乙型肝炎病毒

1、乙型肝炎病毒乙型肝炎病毒小组成员：张迪，刘爽，梁叶星， 王孝荣，范定涛，倪彩霞 乙型病毒性肝炎（乙型病毒性肝炎（hepatitis B, HBhepatitis B, HB）是由乙）是由乙型肝炎病毒（型肝炎病毒（hepatitis B virus, HBVhepatitis B virus, HBV）引起的。）引起的。HBVHBV的感染不仅可以导致急、慢性病毒性肝炎和的感染不仅可以导致急、慢性病毒性肝炎和重性肝炎，而且还与肝硬化（重性肝炎，而且还与肝硬化（liver cirrhosis, liver cirrhosis, LCLC）和肝细胞癌）和肝细胞癌( (hepatocellularhep

2、atocellular carcinoma, carcinoma, HCC)HCC)的发生、发展密切相关。的发生、发展密切相关。2020的慢性乙肝患的慢性乙肝患者将发展成为肝硬化，者将发展成为肝硬化，HBVHBV慢性感染的人罹患慢性感染的人罹患HCCHCC的危险性是正常人的的危险性是正常人的100 100 倍。倍。致病性致病性检测检测技术技术诊断与诊断与防治防治治疗治疗简介简介HBVHBV感染呈世界性分布。感染呈世界性分布。西欧、北美、澳大利亚为西欧、北美、澳大利亚为低流行区低流行区（乙性肝（乙性肝炎病毒表面抗原携带率在炎病毒表面抗原携带率在2 2以下）；以下）；东欧、日本、南美、北美和地中海

3、国家为东欧、日本、南美、北美和地中海国家为中中流行区流行区；中国、东南亚与南非为中国、东南亚与南非为高流行区高流行区（乙性肝炎乙性肝炎病毒表面抗原病毒表面抗原携带率携带率1010左右）。左右）。 全世界共有约全世界共有约3.53.5亿人为亿人为HBsAgHBsAg慢性携带慢性携带者，其中者，其中3/4 3/4 在亚洲。在亚洲。 HBV HBV感染导致全球每年感染导致全球每年5050120 120 万人死亡，万人死亡，其中死于其中死于HCCHCC的约占的约占32 32 万。万。 我国是我国是HBVHBV感染的高发区，约感染的高发区，约6060的人群的人群感染过感染过HBVHBV，1010的人群为

4、携带者，多达的人群为携带者，多达1.2 1.2 亿。现有乙型肝炎患者约为亿。现有乙型肝炎患者约为1200 1200 万，年发病万，年发病率为率为158/10 158/10 万。万。 19071907年，年，DaneDane在在“澳抗澳抗”阳性者血清标本的阳性者血清标本的电子显微镜观察中，发现了完整的血清型肝炎病电子显微镜观察中，发现了完整的血清型肝炎病毒体，即毒体，即DaneDane颗粒，亦称乙型肝炎病毒颗粒，亦称乙型肝炎病毒（hepatitis B virushepatitis B virus，HBVHBV）。）。 乙肝病毒属于嗜肝乙肝病毒属于嗜肝DNADNA病毒科，是一个带有包病毒科，是一

5、个带有包膜的膜的DNADNA病毒，完整的病毒颗粒大小约病毒，完整的病毒颗粒大小约42nm42nm，具，具有独特的基因组结构和生物学特性。有独特的基因组结构和生物学特性。 检测检测技术技术诊断与诊断与防治防治治疗治疗简介简介致病性致病性检测检测技术技术诊断与诊断与防治防治治疗治疗简介简介致病性致病性检测检测技术技术诊断与诊断与防治防治治疗治疗简介简介致病性致病性检测检测技术技术诊断与诊断与防治防治治疗治疗简介简介致病性致病性乙肝病毒的乙肝病毒的理化特性及抵抗力理化特性及抵抗力检测检测技术技术诊断与诊断与防治防治治疗治疗简介简介致病性致病性 HBV对理化因素有较强的抵抗力。病毒在对理化因素有较强的

