定量分析方法验证

1、第四章第四章 药物含量测定方法药物含量测定方法与方法验证与方法验证 药物的含量：药物的含量：药物所含主成分的量，用于评价药药物所含主成分的量，用于评价药物的质量物的质量 基于化学或物理学原理基于化学或物理学原理 含量测定含量测定 （容量分析、光谱分析、色谱分析）（容量分析、光谱分析、色谱分析） 基于生物学原理基于生物学原理含量分析方法的比较：含量分析方法的比较： 容量分析：简便、准确、耐用性好，容量分析：简便、准确、耐用性好，x相对相对误差在误差在0.2%以下，适用于对准确度和精密度要以下，适用于对准确度和精密度要求高的供试品测定。专属性差求高的供试品测定。专属性差 光谱分析：简便、快速、灵敏

2、，相对误差在光谱分析：简便、快速、灵敏，相对误差在2%5%，适用于对灵敏度要求高、样本量大，适用于对灵敏度要求高、样本量大的供试品测定。专属性稍差的供试品测定。专属性稍差 色谱分析：灵敏度及专属性高，适用于复色谱分析：灵敏度及专属性高，适用于复杂的供试品测定。定量时需要对照品杂的供试品测定。定量时需要对照品含量测定方法选择含量测定方法选择 依据：依据： 容量分析：容量分析： 化学原料药的测定化学原料药的测定 光谱分析：药物制剂、溶出度、含量均匀度光谱分析：药物制剂、溶出度、含量均匀度 色谱分析：色谱分析： 药物制剂药物制剂 第一节第一节 定量分析方法的分类与特点定量分析方法的分类与特点一、容量

3、分析法一、容量分析法（一）特点（一）特点原理：原理： aA + xX cC + dDaA + xX cC + dD 标准溶液标准溶液被测物质被测物质容量分析的化学反应必须满足的条件：容量分析的化学反应必须满足的条件：（1 1）反应要有一定的化学计量关系，并且要能定）反应要有一定的化学计量关系，并且要能定量地完成量地完成（2 2）反应速度要快，即反应在瞬间完成）反应速度要快，即反应在瞬间完成（3 3）必须要有合适的确定滴定终点的方法）必须要有合适的确定滴定终点的方法 滴定分析法滴定分析法: :酸碱滴定法酸碱滴定法; ;沉淀滴定法沉淀滴定法 配位滴定法配位滴定法; ;氧化还原法；氧化还原法； 非水

4、溶液滴定法等非水溶液滴定法等容量分析的特点：容量分析的特点： 简便易行简便易行 耐用性高耐用性高 结果准确结果准确 专属性差专属性差 用于化学原料药的含量测定用于化学原料药的含量测定（二）计算（二）计算1 1、滴定度的定义、滴定度的定义 滴定度：滴定度：指每指每1 ml1 ml规定浓度的滴定液相当于规定浓度的滴定液相当于被测物质的量，以被测物质的量，以 T T 表示，中国药典以表示，中国药典以mgmg表表示示 例：每例：每1ml1ml的的盐酸盐酸滴定液（滴定液（0.5mol/l0.5mol/l）相当）相当于于72.06mg72.06mg苯甲酸钠苯甲酸钠2 2、滴定度（、滴定度（T T）的计算）

5、的计算aA + bB cC + dDaA + bB cC + dD MbammlmgT )/(待测物待测物滴定液滴定液式中：式中：m m滴定液的摩尔浓度，滴定液的摩尔浓度，mol/lmol/l M- M-待测物的毫摩尔质量（分子量）待测物的毫摩尔质量（分子量） a a、b b分别为被测物、滴定液的摩尔数分别为被测物、滴定液的摩尔数定义定义3 3、 含量计算含量计算（1 1）直接滴定法）直接滴定法%100 WVT药药物物的的百百分分含含量量规定滴定液浓度滴定液浓度）实际滴定液浓度（标定F%100%100 WFTVWTV含含量量实际滴定度（或校正滴定度）实际滴定度（或校正滴定度）TT的计算的计算

6、T=TT=T* *F F 其中其中每每1 ml1 ml标准溶液相标准溶液相当于被测物质的量当于被测物质的量%100%100 标标示示量量平平均均片片重重标标示示量量平平均均片片重重片片剂剂：标标示示量量WFTVWTVmlVVFTVVTVOO量取注射剂的体积，标示量标示量注射剂：标示量:%100%1000(2)(2)间接滴定法间接滴定法1 1）生成物滴定法）生成物滴定法 计量滴定液消耗的量，计算供试品的含量计量滴定液消耗的量，计算供试品的含量 计算同直接滴定法计算同直接滴定法 DCBBA化合物化合物滴定液滴定液化合物化合物化合物化合物供试品试剂供试品试剂 2 2）回滴定法（剩余滴定法）回滴定法（

