名为BALB/cBALB/c。其后广。其后广泛传播于世界各地，形成了许多亚系，如泛传播于世界各地，形成了许多亚系，如BALB/cBALB/cAnNAnN, BALB/cJ, BALB/cJ、 BALB/cCdBALB/cCd等。等

47、。19197979年年从美国从美国NIHNIH引入中国。引入中国。（一）近交系小鼠（一）近交系小鼠v特性：特性： 白化，红眼。白化，红眼。 A/A b/b c/c D/D A/A b/b c/c D/D 常用于单克隆抗体研究，生产免疫脾细胞常用于单克隆抗体研究，生产免疫脾细胞和单抗腹水。和单抗腹水。 6 6月龄前多出现免疫球蛋白过多症，主要是月龄前多出现免疫球蛋白过多症，主要是IgA,IgGIgA,IgG。 有一定数量的肺、卵巢、肾肿瘤和白血病有一定数量的肺、卵巢、肾肿瘤和白血病发生。发生。 对放射线照射极为敏感；对放射线照射极为敏感； 与其它品系相比血压最高，常有自发高与其它品系相比血压最高

48、，常有自发高血压症。血压症。 老年鼠多有心脏损害，并伴有动脉硬化。老年鼠多有心脏损害，并伴有动脉硬化。 几乎全部几乎全部2020月龄以上雄性小鼠脾脏淀粉月龄以上雄性小鼠脾脏淀粉样变样变2 2、C C5757BL/6BL/6 1921 1921年年LittleLittle从从LathropLathrop维持的原种中维持的原种中选育出选育出5252号公鼠和号公鼠和5757号母鼠，后代经近亲繁号母鼠，后代经近亲繁殖得到品系殖得到品系C57C57。其中黑色为。其中黑色为C C5757BLBL，棕色为，棕色为C C5757BRBR。19371937年从年从C C5757BLBL系中分离出系中分离出C C

49、5757BL/6BL/6和和C C5757BL/10BL/10两个亚系。两个亚系。19751975年从年从日本国立肿瘤研日本国立肿瘤研究所引入中国。究所引入中国。常用为C57BL/6Jv特性：特性： 黑色黑色.a/a B/B C/C D/D.a/a B/B C/C D/D 是继人类之后第二个开始基因测序的哺是继人类之后第二个开始基因测序的哺乳动物，广泛用于遗传工程、免疫学、乳动物，广泛用于遗传工程、免疫学、肿瘤学、生理学研究。肿瘤学、生理学研究。 自发肿瘤发生率低，化学物质难以诱发自发肿瘤发生率低，化学物质难以诱发乳腺和卵巢肿瘤。乳腺和卵巢肿瘤。 IgG IgG 、IgMIgM含量较高。细胞免

50、疫力也较高，含量较高。细胞免疫力也较高，随年龄下降较少。补体活性高。这些可随年龄下降较少。补体活性高。这些可能是自发肿瘤少的原因。能是自发肿瘤少的原因。 对食源性肥胖、对食源性肥胖、2 2型糖尿病、动脉硬化高型糖尿病、动脉硬化高度敏感度敏感3 3、C C3 3H /He H /He 1920 1920年年StrongStrong用白化雌鼠（和用白化雌鼠（和BALB/cBALB/c同源）与乳腺肿瘤高发同源）与乳腺肿瘤高发DBADBA系雄鼠系雄鼠杂交，再经近交培育获得近交系，杂交，再经近交培育获得近交系，19301930年年引到引到AndervontAndervont处，经近交处，经近交3535代

51、后，于代后，于19411941年引到年引到Heston(He)Heston(He)处。处。后引到世界各地形成后引到世界各地形成C C3 3H /HeN,CH /HeN,C3 3H /HeJH /HeJ等。等。19197 75 5年从美国引入中国。年从美国引入中国。v特性：特性： 野生鼠色。野生鼠色。A/A B/B C/C D/DA/A B/B C/C D/D 乳腺癌发病率极高，乳腺癌发病率极高，6-106-10月龄雌鼠乳腺月龄雌鼠乳腺癌自然发生率达癌自然发生率达85-100%85-100%；原因是携带；原因是携带MMTV MMTV （mouse mammary tumor virusmouse