6、抵抗力。病毒在30 32 可存活至少可存活至少6个月，在个月，在 -20 可存活可存活15年。病年。病毒浓度高时，毒浓度高时，60 加热加热10h,或或98 加热加热1min,以及以及乙醚或乙醚或pH2.4处理均不能有效灭活乙肝病毒，能够处理均不能有效灭活乙肝病毒，能够灭活灭活HBV的常用方法和条件包括的常用方法和条件包括121高压灭菌高压灭菌20min, 160 干烤干烤1h，100直接煮沸直接煮沸2min,以及以及0.5%过氧化酸，过氧化酸，3%漂白粉溶液，漂白粉溶液，5%次氯酸钠和环氧乙次氯酸钠和环氧乙烷等的直接处理。烷等的直接处理。 HBV HBV基因组结构特殊，成不完全闭合的双基因组

7、结构特殊，成不完全闭合的双链形式，负（链形式，负（- -）链为全长基因，约含）链为全长基因，约含32003200个个核苷酸，而正（核苷酸，而正（+ +）链是负链长度的）链是负链长度的202080%80%，病毒颗粒内含有病毒颗粒内含有DNADNA聚合酶。在所有已知可感聚合酶。在所有已知可感染人体而且具有独立复制能力的双链染人体而且具有独立复制能力的双链DNADNA病毒病毒中，中，HBVHBV基因组是最小但又是最高效的。它具基因组是最小但又是最高效的。它具有以下有以下4 4个鲜明的特点：个鲜明的特点： （1 1）不完全双链环状结构；）不完全双链环状结构； （2 2）利用重叠的开放读码框（）利用重叠

8、的开放读码框（open reading open reading frame ORFframe ORF）编码多个蛋白质；）编码多个蛋白质； （3 3）所有调控序列均位于蛋白质编码区内；）所有调控序列均位于蛋白质编码区内； （4 4）基因序列具有多变性。）基因序列具有多变性。 检测检测技术技术诊断与诊断与防治防治治疗治疗简介简介致病性致病性转录转录复制复制循环循环修复修复侵入侵入释放释放HBVHBV的复制的复制过程过程检测检测技术技术诊断与诊断与防治防治治疗治疗简介简介致病性致病性检测检测技术技术诊断与诊断与防治防治治疗治疗简介简介致病性致病性HBsAgHBxAgHBcAgHBeAg检测检测技术

9、技术诊断与诊断与防治防治治疗治疗简介简介致病性致病性 HBsAg是糖蛋白，具有抗原性，能刺激机体是糖蛋白，具有抗原性，能刺激机体产生保护性抗体。存在于三种病毒颗粒的表面。产生保护性抗体。存在于三种病毒颗粒的表面。可作为可作为HBV感染的主要标志。感染的主要标志。 具有不同的亚型。各亚型均有共同抗原决定具有不同的亚型。各亚型均有共同抗原决定簇簇a和两组互相排斥的亚型决定簇和两组互相排斥的亚型决定簇d/y和和w/r，按不，按不同组合形式，构成同组合形式，构成HBsAg 4个亚型，即个亚型，即adr、adw、ayr、ayw。 亚型的分布有明显的地域差异，并与种族有亚型的分布有明显的地域差异，并与种族

10、有关。关。检测检测技术技术诊断与诊断与防治防治治疗治疗简介简介致病性致病性 HBcAgHBcAg是磷酸化蛋白质，是内衣壳成分，是磷酸化蛋白质，是内衣壳成分，存在于存在于DaneDane颗粒核心部位的表面。其外表被颗粒核心部位的表面。其外表被HBsAgHBsAg覆盖，血清中不易检出。覆盖，血清中不易检出。 HBcAgHBcAg在感染在感染的肝细胞表面表达，是杀伤性的肝细胞表面表达，是杀伤性CD8CD8+ +T T细胞识别细胞识别并清除并清除HBVHBV感染细胞的靶抗原之一。感染细胞的靶抗原之一。 HBcAgHBcAg抗抗原性强，能刺激机体产生原性强，能刺激机体产生HBcHBc。抗。抗HBcHBc

11、 IgGIgG在血在血清中持续时间较长，而抗清中持续时间较长，而抗HBcHBc IgMIgM则提示则提示HBVHBV处处于复制状态。于复制状态。检测检测技术技术诊断与诊断与防治防治治疗治疗简介简介致病性致病性 HBeAgHBeAg，e e是抗原决定簇的名称，为蛋白质，是抗原决定簇的名称，为蛋白质，由由PreCPreC和和C C基因编码。在内质网腔，该蛋白质经基因编码。在内质网腔，该蛋白质经过处理后分泌至细胞外，成为过处理后分泌至细胞外，成为HBeAgHBeAg。 HBeAgHBeAg游游离于血清中，因其消长与病毒体及离于血清中，因其消长与病毒体及DNADNA聚合酶的聚合酶的消长一致，故消长一致