7、剩余滴定法） 原理：先在待测样品溶液中加原理：先在待测样品溶液中加定量、过量的滴定量、过量的滴定液定液A A，使它和样品反应，等反应结束后，再，使它和样品反应，等反应结束后，再用另一种用另一种滴定滴定液液B B来回滴剩余的滴定液来回滴剩余的滴定液A A。不做空白的含量计算不做空白的含量计算 %100)( WTFVFVBBAA含含量量特点：特点：A A、B B两种滴定液均需标定两种滴定液均需标定做空白的含量计算方法做空白的含量计算方法%100)( WFTVVBASBOB含含量量 特点：仅需标定滴定液特点：仅需标定滴定液B B的浓度的浓度例例1：酸碱滴定法测定烟酸：酸碱滴定法测定烟酸片片含量。取本

8、品（规格：含量。取本品（规格：0.1g/片）片）10片，精密称定为片，精密称定为1. 584 0g，研细，精密称取片，研细，精密称取片粉粉0.332 9g,（约相当于烟酸（约相当于烟酸0.2g），加新沸过的冷蒸馏），加新沸过的冷蒸馏水水50mL，置水浴上加热，并时时振摇，使烟酸溶解后，置水浴上加热，并时时振摇，使烟酸溶解后，冷却至室温，加酚酞指示剂冷却至室温，加酚酞指示剂3滴，用氢氧化钠滴定液滴，用氢氧化钠滴定液（0.100 5 mol/L)滴定，消耗滴定，消耗16.90mL。 1mL氢氧化钠滴定液（氢氧化钠滴定液（ 0.1mol/L）相当于）相当于12.31mgC6H5NO2。问：本品是否符

9、合。问：本品是否符合中国药典中国药典规规定的含量限度（定的含量限度（中国药典中国药典规定，本品规定，本品含含C6H5NO2应为标示量的应为标示量的95.0%105.0%)二、光谱分析法二、光谱分析法紫外紫外可见分光光度法可见分光光度法1 1、比耳、比耳朗伯定律（朗伯定律（BeerBeerLambertLambert定律）定律）A=-lgTA=-lgT=E=E* *C C* *L L BeerBeer定律说明吸收和浓度的关系定律说明吸收和浓度的关系 LambertLambert定律说明吸收和厚度的关系定律说明吸收和厚度的关系吸收系数：吸收系数：一定波长下，溶液浓度为：一定波长下，溶液浓度为1mo

10、l/l1mol/l，液层厚，液层厚度为度为1cm1cm时，物质的吸收度时，物质的吸收度-定性依据定性依据 10104 4，物质有强吸收，物质有强吸收 10102 210104 4 ，物质具有中等强度吸收，物质具有中等强度吸收 100100，物质有弱吸收，物质有弱吸收 ：一定波长下，溶液浓度为：一定波长下，溶液浓度为1%1%（W/VW/V），），液层厚度为液层厚度为1cm1cm时，物质的吸收度时，物质的吸收度- - -定量依据定量依据 两者间的关系：两者间的关系： 或或 %11cmE%1110cmEMMEcm10%112 2、对溶剂的要求、对溶剂的要求 溶剂的截止波长：使用范围不能小于截止溶剂的

11、截止波长：使用范围不能小于截止使用波长使用波长 溶剂的纯度：检查所用溶剂在检测波长处溶剂的纯度：检查所用溶剂在检测波长处是否符合要求是否符合要求 以空气做空白，测定溶剂加吸收池的吸收以空气做空白，测定溶剂加吸收池的吸收值，要求：值，要求： 220nm 220nm 240nm A 0.40 240nm A 0.40 241nm 241nm 250nm 0.20 250nm 0.20 251nm 251nm 00nm 0.10 00nm 0.10 300nm 300nm以上以上 0.050.053 3、含量测定、含量测定 测定要求测定要求: :空白对照：配制供试品溶液的同批溶剂空白对照：配制供试品

12、溶液的同批溶剂吸收池：吸收池：1cm1cm石英吸收池石英吸收池吸收波长：该品种项下规定波长吸收波长：该品种项下规定波长2nm2nm之内之内吸收值吸收值: 0.3: 0.3 0.7 0.7 （1 1）对照品比较法）对照品比较法供试品的浓度为：供试品的浓度为：rrXXCAAC %100%100% WADCAWDCrrxX含含量量原料药：原料药：%100% 标标示示量量平平均均片片重重片片剂剂：标标示示量量WADCArrx%100% 标标示示量量液液体体制制剂剂：标标示示量量VAVDCArrx（2 2）吸收系数法）吸收系数法 按规定方法配制供试品，在规定的波长按规定方法配制供试品，在规定的波长及吸收