52、 mammary tumor virus），），通过乳汁传播（不通过胎盘传播）。通过乳汁传播（不通过胎盘传播）。 不易诱发动脉粥样硬化不易诱发动脉粥样硬化 补体活性高，干扰素产量低，易产生免补体活性高，干扰素产量低，易产生免疫耐受。疫耐受。 红细胞、白细胞少。红细胞、白细胞少。 氯仿易诱发雄鼠高致死率肝癌氯仿易诱发雄鼠高致死率肝癌 对狂犬病病毒敏感。对炭疽杆菌有抵抗对狂犬病病毒敏感。对炭疽杆菌有抵抗力。对沙门力。对沙门氏氏杆菌有抵抗力（对细菌脂杆菌有抵抗力（对细菌脂多糖反应性不强）。多糖反应性不强）。 携带视网膜退化基因携带视网膜退化基因(rd)(rd)。 广泛用于免疫学、肿瘤学、生理学、核广

53、泛用于免疫学、肿瘤学、生理学、核医学研究。医学研究。 4 4、DBA DBA Little Little于于19091909年在毛色分离实验中年在毛色分离实验中建立，为最古老的近交系小鼠。建立，为最古老的近交系小鼠。19291929年在年在亚系间进行杂交，建立了两个亚系：亚系间进行杂交，建立了两个亚系：DBA/1DBA/1、DBA/2DBA/2。DBA/1DBA/1于于19771977年引入我国，年引入我国，DBA/2DBA/2系于系于19851985年引入我国。年引入我国。vDBA/1DBA/1系主要特征：系主要特征： 淡褐色，淡褐色， a/a b/b C/C d/da/a b/b C/C

54、d/d 抗抗DBA/2DBA/2系所生长的瘤株，但黑色素瘤系所生长的瘤株，但黑色素瘤S-S-9191在两亚系小鼠中均能生长在两亚系小鼠中均能生长 老龄雌鼠乳腺癌发生率高，一年以上雌老龄雌鼠乳腺癌发生率高，一年以上雌鼠乳腺癌发生率可达鼠乳腺癌发生率可达75%75% 几乎全部老年雄鼠心脏都有钙沉积几乎全部老年雄鼠心脏都有钙沉积 对结核杆菌、鼠伤寒沙门氏菌敏感，对对结核杆菌、鼠伤寒沙门氏菌敏感，对疟原虫感染有抵抗力疟原虫感染有抵抗力vDBA/2DBA/2系主要特征：系主要特征： 淡褐色，淡褐色， a/a b/b C/C d/da/a b/b C/C d/d 抗抗DBA/1DBA/1系所生长的瘤株，但

55、黑色素瘤系所生长的瘤株，但黑色素瘤S-91S-91在两在两亚系小鼠中均能生长亚系小鼠中均能生长 乳腺癌发生率较高，繁殖鼠雌鼠乳腺癌发生率较高，繁殖鼠雌鼠66%66%，成熟雄鼠，成熟雄鼠30%30% 有一定比例的淋巴白血病发病率，雌有一定比例的淋巴白血病发病率，雌6%6%，雄，雄8%8% 血清免疫球蛋白含量低，仅为血清免疫球蛋白含量低，仅为BLAB/cBLAB/c，C57BL/6C57BL/6的一半。缺补体的一半。缺补体C C5 5。 老年鼠多发虹膜增厚、眼内压升高，适宜作青光老年鼠多发虹膜增厚、眼内压升高，适宜作青光眼模型。眼模型。 对音响刺激敏感（与对音响刺激敏感（与C C5757BL/6B