12、，故HBeAgHBeAg作为体内有作为体内有HBVHBV复制及血清复制及血清具有强感染性的指标。具有强感染性的指标。 检测检测技术技术诊断与诊断与防治防治治疗治疗简介简介致病性致病性 HBxAgHBxAg为反式激活蛋白，能广泛激活病毒为反式激活蛋白，能广泛激活病毒和细胞的启动子，促进病毒复制或细胞癌基和细胞的启动子，促进病毒复制或细胞癌基因的表达，故因的表达，故HBxAgHBxAg可作为致癌蛋白，与原可作为致癌蛋白，与原发性肝癌的发生和发展有关。临床上不作为发性肝癌的发生和发展有关。临床上不作为HBVHBV感染的血清学指标。感染的血清学指标。检测检测技术技术诊断与诊断与防治防治治疗治疗简介简介

13、致病性致病性简介简介检测检测技术技术诊断与诊断与防治防治治疗治疗致病性致病性 简介简介检测检测技术技术诊断与诊断与防治防治治疗治疗致病性致病性 乙型肝炎的临床表现呈多样性，包括无症乙型肝炎的临床表现呈多样性，包括无症状病毒携带者、急性肝炎、慢性肝炎、重症肝状病毒携带者、急性肝炎、慢性肝炎、重症肝炎和原发性肝细胞癌（炎和原发性肝细胞癌（PHCPHC）发生相关等。）发生相关等。1.1.急性肝炎急性肝炎 HBVHBV感染的前驱症状包括发热、感染的前驱症状包括发热、疲劳和厌食，常伴有恶心、呕吐和腹部不适。疲劳和厌食，常伴有恶心、呕吐和腹部不适。由于肝损伤出现典型的黄疸。约由于肝损伤出现典型的黄疸。约1

14、%1%黄疸型肝炎黄疸型肝炎发生重症肝炎，死亡率较高。如出现变态反应，发生重症肝炎，死亡率较高。如出现变态反应，可伴有皮疹、关节炎、急性坏死性血管炎和肾可伴有皮疹、关节炎、急性坏死性血管炎和肾小球肾炎。小球肾炎。2.2.慢性肝炎慢性肝炎 在在HBVHBV感染中，约感染中，约5%-10%5%-10%的患者的患者发生慢性肝炎，临床表现轻微或仅能检出转氨发生慢性肝炎，临床表现轻微或仅能检出转氨酶轻度升高等肝功能异常。约酶轻度升高等肝功能异常。约10%10%的慢性肝炎发的慢性肝炎发展为肝硬化和肝功能衰竭。展为肝硬化和肝功能衰竭。3.3.原发性肝细胞癌原发性肝细胞癌 慢性肝炎与慢性肝炎与PHCPHC之间的

15、潜之间的潜伏期短至伏期短至9 9年，长达年，长达3535年。人群流行病学研究显年。人群流行病学研究显示，示，HBsAgHBsAg携带者较无携带者较无HBVHBV感染者发生肝癌的危险感染者发生肝癌的危险性高性高217217倍。肝细胞损伤和肝组织的不断修复、倍。肝细胞损伤和肝组织的不断修复、HBVHBV基因组的整合、基因组的整合、 HBxAgHBxAg的反式激活作用等均的反式激活作用等均可导致肝细胞的过度生长，最终引发可导致肝细胞的过度生长，最终引发PHCPHC。简介简介检测检测技术技术诊断与诊断与防治防治治疗治疗致病性致病性 HBV HBV在肝细胞内增殖，并不直接导致肝细胞的在肝细胞内增殖，并不