13、厚度下，测定吸收度，计算及吸收厚度下，测定吸收度，计算再按在相同条件下，标准对照品测到的再按在相同条件下，标准对照品测到的 计算含量：计算含量：%100%11%11rcmxcmEE含量xcmE%11rcmE%11注意：此法对仪器要求高，必须注意校正和检定注意：此法对仪器要求高，必须注意校正和检定 吸收系数吸收系数 100 100（3 3）计算分光光度法）计算分光光度法 一般不宜用作含量一般不宜用作含量 测定（当测定波长处于测定（当测定波长处于吸收曲线陡升或陡降部位时，对测定影响大）吸收曲线陡升或陡降部位时，对测定影响大）（4 4）比色法）比色法 供试品本身无吸收或有吸收但干扰大，可加供试品本身

14、无吸收或有吸收但干扰大，可加入适当的显色剂后测定。入适当的显色剂后测定。 此法影响因素较多，实验平行操作此法影响因素较多，实验平行操作例：对照品比较法测定卡马西平含量。精密称取本例：对照品比较法测定卡马西平含量。精密称取本品品0.050 3g,置置100mL量瓶中，加乙醇溶解并稀释量瓶中，加乙醇溶解并稀释到刻度，摇匀，精密量取到刻度，摇匀，精密量取2mL，置，置100mL量瓶中，量瓶中，加乙醇稀释到刻度，摇匀，作为供试品溶液；另加乙醇稀释到刻度，摇匀，作为供试品溶液；另精密称取卡马西平对照品适量，用乙醇制成精密称取卡马西平对照品适量，用乙醇制成1mL中含中含10.3g的溶液，作为对照品溶液。取

15、上述两的溶液，作为对照品溶液。取上述两种溶液，用种溶液，用1cm吸收池在吸收池在285 nm波长处测定，测波长处测定，测得供试品溶液吸光度为得供试品溶液吸光度为0.435，对照品溶液，对照品溶液A值为值为0.440。问本品是否符合。问本品是否符合中国药典中国药典规定的含量规定的含量限度（限度（中国药典中国药典规定，本品按干燥品计算，规定，本品按干燥品计算，含含C15H12N2O应为标示量的应为标示量的97.0%103.0%)三、色谱分析法三、色谱分析法（一）高效液相色谱法（一）高效液相色谱法1、对仪器的一般要求、对仪器的一般要求 固定相种类固定相种类 流动相组成：流动相组成： 注意：注意：使用

16、使用C18时，流动相中含有的有机溶剂比时，流动相中含有的有机溶剂比例应不低于例应不低于5 检测器检测器 药典中规定的固定相种类、流动相组成及药典中规定的固定相种类、流动相组成及检测器类型不能随意改变检测器类型不能随意改变 2、系统适用性试验、系统适用性试验 试验指标：试验指标：理论塔板数、分离度、理论塔板数、分离度、 重复性、拖尾因子重复性、拖尾因子（1）色谱柱的理论塔板数）色谱柱的理论塔板数(n)（2）分离度）分离度(R) 注意：峰宽的概念注意：峰宽的概念（3）重复性：）重复性： 5次连续进样，次连续进样，RSD应不应不大于大于2.0（4）拖尾因子（）拖尾因子（T）用峰高法定量：用峰高法定量

17、：0.951.05用峰面积法定量：用峰面积法定量：105. 02dWTh 3 3、测定法（大多数采用峰面积法）、测定法（大多数采用峰面积法）（1 1）内标法）内标法 按各品种项下的规定，精密称取（或量取）药物按各品种项下的规定，精密称取（或量取）药物对照品和内标物质，分别配成溶液，对照品和内标物质，分别配成溶液，精密量取精密量取中在所配溶液，配制成测定校正因子中在所配溶液，配制成测定校正因子用的药品对照品（含内标）用的药品对照品（含内标）进样，记录谱图，得峰高（进样，记录谱图，得峰高（H H）或峰面积（）或峰面积（A A）RRSSCACAf校正因子R R表示药物对照品表示药物对照品 S S表示

18、内标物表示内标物配制含有内标的供试品溶液，进样，记录谱图，得峰配制含有内标的供试品溶液，进样，记录谱图，得峰面积（或峰高）面积（或峰高） SSXXCAAfC供试品浓度特点：特点：如果在配制测定校正因子和供试品溶液时如果在配制测定校正因子和供试品溶液时用同一份内标物溶液，内标物质不必精密称定或用同一份内标物溶液，内标物质不必精密称定或量取。量取。 内标物不易寻找内标物不易寻找%100 WCADAfSSX原原料料：含含量量%100 标标示示量量平平均均片片重重片片剂剂：标标示示量量WCADAfSSX2 2、外标法测定供试品中主成分含量、外标法测定供试品中主成分含量两种方法：标准曲线法和单点外标法两