56、L/6相反）相反），3636日龄小日龄小鼠听源性癫痫发作为鼠听源性癫痫发作为100%100%，5555日龄后为日龄后为5%5% 对酒精和吗啡高度耐受性很差（与对酒精和吗啡高度耐受性很差（与C C5757BL/6BL/6相反）相反）血压较低，红细胞总数高。血压较低，红细胞总数高。 低发动脉粥样硬化（与低发动脉粥样硬化（与C C5757BL/6BL/6相反）相反） 对鼠伤寒沙门氏菌有抵抗力（与对鼠伤寒沙门氏菌有抵抗力（与DBA/1DBA/1相反），相反），对疟原虫感染有抵抗力。对疟原虫感染有抵抗力。 D2B6F1D2B6F1的原核受精卵常用作显微注射生产转基的原核受精卵常用作显微注射生产转基因动物

57、因动物5 5、AKRAKR系系 19281928年年FurthFurth从宾夕法尼亚州的一位商从宾夕法尼亚州的一位商人处获得种鼠，由洛克菲勒大学以随机交配人处获得种鼠，由洛克菲勒大学以随机交配维持，之后维持，之后RhoadesRhoades和和LynchLynch相继育种，之后相继育种，之后引入各地分别育成引入各地分别育成AKR/Lw, AKR/J, AKR/CumAKR/Lw, AKR/J, AKR/Cum等亚系。等亚系。v特性：特性： 白化，红眼白化，红眼. a/a B/B c/c D/D. a/a B/B c/c D/D 淋巴细胞白血病淋巴细胞白血病6-86-8月龄自发率高达月龄自发率高

58、达70-70-9090 缺乏补体缺乏补体C5C5，容易诱发免疫耐受性，容易诱发免疫耐受性， 对百日咳组织胺易感因子敏感，对百日咳组织胺易感因子敏感， 血液过氧化氢酶活性高，血液过氧化氢酶活性高， 肾上腺类固醇脂类浓度低。肾上腺类固醇脂类浓度低。 在开放系统中繁殖率低，较难饲养，在开放系统中繁殖率低，较难饲养，6 6、津白、津白1 1号（号（TATA1 1）和（）和（TATA2 2） 天津医学院由天津医学院由KMKM小鼠近交繁育而来。小鼠近交繁育而来。19551955年培育年培育TATA1 1，19631963年培育年培育TATA2 2。v 特性：特性： 白化红眼白化红眼. . TATA1 1(

59、a/a b/b c/c D/D) (a/a b/b c/c D/D) 为低癌系，为低癌系， TATA2 2 (a/a B/B c/c D/D)(a/a B/B c/c D/D)为自发高乳腺癌系，为自发高乳腺癌系，主主要用于乳腺肿瘤的研究。要用于乳腺肿瘤的研究。我国培育的近交系我国培育的近交系7 7、615 615 1961 1961年中国医学科学院血液病研究所年中国医学科学院血液病研究所用用KMKM小鼠雌鼠与苏联引进的小鼠雌鼠与苏联引进的C C5757BLBL雄鼠杂交，雄鼠杂交，尔后又作近交培育而成。尔后又作近交培育而成。 v特性：特性：深褐色深褐色.a/a b/b C/C D/D.a/a b

60、/b C/C D/D肿瘤发生率为肿瘤发生率为10-2010-20( (雌鼠乳腺癌，雄鼠雌鼠乳腺癌，雄鼠肺癌肺癌) )。对津。对津638638白血病病毒敏感。白血病病毒敏感。主要用主要用于白血病和抗癌药物筛选。于白血病和抗癌药物筛选。1 1、KMKM小鼠小鼠 19261926年在美国年在美国RockfellerRockfeller研究所从瑞士引研究所从瑞士引入白化小鼠培育成瑞士种小鼠。入白化小鼠培育成瑞士种小鼠。19461946年我国从印年我国从印度度HaffineHaffine研究所引入昆明，研究所引入昆明，19521952年从昆明引入年从昆明引入北京生物制品研究所，北京生物制品研究所，195