16、直接导致肝细胞的损伤，病毒基因组能与肝细胞整合，引发病毒的损伤，病毒基因组能与肝细胞整合，引发病毒的潜伏感染。潜伏感染。HBVHBV的致病机制以免疫病理损伤为主。的致病机制以免疫病理损伤为主。 由于患者血液中存在大量的由于患者血液中存在大量的HBsAgHBsAg或或HBeAgHBeAg，因此体液免疫对肝细胞的损害及中止病毒增殖和因此体液免疫对肝细胞的损害及中止病毒增殖和扩散作用是有限的；相反与扩散作用是有限的；相反与HBsAgHBsAg或或HBeAgHBeAg的抗原的抗原抗体复合物所致的肾小球肾炎、关节炎等肝外免抗体复合物所致的肾小球肾炎、关节炎等肝外免疫病理性损害有关。疫病理性损害有关。 在

17、急性乙型肝炎患者外周血中，分离出被在急性乙型肝炎患者外周血中，分离出被HBsAg或或HBcAg/ HBeAg致敏的致敏的CD8+T细胞，但在慢性细胞，但在慢性乙型肝炎患者外周血和肝内，上述乙型肝炎患者外周血和肝内，上述CD8+T细胞数量细胞数量明细那减少，这可部分解释有效的细胞免疫在清除明细那减少，这可部分解释有效的细胞免疫在清除HBV感染靶细胞的同时损伤肝细胞，从而引起急性感染靶细胞的同时损伤肝细胞，从而引起急性感染；感染； 而在慢性肝炎中，由于抗而在慢性肝炎中，由于抗HBV特异性特异性CD4+T细胞细胞的缺乏，致使有限的细胞免疫不能有效清除病毒，的缺乏，致使有限的细胞免疫不能有效清除病毒，

18、允许允许HBV在体内持续存在及引起肝持续性炎症反应，在体内持续存在及引起肝持续性炎症反应，甚至由于特异性细胞免疫严重缺乏，成为无症状携甚至由于特异性细胞免疫严重缺乏，成为无症状携带者。带者。1酶联免疫吸附试验酶联免疫吸附试验(ELISA)检测检测时间分辨荧光免疫分析方法时间分辨荧光免疫分析方法(TRFIA)23免疫放射分析（免疫放射分析（IRMA）法）法实时荧光实时荧光PCR技术技术45化学发光免疫分析化学发光免疫分析 (CLIA)6免疫胶体金技术免疫胶体金技术检测技检测技术术简介简介致病性致病性检测检测技术技术诊断与诊断与防治防治治疗治疗简介简介致病性致病性检测检测技术技术诊断和诊断和防治防

19、治治疗治疗 乙肝病毒抗原抗体系统的检测：目前乙型肝乙肝病毒抗原抗体系统的检测：目前乙型肝炎的病毒学诊断，主要因考血清学方法检测炎的病毒学诊断，主要因考血清学方法检测HBsAgHBsAg、HBeAgHBeAg及抗及抗- -HBsHBs、抗、抗- -HBcHBc、抗、抗- -HBeHBe，统称二对半，统称二对半抗原抗体系统。临床上抗原抗体系统。临床上ELISEELISE法最常用。法最常用。简介简介致病性致病性检测检测技术技术诊断和诊断和防治防治治疗治疗 代表药物代表药物a a干扰素（干扰素（interferon-a, IFN-ainterferon-a, IFN-a）高剂量重组干扰素的持续应答率低

20、，一般高剂量重组干扰素的持续应答率低，一般只有只有30%-40%30%-40%，而且伴有严重的副作用，而且伴有严重的副作用干扰素干扰素代表药物拉米夫定（代表药物拉米夫定（LamivudineLamivudine, 3CT, 3CT）可以通过抑制可以通过抑制HBVHBV的的DNADNA聚合酶的活性来发聚合酶的活性来发挥迅速、有效的抗病毒的作用，但停药后的挥迅速、有效的抗病毒的作用，但停药后的反弹和耐药株的出现是个亟待解决的难题。反弹和耐药株的出现是个亟待解决的难题。核苷类似物核苷类似物Section headerSection headerSection header抗病毒治疗Section h

21、eader简介简介致病性致病性检测检测技术技术诊断和诊断和防治防治治疗治疗基因治疗是指将正常的野生型基因或特定设计基因治疗是指将正常的野生型基因或特定设计的治疗基因导入机体或特定的细胞内替代、修的治疗基因导入机体或特定的细胞内替代、修正、补偿有缺陷的基因功能；或封闭、抑制异正、补偿有缺陷的基因功能；或封闭、抑制异常表达的基因以达到治疗某种疾病的目的。常表达的基因以达到治疗某种疾病的目的。Section headerSection headerSection header抗病毒治疗Section header简介简介致病性致病性检测检测技术技术诊断和诊断和防治防治治疗治疗反基因技术反基因技术反义