19、种方法：标准曲线法和单点外标法（1 1）标准曲线法）标准曲线法 注意两点：注意两点： 理论上讲标准曲线应该过原点，但由于存在理论上讲标准曲线应该过原点，但由于存在系统误差，会偏离原点，系统误差，会偏离原点，即即A=a CA=a CX X +b +b 如果供试品为片剂，则含量应该为标示量的如果供试品为片剂，则含量应该为标示量的百分含量，计算方法为百分含量，计算方法为 （2 2）单点外标法：）单点外标法： RxRxAACC 特点：特点：简单，但要求简单，但要求进样量准确进样量准确，操作条，操作条件稳定件稳定%100%100 标标示示量量标标示示量量片片剂剂：标标示示量量WWDAACWWDCRXRX

20、%100% WDCX原原料料：含含量量(二二)气相色谱法气相色谱法1、对仪器的一般要求、对仪器的一般要求 色谱柱色谱柱种类：毛细管柱或填充柱种类：毛细管柱或填充柱 载气：氮气载气：氮气 检测器：氢火焰离子化检测器，检测温度检测器：氢火焰离子化检测器，检测温度一般高于柱温，不得低于一般高于柱温，不得低于150度度 药典中规定的固定液品种、检测器类型及药典中规定的固定液品种、检测器类型及特殊指定的色谱柱材料不能随意改变特殊指定的色谱柱材料不能随意改变2 2、色谱系统适用性试验：、色谱系统适用性试验：3 3、测定方法、测定方法（1 1）内标法加校正因子测定供试品中主成分含量）内标法加校正因子测定供试

21、品中主成分含量（2 2）外标法测定供试品中主成分含量）外标法测定供试品中主成分含量（3 3）标准加入法测定供试品中主成分含量标准加入法测定供试品中主成分含量 精密称取待测成分对照品适量，配成对照品精密称取待测成分对照品适量，配成对照品溶液，精密量取一定量加入到供试品溶液中，根溶液，精密量取一定量加入到供试品溶液中，根据外标法或内标法测定含量。据外标法或内标法测定含量。1 xisxxxxxxisAACCCCCAA注意：注意： 采用手工方式进样，建议使用内标法定量采用手工方式进样，建议使用内标法定量 采用自动进样，可用内标法或外标法采用自动进样，可用内标法或外标法 采用顶空进样，用标准加入法定量，

22、可消除基质采用顶空进样，用标准加入法定量，可消除基质效应的影响效应的影响例：例：HPLC外标法测定阿司匹林泡腾片含量。外标法测定阿司匹林泡腾片含量。测定方法：取本品（规格：测定方法：取本品（规格：0.1g）10片，精密称定为片，精密称定为1.576 0g ,研细，精密称取研细，精密称取0.041 2g(约相当于阿司匹林约相当于阿司匹林25mg)，置，置100mL具塞锥形瓶中，精密加乙腈甲醇甲酸（具塞锥形瓶中，精密加乙腈甲醇甲酸（40 : 59 : 1）溶液）溶液50mL，强力振摇，强力振摇10min使阿司匹林溶解，迅速滤过，使阿司匹林溶解，迅速滤过，取续滤液作为供试品溶液，精密量取取续滤液作为

23、供试品溶液，精密量取10L注入液相色谱仪，注入液相色谱仪，记录色谱图；另取阿司匹林对照品适量，精密称定，加乙记录色谱图；另取阿司匹林对照品适量，精密称定，加乙腈甲醇甲酸（腈甲醇甲酸（40:59 : 1）溶液溶解制成）溶液溶解制成1mL中含有中含有0.52mg的溶液，作为对照品溶液，同法测定。测得供试品的溶液，作为对照品溶液，同法测定。测得供试品溶液峰面积溶液峰面积Ax为为154 756（三次测定均值），对照品溶液峰（三次测定均值），对照品溶液峰面积面积Ar为为155 076 （三次测定均值），按外标法以峰面积计（三次测定均值），按外标法以峰面积计算本品含量。问本品是否符合算本品含量。问本品是否

24、符合中国药典中国药典规定的含量限规定的含量限度（度（中国药典中国药典规定，本品含阿司匹林规定，本品含阿司匹林C9H8O4应为标示应为标示量的量的90.0%110.0%)第二节第二节 样品分析的前处理方法样品分析的前处理方法 概述概述 有机金属药物：有机金属药物：金属原子直接与碳原子以共价键金属原子直接与碳原子以共价键相连，结合比较牢固，如醋酸苯汞、汞撒利相连，结合比较牢固，如醋酸苯汞、汞撒利含金属的有机药物含金属的有机药物：金属原子不与碳原子直接相金属原子不与碳原子直接相连，通常为有机酸及酚的金属盐或配位化合物连，通常为有机酸及酚的金属盐或配位化合物 。例：例：酒石酸锑钾、葡萄糖酸锑钠酒石酸锑

