实验5病原性球菌

1、实实 验验 五五 病原性球菌病原性球菌实验目的：实验目的： 熟悉几种常见病原性球菌的形态染色特点。熟悉几种常见病原性球菌的形态染色特点。 掌握血浆凝固酶试验的原理、方法、意义。掌握血浆凝固酶试验的原理、方法、意义。 掌握抗掌握抗“0”0”试验的原理、方法及临床意义。试验的原理、方法及临床意义。 一、常见病原性球菌形态染色的观察（示教）一、常见病原性球菌形态染色的观察（示教）（细菌的形态；革兰染色性；排列方式）二、血浆凝固酶试验（示教二、血浆凝固酶试验（示教) )三、抗三、抗“0”0”试验试验( (操作操作) ) 球菌革兰染色标本片 葡萄球菌培养物、兔血浆、生理盐水、载玻片、接种环、酒精灯、火柴

2、、蜡笔 待测病人血清、抗“O”试剂（溶血素“O”、ASO胶乳）、反应板、搅拌棒一、病原性球菌形态特征的观察一、病原性球菌形态特征的观察v又称为化脓性球菌v根据革兰染色性的不同可分成革兰阳性： 葡萄球菌 链球菌 肺炎链球菌革兰阴性： 脑膜炎奈瑟菌 淋病奈瑟菌革兰染色阳性球菌，革兰染色阳性球菌，葡萄串状排列葡萄串状排列无鞭毛，无鞭毛，不形成芽胞，不形成芽胞，右上图：革兰染色右上图：革兰染色 右下图：扫描电镜右下图：扫描电镜形态与染色形态与染色葡萄球菌葡萄球菌 革兰染色阳性球菌，革兰染色阳性球菌，呈链状排列呈链状排列 无鞭毛，无鞭毛， 不形成芽胞，不形成芽胞， 右上图：革兰染色右上图：革兰染色 右下

3、图：扫描电镜右下图：扫描电镜形态与染色形态与染色链球菌链球菌 形态与染色形态与染色肺炎链球菌肺炎链球菌 革兰染色阳性球革兰染色阳性球菌，菌体呈矛头菌，菌体呈矛头状，成双排列，状，成双排列，宽端相对，尖端宽端相对，尖端向外。向外。无鞭毛无鞭毛不形成芽胞不形成芽胞有毒株有荚膜有毒株有荚膜 革兰染色革兰染色阴阴性双球菌性双球菌 呈肾形，成双排列呈肾形，成双排列 感染急性期感染急性期 位于中性粒细胞内位于中性粒细胞内 形态与染色形态与染色奈瑟菌属奈瑟菌属二、二、血浆凝固酶实验血浆凝固酶实验 血浆血浆纤维蛋白原纤维蛋白原纤维蛋白纤维蛋白 血浆凝固酶血浆凝固酶附着于细菌表面附着于细菌表面玻片上形成凝块（玻

4、片上形成凝块（结合型结合型）试管中血浆发生凝固（试管中血浆发生凝固（游离型）游离型）致病性葡萄球菌致病性葡萄球菌原理原理 （1）取洁净玻片一张，玻片分为左右两区并做好标记，于一端加生理盐水一滴，另一端加兔血浆一滴。 （2）用接种环取金黄色葡萄球菌苔一环，在玻片一端生理盐水中研磨混匀，接种环灭菌后再取金黄色葡萄球菌苔一环，在另一端兔血浆中研磨均匀。 （3）立即观察结果。血浆凝固酶实验方法（玻片法）血浆凝固酶实验方法（玻片法）结果：细菌在生理盐水无凝集而在血浆中聚集成团块或无法混匀，为血浆凝固酶试验阳性 血浆凝固酶实验注意事项血浆凝固酶实验注意事项v血浆多挑几环（一滴的量）；菌落不能太多。血浆多挑

5、几环（一滴的量）；菌落不能太多。v要做阴性对照，有一部分葡萄球菌有自凝现象。要做阴性对照，有一部分葡萄球菌有自凝现象。v最好用抗凝的兔血浆最好用抗凝的兔血浆 ，兔血浆凝块结实，凝固速度快兔血浆凝块结实，凝固速度快 ；兔血浆应放兔血浆应放4冰箱保存。冰箱保存。意义意义：血浆凝固酶试验是鉴别葡萄球菌有无致病性：血浆凝固酶试验是鉴别葡萄球菌有无致病性的重要指标，致病性葡萄球菌为阳性。的重要指标，致病性葡萄球菌为阳性。 链球菌溶血素链球菌溶血素链球菌溶血素链球菌溶血素O（SLO）链球菌溶血素链球菌溶血素S（SLS）抗原性强，产生抗抗原性强，产生抗O抗体，该抗体在感染链球菌抗体，该抗体在感染链球菌2-3

6、周周 至病后至病后1年内可检出；年内可检出； 正常参考值：成人正常参考值：成人200 U200IU/ml ASO200IU/ml 阳性阳性 无凝集出现无凝集出现 ASO200IU/ml ASO200IU/ml 阴性阴性注意事项：注意事项： 1.1.试剂使用前先预置达室温，且要摇匀。试剂使用前先预置达室温，且要摇匀。 2.2.加试剂时，要保证液滴大小一致。加试剂时，要保证液滴大小一致。 3.3.试剂盒贮存于试剂盒贮存于2-102-10，切勿冰冻。，切勿冰冻。抗抗“O”试验意义试验意义1.1.抗体滴度抗体滴度 200IU/ml200IU/ml以上，新近有可能反以上，新近有可能反复感染过乙型溶血型链球菌复感染过乙型溶血型链球菌2.2.作为风湿活动期、风湿性关节炎、风心病、作为风湿活动期、风湿性关节炎、风心病、急性肾小球肾炎的辅助诊断。急性肾小球肾炎的辅助