22、技术反义技术核酶核酶DNADNA疫苗疫苗基因治疗基因治疗主要策略主要策略123456单链抗体技术单链抗体技术负性多变体技术负性多变体技术Section headerSection headerSection header抗病毒治疗Section header简介简介致病性致病性检测检测技术技术诊断和诊断和防治防治治疗治疗 反义技术是指设计与反义技术是指设计与mRNAmRNA序列互补的核酸分序列互补的核酸分子，导入细胞，使其遵循碱基配对原则与子，导入细胞，使其遵循碱基配对原则与mRNAmRNA特特异性位点结合，从而抑制或阻止蛋白质的翻译，异性位点结合，从而抑制或阻止蛋白质的翻译，达到抗病毒的目的

23、。反义技术有反义寡聚核糖核达到抗病毒的目的。反义技术有反义寡聚核糖核苷酸（苷酸（antisense antisense oligodexynucleotideoligodexynucleotide, ASODN, ASODN）和反义和反义RNARNA（antisense RNAantisense RNA）。）。Section headerSection headerSection header抗病毒治疗Section header简介简介致病性致病性检测检测技术技术诊断和诊断和防治防治治疗治疗 与反义技术不同，反基因技术是根据三螺旋与反义技术不同，反基因技术是根据三螺旋结构结构DNADNA形成

24、的原理，以靶基因中同聚嘌呤形成的原理，以靶基因中同聚嘌呤- -嘧啶嘧啶区域为靶位点，设计、合成反基因寡核苷酸或三区域为靶位点，设计、合成反基因寡核苷酸或三螺旋形成寡核苷酸，导入细胞内，通过与双链螺旋形成寡核苷酸，导入细胞内，通过与双链DNADNA形成三螺旋结构，抑制或阻断靶基因的转录。形成三螺旋结构，抑制或阻断靶基因的转录。 Section headerSection headerSection header抗病毒治疗Section header简介简介致病性致病性检测检测技术技术诊断和诊断和防治防治治疗治疗 核酶（核酶（RibozymeRibozyme, , RzRz）是一种具有核酸内切）是

25、一种具有核酸内切酶活性的酶活性的RNARNA分子，可特异性地与靶基因结合并分子，可特异性地与靶基因结合并切割靶切割靶mRNAmRNA。核酶在切割和降解完靶。核酶在切割和降解完靶RNARNA后可重后可重新形成高级结构，防止新形成高级结构，防止RNARNA酶对其自身的降解并酶对其自身的降解并循环催化其余的靶循环催化其余的靶RNARNA。核酶是通过碱基互补配。核酶是通过碱基互补配对与底物形成杂交双链结构，从而使核酶具较普对与底物形成杂交双链结构，从而使核酶具较普通酶蛋白更高的底物特异性，同时作为核酶的底通酶蛋白更高的底物特异性，同时作为核酶的底物需具备核酶的特异识别位点。物需具备核酶的特异识别位点。

26、 Section headerSection headerSection header抗病毒治疗Section header简介简介致病性致病性检测检测技术技术诊断和诊断和防治防治治疗治疗 DAN DAN疫苗（疫苗（DNA vaccineDNA vaccine）又称基因疫苗或核）又称基因疫苗或核酸疫苗，是指将编码某一特定蛋白质抗原的基因酸疫苗，是指将编码某一特定蛋白质抗原的基因片段插入适当的真核细胞表达载体中，构建重组片段插入适当的真核细胞表达载体中，构建重组质粒，然后经肌肉注射或基因枪技术直接接种到质粒，然后经肌肉注射或基因枪技术直接接种到机体中，宿主细胞摄取质粒后，表达抗原蛋白，机体中，宿主细胞摄取质粒后，表达抗原蛋白，从而诱导机体产生特异性细胞免疫和体液免疫应从而诱导机体产生特异性细胞免疫和体液免疫应答。针对答。针对HBVHBV的基因疫苗一般选择的基因疫苗一般选择HBV CHBV C区和