25、钾、葡萄糖酸锑钠处理方法主要分为两大类处理方法主要分为两大类: : 不经有机破坏的处理不经有机破坏的处理 经有机破坏的处理经有机破坏的处理一、不经有机破坏的分析方法一、不经有机破坏的分析方法( (一一) )直接测定法直接测定法 金属原子不直接与碳原子相连的含金属有金属原子不直接与碳原子相连的含金属有机药物机药物 某些某些C CM M键结合不牢固的有机金属药物键结合不牢固的有机金属药物 例：富马酸亚铁的含量测定。例：富马酸亚铁的含量测定。( (二二) )经水解后测定法经水解后测定法1 1、碱水解后测定法、碱水解后测定法 适用范围：适用范围：含卤素有机药物结构中卤素原子含卤素有机药物结构中卤素原子

26、结合不结合不牢固牢固的药物，如卤素和脂肪碳链相连。的药物，如卤素和脂肪碳链相连。加加NaOHNaOH，加热回流，加热回流含有机结合的卤素含有机结合的卤素间接银量法测定间接银量法测定有机药物有机药物方法原理：方法原理：药物水解药物水解无机的卤素离子无机的卤素离子例：三氯叔丁醇的含量测定 2 2、水解后测定法、水解后测定法例：硬脂酸镁的含量测定例：硬脂酸镁的含量测定Mg(C17 H35COO)2 + H2SO4 定量、过量定量、过量2NaOH + H2SO4Na2SO4 + 2H2O MgSO4 + 2 C17 H35COOH过量剩余( (三三) )经氧化还原后测定法经氧化还原后测定法 例：泛影酸

27、、胆影酸等的含量测定例：泛影酸、胆影酸等的含量测定1 1、酸性或碱性还原后测定、酸性或碱性还原后测定卤素结合在芳环上卤素结合在芳环上例：含锑药物例：含锑药物具有氧化性具有氧化性2 2、利用药物中可游离的金属离子的氧化性测定含量、利用药物中可游离的金属离子的氧化性测定含量 利用药物中可游离出的金属离子的利用药物中可游离出的金属离子的氧化性氧化性，在酸，在酸性溶液中氧化碘化钾，性溶液中氧化碘化钾，析出碘析出碘，再用硫代硫酸钠滴，再用硫代硫酸钠滴定析出的碘，以测定含量。定析出的碘，以测定含量。二、经有机破坏的分析方法二、经有机破坏的分析方法 适用于适用于金属原子与碳原子结合牢固金属原子与碳原子结合牢

28、固的的有机金属药物，使有机结合状态的金属有机金属药物，使有机结合状态的金属及卤素转变为可测定的及卤素转变为可测定的无机化合物无机化合物，再，再选用适当的方法测定选用适当的方法测定。（一）湿法破坏（一）湿法破坏（1 1） 硝酸硝酸- -高氯酸法高氯酸法 适用于适用于血、尿、组织血、尿、组织等生物样品的破坏，等生物样品的破坏，有机金属药物经破坏后，得到的有机金属药物经破坏后，得到的无机金属离子无机金属离子一般呈高价态。一般呈高价态。 本法不能用于本法不能用于含氮杂环含氮杂环药物的破坏药物的破坏干法灼烧法干法灼烧法（2） 硝酸硝酸- -硫酸法硫酸法 适用于大多数有机物质的破坏，破坏得到适用于大多数有

29、机物质的破坏，破坏得到的无机金属离子均为的无机金属离子均为高价态。高价态。 不能用于含碱土金属有机药物的破坏不能用于含碱土金属有机药物的破坏（3） 硫酸硫酸- -硫酸盐法硫酸盐法 加入加入浓硫酸浓硫酸作为氧化剂作为氧化剂 加入加入硫酸盐硫酸盐提高硫酸的沸点，增强硫酸提高硫酸的沸点，增强硫酸的氧化破坏能力，且防止硫酸的分解损失。的氧化破坏能力，且防止硫酸的分解损失。 用于用于含砷或锑含砷或锑有机药物的破坏，破坏有机药物的破坏，破坏得到的无机金属离子多为低价态得到的无机金属离子多为低价态注意点：注意点： 破坏操作要放在通风橱中进行破坏操作要放在通风橱中进行 试剂不含有被测金属离子或干扰测定的组分试

