植物生理学实验氯化三苯基四氮唑(TTC)法测定根系

1、实验4氯化三苯基四氮唾(TTC)法测定才艮系活力重要指标，可以衡量根系吸收水分或矿质元素的能力大小，甚至可以反映地上部分的营养状况以及产量水平。学会利用TTC法测定根系活力。一、原理氯化三苯基四氮喳(TTC)溶于水中成为无色溶液，但还原后即生成红色而不溶于水的三苯基甲替(TTF),如下式：CJL-C/N N CJL I 、N=而一C6H5TTC （天色）HI/NNC6H$C,HaC+HC1、N=NC6HsTTF（红色）生成的TTF比较稳定，不会被空气中的氧自动氧化，所以TTC被广泛地用作酶试验的氢受体，植物根所引起的TTC还原，可因加入琥珀酸、延胡索酸、苹果酸得到增强，而被丙二酸、碘乙酸所抑制

2、。所以TTC还原量能表示脱氢酶活性，并作为根系活力的指标。二、材料、设备仪器及试剂（一）材料：玉米等植物根系。（二）仪器设备：分光光度计；天平；恒温箱1台；研钵1套；漏斗；量筒；移液管；试管；刻度试管10ml;试管架；药勺；石英砂适量；烧杯;小培养皿；洗瓶。二、材料、设备仪器及试剂（三）试剂：1.乙酸乙酯2.次硫酸钠（Na2s2O4,强还原剂，俗称保险粉）3.lmg/ml的TTC溶液：4.磷酸缓冲液（66mmol/L,pH7）.5.lmol/L硫酸：6.0.4moi/L琥珀酸：三、实验步骤1 .定性测定(教师做演示实验)(1)配置反应液把1%TTC溶液，0.4moL/L琥珀酸钠和磷酸缓冲液按1

3、:5：4比例混合。(2)把根仔细洗净，把地上部分从茎基切除，将根放入三角瓶中，倒入反应液，以浸没根为度，置37C左右暗处放lh,以观察着色情况，新根尖端几毫米以及细侧根都明显地变成红色，表明该处有脱氢酶存在.三、实验步骤2 .定量测定(1)TTC标准曲线的制作tA. 111111 HU vx fci - j i wi 11 2P TIMa T 9 /JUZ、 .(黄豆大小)保险粉摇匀，加入乙酸乙酯40mL左右 剧烈震荡摩保脸球充分溶解，用乙酸乙酯定容至刻居 即成TTF麟菠(20阳/mL )。取1mg/mL的TTC2mL于100mL容量瓶中，加入2勺按下表制作TTF标准曲线。以空白作参比，在48

4、5nm波长下测定光密度，绘制标准曲线。试怪编号123456空白样品TTF含量(ug)02040608010011卜(ml)012345Jc乙酸乙酯（ml）498765I0r0OD(485nm)三、实验步骤（2）.样品的提取及测定样品提取：称取根样品0.5g,放入小培养皿，加入0.4%TTC溶液和磷酸缓冲液的等量混合液10ml,把根充分浸没在溶液内，在37*C下暗处保温lh,此后加入Imo1/L硫酸2ml,以停止反应。（与此同时做一空白实验，先加硫酸，再加根样品，其他操作同上）。根系活力测定：把根取出，吸干水分后与乙酸乙酉旨341nl和少量石英砂一起磨碎，以提出TTF。把红色提出液过滤后移入10nli刻度试管，用少量乙酸乙酯把残渣洗涤二至三次，皆移入试管,最后加乙酸乙酯使总量为10ml,用分光光度计在485nm下比色，以空白作参比读出光密度，查标准曲线，求出四氮哇还原量。人结果计算四氮喳还原强度:mg/g（根鲜重）小=四氮嗖还原量（mg）/根重（g）X时间（h）五注意事项