30、剂不含有被测金属离子或干扰测定的组分 做空白试验做空白试验 破坏在凯氏燃烧瓶（硅或硼玻璃）中进行破坏在凯氏燃烧瓶（硅或硼玻璃）中进行 ( (二二) )干法破坏干法破坏1 1、高温炽灼法、高温炽灼法目的：目的： 将有机物灼烧灰化以达分解的目的将有机物灼烧灰化以达分解的目的适用范围：适用范围：湿法不易破坏完全的有机药物，以湿法不易破坏完全的有机药物，以及某些不能用硫酸进行破坏的有机药物及某些不能用硫酸进行破坏的有机药物 限制：限制：对于含易挥发性金属（如汞、砷等）有机对于含易挥发性金属（如汞、砷等）有机药物不适用药物不适用 注意事项：注意事项：（1 1）加热或灼烧时，应控制温度在）加热或灼烧时，应

31、控制温度在420420以下以下（2 2）一定要灰化完全）一定要灰化完全（3 3）经本法破坏后，所得灰分往往不易溶解，但）经本法破坏后，所得灰分往往不易溶解，但不要轻易弃去不要轻易弃去2 2、氧瓶燃烧法：、氧瓶燃烧法： 氧瓶燃烧法：将有机药物放氧瓶燃烧法：将有机药物放在充满在充满氧气氧气的的密闭密闭的燃烧瓶中进的燃烧瓶中进行行燃烧燃烧，有机结构部分分解为，有机结构部分分解为COCO2 2和和H H2 2O O，用适当的吸收液，用适当的吸收液吸收吸收燃烧所产生待测物质（已转化为燃烧所产生待测物质（已转化为不同价态的氧化物）不同价态的氧化物）, , 然后根据然后根据待测物质的性质待测物质的性质, ,

32、 然后采用相应然后采用相应的方法进行鉴别、检查或测定的方法进行鉴别、检查或测定. .NaClHClOCl-RNaOH2 溶液溶液点燃点燃特点：特点： 适用于适用于含卤素、硫、氮、硒含卤素、硫、氮、硒等有机药物的分析等有机药物的分析 简便、快速、破坏完全，尤其适用于微量样品的简便、快速、破坏完全，尤其适用于微量样品的分析分析 （1 1）仪器装置）仪器装置 燃烧瓶燃烧瓶 一般为不同体积的磨口、硬一般为不同体积的磨口、硬质玻璃锥形瓶，瓶塞严密、空质玻璃锥形瓶，瓶塞严密、空心、底部熔封一根直径为心、底部熔封一根直径为lmmlmm铂丝，铂丝下端是网状或螺旋铂丝，铂丝下端是网状或螺旋状，长度约为瓶身长度的

33、状，长度约为瓶身长度的2/32/3 样品制备：称样用材料及称样方法样品制备：称样用材料及称样方法 无灰滤纸：无灰滤纸：用于固体样品用于固体样品 纸袋：纸袋：适用于液体样品适用于液体样品 吸收液吸收液A.A.作用：将样品经燃烧分解所产生的各种价态的作用：将样品经燃烧分解所产生的各种价态的卤素、硫、氮、硒等，定量地吸收并转变为便卤素、硫、氮、硒等，定量地吸收并转变为便于测定的价态于测定的价态B.B.吸收液的选择吸收液的选择待测元素待测元素燃烧产物燃烧产物吸收液吸收液氟氟氟化氢氟化氢水水氯氯氯化氢氯化氢水水NaOHNaOH溶液溶液溴溴单质溴、溴化氢单质溴、溴化氢水水NaOHNaOHSOSO2 2饱和

34、溶液饱和溶液碘碘单质碘、单质碘、 少量少量I5+、I2+、I-1硝酸银法：硝酸银法：I-1，水水NaOHNaOHSOSO2 2饱和溶液饱和溶液间接碘量法：水间接碘量法：水NaOHNaOH溶液溶液硫硫三氧化硫三氧化硫浓浓H H2 2O O2 2水液水液硒硒SeO2(少量少量SeO3)硝酸溶液硝酸溶液、操作方法、操作方法A A、固定固定已称好样品的已称好样品的无灰滤纸或纸袋无灰滤纸或纸袋B B、燃烧瓶中加入规定量、燃烧瓶中加入规定量及种类的及种类的吸收液吸收液C C、用水把瓶口湿润，小、用水把瓶口湿润，小心急速通入氧气，立即心急速通入氧气，立即用表面皿盖好用表面皿盖好D D、点燃滤纸或纸袋尾部，迅

35、速放入装、点燃滤纸或纸袋尾部，迅速放入装有吸收液的燃烧瓶中，拧紧瓶盖，用有吸收液的燃烧瓶中，拧紧瓶盖，用少量水封口少量水封口E E、待燃烧完全、无黑色、待燃烧完全、无黑色碎片后，充分混合，使碎片后，充分混合，使生成的烟雾被完全吸收生成的烟雾被完全吸收后，放置后，放置1515分钟，再用分钟，再用少量水冲洗瓶塞和铂丝，少量水冲洗瓶塞和铂丝，合并洗液和吸收液。合并洗液和吸收液。 用同样的方法作空白用同样的方法作空白试验试验（2 2）注意事项）注意事项按规定方法操作按规定方法操作 根据供试品的取用量选择不同的燃烧瓶根据供试品的取用量选择不同的燃烧瓶 待分解样品量待分解样品量 燃烧瓶的体积燃烧瓶的体积

36、3 35mg5mg（微量分析）（微量分析） 150 150 250ml250ml 20 20 30mg30mg（半微量分析）（半微量分析） 300 300 500ml500ml 50 50 60mg60mg 1000ml1000ml 0.6 0.6 0.7g0.7g或更多或更多 2000ml2000ml或特殊结构或特殊结构的燃烧瓶的燃烧瓶燃烧瓶要洁净，不能残留有机溶剂，不能用有燃烧瓶要洁净，不能残留有机溶剂，不能用有机润滑剂涂抹瓶塞机润滑剂涂抹瓶塞要有防爆措施要有防爆措施氧气要充足，确保燃烧完全，产物不能有黑色氧气要充足，确保燃烧完全，产物不能有黑色炭化物炭化物燃烧产生的烟雾要被完全吸收燃烧产

37、生的烟雾要被完全吸收 充分振摇和放置充分振摇和放置都是为了保证吸收完全都是为了保证吸收完全例：碘产生紫色烟雾；氯、氟产生白色烟雾，烟例：碘产生紫色烟雾；氯、氟产生白色烟雾，烟雾颜色完全消失后，即表示吸收完全雾颜色完全消失后，即表示吸收完全测定含氟有机化合物时要用石英燃烧瓶测定含氟有机化合物时要用石英燃烧瓶4 4、应用、应用 含含卤素、硫、磷、氟及硒卤素、硫、磷、氟及硒等有机药物的鉴别、等有机药物的鉴别、杂质的检查及含量测定杂质的检查及含量测定例例 碘苯酯的含量测定碘苯酯的含量测定 ChPChP（20102010）原理原理 碘苯酯为有机碘化物，用氧瓶燃烧分解，碘苯酯为有机碘化物，用氧瓶燃烧分解，

38、转变为碘化物，继而氧化为游离的碘，并被定转变为碘化物，继而氧化为游离的碘，并被定量地吸收于吸收液（氢氧化钠），生成碘化物量地吸收于吸收液（氢氧化钠），生成碘化物与碘酸盐，加入溴与碘酸盐，加入溴- -醋酸溶液，使全部转变为碘醋酸溶液，使全部转变为碘酸盐，过量的溴以甲酸及通空气去除。加入碘酸盐，过量的溴以甲酸及通空气去除。加入碘化钾，使与碘酸盐反应析出游离碘，用硫代硫化钾，使与碘酸盐反应析出游离碘，用硫代硫酸钠液滴定，碘与淀粉结合所显的蓝色消失即酸钠液滴定，碘与淀粉结合所显的蓝色消失即为终点为终点碘苯酯（有机碘化物）碘苯酯（有机碘化物）氧瓶燃烧氧瓶燃烧碘化物碘化物氧化氧化碘化物与碘酸盐碘化物与碘酸

39、盐游离碘游离碘紫色烟雾紫色烟雾氢氧化钠吸收液氢氧化钠吸收液加溴加溴- -醋酸液醋酸液碘酸盐碘酸盐过量，以甲酸及通空气除去碘化钾碘化钾游离碘游离碘硫代硫酸钠硫代硫酸钠淀粉淀粉 终点终点蓝色消失蓝色消失溶液中要标定例：例： 氧瓶燃烧法中的装置有：氧瓶燃烧法中的装置有：A.A. 磨口硬质玻璃锥形瓶磨口硬质玻璃锥形瓶 B. B. 磨口软质玻璃锥形瓶磨口软质玻璃锥形瓶C. C. 铂丝铂丝D. D. 铁丝铁丝E. E. 铝丝铝丝例：选择氧瓶燃烧法所必备的实验物品例：选择氧瓶燃烧法所必备的实验物品A.A. 磨口硬质玻璃锥形瓶磨口硬质玻璃锥形瓶 B. B. 铂丝铂丝C. C. 普通滤纸普通滤纸D. D. 氢气

40、氢气 E. E. 无灰滤纸无灰滤纸第三节第三节 药品质量标准分析方法验证药品质量标准分析方法验证目的：目的：证明所采用的分析方法适合于相应的检测证明所采用的分析方法适合于相应的检测要求，方法验证过程和结果均应记载在药品标要求，方法验证过程和结果均应记载在药品标准起草和修订说明中准起草和修订说明中用途：用途： 药品质量标准起草时，分析方法需经验证药品质量标准起草时，分析方法需经验证 药物合成方法变更、制剂的组分变更、原分药物合成方法变更、制剂的组分变更、原分析方法进行修订时，分析方法需经验证析方法进行修订时，分析方法需经验证需验证的分析项目需验证的分析项目1. 1. 鉴别试验鉴别试验2. 2.

41、杂质定量或限度检查杂质定量或限度检查3. 3. 原料或制剂中有效成分含量测定原料或制剂中有效成分含量测定4. 4. 制剂中其它成分（降解产物、防腐剂等）制剂中其它成分（降解产物、防腐剂等）的测定的测定5. 5. 溶出度、释放度等功能检查中的溶出量等溶出度、释放度等功能检查中的溶出量等的测试方法的测试方法药品质量标准分析方法药品质量标准分析方法验证内容有验证内容有： 准确度、精密度（重复性、中间精密度准确度、精密度（重复性、中间精密度和重现性）、专属性、检测限、定量限、线和重现性）、专属性、检测限、定量限、线性、范围和耐用性性、范围和耐用性一、准确度一、准确度 定义定义：表示分析结果与真实值接近

42、的程度。准：表示分析结果与真实值接近的程度。准确度一般以百分回收率表示。确度一般以百分回收率表示。1.1.含量测定方法的准确度含量测定方法的准确度 （1 1）原料药的含量测定）原料药的含量测定 加入量加入量测得量测得量回收率回收率100 （2 2）制剂的含量测定）制剂的含量测定已已知知制制剂剂各各组组分分加加入入量量测测得得量量回回收收率率100 不不能能获获得得制制剂剂各各组组分分加加入入量量测测得得量量本本底底量量回回收收率率100 2 2、杂质定量测定的准确度、杂质定量测定的准确度 可向原料药或制剂中加入已知量杂质进行可向原料药或制剂中加入已知量杂质进行测定测定 3 3、数据要求、数据要

43、求 在规定范围内，至少用在规定范围内，至少用9 9次次测定结果进行评价测定结果进行评价 例如制备例如制备3 3个不同浓度的样品，各测定个不同浓度的样品，各测定3 3次次要求：要求：（1 1）加入的对照品浓度应为高、中、低三个浓度，）加入的对照品浓度应为高、中、低三个浓度，每个浓度测定三次，每个浓度测定三次，（2 2）UVUV和和HPLCHPLC法：法： 98%-102%98%-102%（3 3）容量分析法：）容量分析法： 99.7%-100.3%99.7%-100.3%二、精密度二、精密度 精密度是指在规定的条件下，精密度是指在规定的条件下，同一个均匀同一个均匀样样品，经过多次取样测定所得结果

44、之间的接近程品，经过多次取样测定所得结果之间的接近程度。度。（一）精密度的表示方法（一）精密度的表示方法 可用可用偏差偏差、标准偏差标准偏差或或相对标准偏差相对标准偏差 ( (变异变异系数系数) ) 表示表示1.1.偏差偏差 测量值与平均值的差称为偏差，用测量值与平均值的差称为偏差，用D D表示。偏差表示。偏差越大，精密度越低。越大，精密度越低。 XXd 测量值平均值测量值平均值偏差：偏差：%100100 XdRD平均值平均值偏差偏差相对偏差：相对偏差：根据分析所用的方法不同，允许的相对偏差不同根据分析所用的方法不同，允许的相对偏差不同2.2.标准偏差标准偏差 标准偏差是偏差平方的统计平均值，

45、又称标准偏差是偏差平方的统计平均值，又称为均方根偏差。当测定次数为均方根偏差。当测定次数n n为有限次时，标为有限次时，标准偏差（准偏差（s s）3.3.相对标准偏差（相对标准偏差（RSDRSD） * *容量分析容量分析 法：法：0.2%0.2%（n=5n=5）* *UVUV法：法：1%1%（n=3n=35 5）* *HPLCHPLC法：法：2%2%（n=3n=35 5）变异系数变异系数, ,通常用百分数表示通常用百分数表示 （二）重复性、中间精密度和重现性（二）重复性、中间精密度和重现性1.1.重复性重复性 在规定的范围内，至少用在规定的范围内，至少用9 9次次测定结果进行评测定结果进行评价（三个不同浓度的样品，各测定价（三